红豆杉叶干粉对仙居鸡肌肉品质和紫杉醇含量的影响

刘银兰 李国勤 叶 轩 李浙烽 赵 威 冯佩诗 顾天天 卢立志*

（1.福建农林大学，福建福州350000；2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江杭州310021；3.浙江省仙居种鸡场，浙江台州311719；4.杭州康德权饲料有限公司，浙江杭州311107）

随着社会的发展和生活水平的不断提高，畜产品安全和品质成为人们关注的焦点[1]，中草药因毒副作用小、无残留、无污染被广泛应用到畜禽生产中[2]。邱玉朗等[3]研究发现，用黄芪、穿心莲提取物和陈皮组成的复方中草药代替抗生素作为饲料添加剂应用到动物生产中，可改善肉色、提高鸡肉嫩度和适口性，提升肌肉的保水能力。陈国顺等[4]发现将复方中草药替代抗生素作为饲料添加剂添加到肉仔鸡饲粮中，可提高肉仔鸡的肉质性状。钟敏等[5]报道将由板蓝根、益母草、大青叶等组成的复方中草药添加到三黄鸡基础日粮中，可促进三黄鸡肌肉的含水率、减少脂肪过多沉积、提高肌肉中氨基酸的含量等。红豆杉，为红豆杉科属种植物，是四季常青类乔木或灌木，有较好的药用价值和疗效，其物种稀缺、资源宝贵[6]。从红豆杉中大概能分离出500 余种紫杉烷类化合物[7]，大量研究者发现紫杉醇中紫杉烷类化合物具有较好的抗癌作用[8]。紫杉醇在1992 年12 月被允许上市，在肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症的治疗中有着重要作用[9]。红豆杉作为中草药的一种，应用于畜禽生产方面的研究甚少，本试验拟通过研究仙居鸡饲料中添加不同水平红豆杉叶干粉对肌肉肌苷酸、肌内脂肪、胆固醇含量的影响及紫杉醇在鸡肉中的富集量，为红豆杉叶干粉在家禽饲料中科学合理利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

红豆杉叶干粉：试验选用红豆杉叶干粉为2018年自红豆杉树修剪下的枝叶，自然光照晒干后粉碎而成，紫杉醇含量为19.6 μg/g，由浙江武义曼地亚红豆杉开发研究有限公司提供。

1.2 试验设计

试验选取140 日龄、健康状况良好的仙居鸡400只，随机分成4组，每组5个重复，每个重复20只。A组为对照组，饲喂基础日粮，B、C、D组为试验组，在基础饲粮中分别添加2%、3%和4%红豆杉叶干粉。基础日粮由浙江省仙居种鸡场提供，日粮组成及营养水平见表1。试验鸡采用双层式阶梯笼养，鸡舍为半封闭式，自然光照和通风，试验期90 d。整个试验期间，鸡只自由采食粉状饲料、自由饮水，试验过程详细记录各组鸡的健康情况，按鸡场正常免疫程序进行免疫和消毒，饲养管理条件保持一致。

1.3 组织样品的采集

在试验第60、90 d 时，A、B、C 组和D 组仙居鸡以各组重复为单位，每个重复选取1只鸡，共20只，屠宰剥离胸肌、腿肌、肝脏，装于密封袋，-80 ℃冰箱冻存备测。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 胸肌、腿肌、肝脏中紫杉醇含量的检测

表1 基础日粮组成及营养水平

检测参照赵文艳等[10]采取高效液相色谱(HPLC)法进行紫杉醇含量测定。将胸肌、腿肌、肝脏用匀浆仪搅拌制成匀浆液，取250 μl，内标以地西泮作为参照，加入0.5 mol/l碳酸氢钠碱化后，用乙醚进行提取，取其上清液，放置于水浴锅进行挥发水分，用75 μl流动相进行溶解,结束时取10 μl 进行高效液相色谱法测定紫杉醇含量。

1.4.2 肌苷酸含量的检测

参照徐琪等[11]方法进行肉质样品的制备：用电子天平称取1.25 g 冰冻肉质样品，用剪刀在培养皿中将其剪碎，加4 ml 6% HClO4后放置于匀浆管中进行匀浆，且将匀浆液转移至10 ml 离心管中，加入1 ml 6% HClO4到匀浆管中进行洗涤，洗涤后倒入离心管中，4 000 r/min 离心4 min，离心后将上清液倒入50 ml 烧杯中，静置5 min，用2 ml 6% HClO4振荡5 min 后进行离心，此次上清液与前次进行合并，分别用5、0.5 mol/l NaOH 将pH 值调至6.5，然后转移到25 ml 容量瓶，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，用0.45 μm 滤膜进行过滤，留取滤液进行高效液相色谱分析。

1.4.3 肌内脂肪含量的检测

参照李忠荣[12]方法进行检测，在室温下将冷冻样品进行解冻，解冻后剥离其表面肉眼可见的白色脂肪，放置于绞肉机中绞碎制成样品。用电子天平称取3.5 g 样品，放置于2 张滤纸上，加入10 g 黄砂后进行烘干称重。将含有样品的滤纸包烘干，称重后放入索氏提取器中，进行操作处理。

