卧龙自然保护区内一例病死野猪的病原检测

施小刚，钟锐，黄迪，周潇潇，李敏，彭广能，张静，何廷美*

（1.四川卧龙国家级自然保护区管理局，四川 汶川 623000；2.四川农业大学动物医学学院，四川 成都 611130；3.四川省成都市动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；4.四川省汶川县卧龙特别行政区，四川 汶川 623000）

猪瘟、非洲猪瘟、蓝耳病、口蹄疫、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）感染、猪丹毒杆菌病、猪巴氏杆菌病、猪链球菌病是目前危害家猪比较严重的8 大疾病，这些疾病同样对野猪种群存在威胁。2020年4 月2 日，卧龙自然保护区巡护工作人员于卧龙耿达镇崔家磨子沟处发现一只野猪侧躺于沟谷旁，呼吸微弱，未见明显外伤，驱赶不能站立行走，后经抢救无效死亡。遂对病死野猪进行以上8种猪病病原检测，以探明病因。

1 材料与方法

1.1 临床和剖解症状 野猪体况较差，毛发根部有出血点，天然孔未见出血；体表有多量蜱虫寄生，四肢、头面部、肩胛部有大面积脱毛及皮屑。剖解可见腹腔中脾脏体积偏小，胃部有出血点，小肠轻微粘连，盲肠中有大量泥沙碎石沉积，体积膨大，未见腹水；胸腔脏器未见明显异常。

1.2 病料 采集病死野猪的脾脏及血液样本进行检测。

1.3 病原检测

1.3.1 样品处理 取无菌的2 mL Lysing Matrix组织研磨管，加入1 mL PBS 液，再加入适量脾脏组织样品，置于FastPrep-24™5G 研磨仪中研磨，8 000 r/min 离心1 min，取上清液保存于-20 ℃备用。脾脏研磨上清液待检样品编号01、02，血液上清待检样品编号03，相应阴性对照编号04，阳性对照编号05。

1.3.2 DNA/RNA 的抽提 参照北京世纪元亨生物科技有限公司的磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒说明书，配合KingFisher DUO自动化提取仪器，执行Tian_KingFisher_Duo.bdz 程序进行DNA抽提。程序执行完毕，取出DNA，用封口膜封好并保存于-20 ℃备用。

表1 核酸扩增体系及程序

1.3.3 扩增反应 参照不同通用型单重荧光PCR检测试剂盒，对猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、蓝耳病病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪丹毒杆菌、猪巴氏杆菌、猪链球菌核酸进行qPCR或者qRT-PCR扩增，扩增体系和程序见表1。

2 结果

核酸结果显示PCV2呈阳性（见表2），猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、蓝耳病病毒、口蹄疫病毒、猪丹毒杆菌、猪巴氏杆菌、猪链球菌的核酸检测结果均为阴性。最终诊断该野猪感染了PCV2。

表2 猪圆环病毒Ⅱ型荧光定量PCR结果判定

3 分析与讨论

在猪身上已经有四种不同的圆环病毒亚型被鉴定出来，而PCV2 被认为是一种经济上具有挑战性的重要病原体［1］。PCV2 感染可能会导致机体内淋巴细胞凋亡、干扰素生成受阻，使机体免疫反应降低，严重的会引起免疫抑制和多系统病变［2］。PCV2病毒具有高进化率的特点，可能以突变的形式逃避免疫应答，使得免疫失效，所以对PCV2 的预防和治疗难度较大［3-4］。本例病死野猪检测出PCV2 呈阳性,推测可能是种群携带所致，溯源及流行情况需要更多的样本来探究。野生动物由于环境压力、食物限制以及天敌威胁等因素存在自然淘汰的现象，更应当注意并监测病毒携带情况，否则容易引起致病种群数量的骤减。

随着经济发展，野生动物栖息地与人类生活区域的重合范围越来越广，野生动物和家养动物之间传播疫病的风险也随之提高。有报道［5］指出野猪可能是PCV2的长期寄主，并且能将PCV2传播到相对较远的地区，其种群携带率可能超过50%。另有报道［6］显示圆环病毒可以在家猪和野猪之间传递，这种传递对野生种群存在威胁，但仍需要更多的数据来支持并发现其传播途径，评估其对野生动物健康和生态的实际影响。