1.4.4 胆固醇含量的检测

参照侯永刚等[13]的方法宰杀采血后的鸡只，将胸肌、腿肌、肝脏进行剥离后，称取0.5 g样品，加入生理盐水置于匀浆管中进行匀浆，将匀浆后的匀浆液称取3 000 g进行离心10 min，取2 ml的上清液放置于水浴锅中用N2吹干，加入10 ml KOH-醇溶液(12% KOH用90%乙醇新鲜配制)在残渣中，在80 ℃水浴中皂化15 min。皂化结束后取出试管，加入5 ml蒸馏水，在室温下冷却。非皂化部分则用10 ml己烷进行提取，待静置分层后量取5 ml己烷提取液，在65 ℃水浴中用N2吹干。

1.5 数据分析

所有试验数据使用Excel 2007 进行整理，采用SPSS 17.0 软件对数据进行方差分析，并采用LSD 检验法进行各组间差异显著性检验，P<0.05 为差异显著。试验数据以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 红豆杉叶干粉对仙居鸡胸肌、腿肌和肝脏中紫杉醇沉积量的影响

表2 不同红豆杉叶干粉添加水平对仙居鸡胸肌、腿肌、肝脏中的紫杉醇含量的影响(mg/kg)

由表2 可知，在试验期第60 d，A 组鸡胸肌、腿肌和肝脏中均未检测到紫杉醇的含量，B、C组和D组鸡胸肌、腿肌和肝脏中虽可以检测到紫杉醇的含量，但是各组之间紫杉醇含量差异不显著（P>0.05）；在试验期第90 d，A组鸡胸肌中未检测到紫杉醇含量，C、D组鸡胸肌中紫杉醇含量显著高于B 组（P<0.05），C、D 组间紫杉醇含量差异不显著（P>0.05）。B、C、D组间的腿肌中紫杉醇含量差异不显著（P>0.05），D 组肝脏中紫杉醇含量显著高于B组（P<0.05），C、D组间差异不显著（P>0.05）。

2.2 红豆杉添加水平对胸肌肌苷酸、肌内脂肪、胆固醇含量的影响

由表3 可见，D 组鸡胸肌肌苷酸含量显著高于A组和C 组（P<0.05），其他各组之间均差异不显著（P>0.05）；C、D 组胸肌肌内脂肪含量显著高于A 组（P<0.05），C 组显著高于B 组（P<0.05），其他各组之间均差异不显著（P>0.05）；D 组胸肌胆固醇含量显著低于A组（P<0.05），其他各组之间均差异不显著（P>0.05）。

表3 不同红豆杉叶干粉添加水平对仙居鸡胸肌肌苷酸、肌内脂肪、胆固醇含量的影响(mg/kg)

2.3 红豆杉添加水平对腿肌肌苷酸、肌内脂肪、胆固醇含量的影响

由表4可见，各组间腿肌肌苷酸含量间差异不显著（P>0.05）；B组腿肌肌内脂肪含量显著低于A组（P<0.05），其他各组间差异不显著（P>0.05）；各组间腿肌胆固醇含量差异不显著（P>0.05）。

表4 不同红豆杉叶干粉添加水平对仙居鸡腿肌肌苷酸、肌内脂肪、胆固醇含量的影响(mg/kg)

2.4 红豆杉添加水平对肝脏脂肪、胆固醇含量的影响

由表5可见，各组间肝脏内脂肪和胆固醇含量差异不显著（P>0.05）。

表5 不同红豆杉叶干粉添加水平对仙居鸡肝脏脂肪、胆固醇含量的影响(mg/kg)

3 讨论

3.1 红豆杉叶干粉对仙居鸡胸肌、腿肌和肝脏中紫杉醇沉积量的影响

紫烷二萜类化合物中的紫杉醇是Wani 等[14]最早在分离短叶红豆杉树皮中的成分时发现的，并且确定了其化学结构。Manthey等[15]发现紫杉醇具有抗有丝分裂和抗肿瘤的作用。紫杉醇的抗癌机制是抑制微管解聚，阻止肿瘤细胞有丝分裂的进行，加快肿瘤细胞的凋亡[16]。赵燕等[17]在肉鸡饲料中添加3%的红豆杉后，发现紫杉醇可以沉积在鸡肉和肝脏中，且肝脏中紫杉醇的沉积量最多。Wang 等[18]发现大鼠静脉注射紫杉醇后,体内各个组织中都有少量紫杉醇的存在，并以肝脏和脾脏中含量最高。孟素蕊等[19]报道小鼠尾静脉注射紫杉醇注射液后，肝脏中紫杉醇的含量最高，肾脏次之。这些都说明了紫杉醇不论是以注射液的形式，还是在饲料中添加红豆杉的形式进入动物机体后，红豆杉中的紫杉醇都会沉积到体内的各个组织，且在肝脏中紫杉醇的沉积量最多。本试验还发现，仙居鸡采食红豆杉叶干粉后，红豆杉叶干粉中的紫杉醇可以从饲粮中转移到肌肉和肝脏中，说明可以将仙居鸡肌肉和肝脏作为紫杉醇的载体，但紫杉醇在肌肉中的含量较低，可能是肝脏对红豆杉叶干粉中紫杉醇进行代谢时在肝脏中沉积比较多，而肠道吸收的紫杉醇量有限，所以通过血液运输到肌肉中的量比较少，在鸡肉中紫杉醇的沉积就比较少。韩锐等[20]研究发现对大鼠注射紫杉醇后，紫杉醇主要在肝脏中代谢，通过胆汁进行清除，这也和本试验结果吻合。

3.2 红豆杉叶干粉对仙居鸡肌肉肌苷酸含量的影响

随着经济的快速发展和生活品质的提高，具有独特品质、口味鲜美的肉类受到消费者们的关注[21]，由于各种添加剂的使用逐渐趋于普遍，动物生长的速度不断提高，肉制品品质和口感越来越差[22-23]。而保持动物性产品肉质口感和风味的物质主要是肌苷酸的含量[24-25]，肌苷酸含量的高低间接反映其鲜味和口感，已被普遍应用到各种动物性肉质产品的评定中，是肉品质评定的重要指标[26-27]。叶伟庆等[28]和Jay⁃asena 等[29]研究发现，不同性别的鸡肌苷酸在不同部位代谢均有差异，而肌苷酸在不同部位所累积的含量也出现了很大的差异[30-31]。陈国宏等[32]对不同鸡种的肌肉肌苷酸含量进行了分析研究，发现不同品种、日龄、性别和部位肌苷酸含量存在很大的差异。本试验在仙居鸡饲粮中添加不同水平的红豆杉叶干粉时发现，D 组鸡胸肌的肌苷酸含量显著高于A 组，说明在饲粮中添加红豆杉可以改善鸡肉中肌苷酸的含量。

3.3 红豆杉添加水平对肌内脂肪含量的影响

人类主要的蛋白质来源是由动物源性蛋白提供的[33]。相关研究发现肌肉的嫩度、风味、大理石纹等肉质特征与肌内脂肪的含量紧密相关[34]。肌内脂肪含量的多少直接影响着肌肉的嫩度和风味，是评定肉类品质的重要条件之一[35-36]。当肌内脂肪含量在1%～3%之间逐渐增加时，肌纤维之间相连接的结缔组织也就越少，肌肉整体的剪切力降低，此时肌纤维会越细，而肉的口感、嫩度会越好。当肌内脂肪的含量超过3%时，肉品入口会发腻，低于2%时肌肉水分含量较少，肉类品质就会出现干瘪，所以肌内脂肪的最适含量在2%～3%[37-38]。本试验仙居鸡饲料中添加不同水平的红豆杉叶干粉后，胸肌中肌内脂肪的含量在2.5%～3.0%之间，腿肌中肌内脂肪含量在2.0%～2.5%之间。肌内脂肪、皮下脂肪、内脏脂肪的代谢存在着差异，虽然都属于白色脂肪,但相比较而言肌内脂肪的沉积速率较慢[39-41]。付睿琦等[42]的研究结果显示，胸肌肌内脂肪先于皮下脂肪和腹脂进行沉积，但肌内脂肪没有腹脂的沉积速度快。陈国宏等[43]指出在不同部位肌内脂肪含量存在着差异，胸肌、腿肌中的脂肪含量显著低于肝脏中的含量，而腿肌中的脂肪含量又低于胸肌中的含量。红豆杉叶干粉对仙居鸡肌内脂肪、皮下脂肪、内脏脂肪代谢的影响有待进一步研究。

3.4 红豆杉添加水平对胆固醇含量的影响

胆固醇在人体正常生理活动中有着重要作用。但是，如果人们长期摄入胆固醇含量过高的肉制品，就会出现动脉硬化、高血压等疾病[44]。鸡肉作为备受青睐的肉制品之一，降低各组织中胆固醇的含量尤为重要。赵燕等[45]发现在广西三黄鸡基础日粮中添加红豆杉干粉可促进肉鸡生长，改善肉质性状，降低血清、肝脏及胸肌中的胆固醇含量。而中草药中含有的某些类黄酮物质具有抗氧化的特性和降低胆固醇含量等作用[46-48]。目前对红豆杉叶干粉的研究多集中在其自身的药用价值和提取方面[49-50]，将红豆杉叶干粉直接作为饲料添加剂应用到畜禽生产中，目前鲜有报道。本试验在仙居鸡饲粮中添加不同水平的红豆杉叶干粉，研究发现仙居鸡胸肌中的胆固醇含量呈现出下降的趋势，这可能与红豆杉叶干粉中含有的黄酮类物质有关。姜义宝[51]发现黄酮类物质可以显著提高肉羊的日增重（P<0.05)，明显降低料重比（P<0.05)，显著降低甘油三酯和总胆固醇。

4 结论

添加不同水平的红豆杉叶干粉可以改善肌肉品质、降低胆固醇的含量，同时紫杉醇可以沉积到肌肉和肝脏中，且在肝脏中紫杉醇沉积量较高。本试验条件下，建议红豆杉叶干粉的添加量为4%。