利用微卫星DNA标记鉴定宁乡猪亲子血缘关系

贺兴龙 张一君 曾青华 张旭 马海明

摘  要：为鉴定宁乡猪血缘关系，本研究以宁乡猪为研究对象，采用聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction，PCR）对14个微卫星DNA标记进行擴增，利用全自动测序仪通过毛细管电泳技术进行分型，对257头宁乡猪进行了亲子鉴定。本研究为宁乡猪的保种和产业化提供了有益的资料。

关键词：宁乡猪;微卫星DNA;血缘关系鉴定

宁乡猪是著名的地方猪品种，先后被列入“湖南省家畜家禽品种志和品种图谱”和“中国猪品种志”，1984年对其制定了国家标准（GB/T2773-1981）。宁乡猪因主要分布在宁乡县流沙河、草冲一带而得名。其突出特点是早熟易肥、蓄脂力强、肌肉细嫩和肉味鲜美。随着宁乡猪产业的快速发展，对其进行亲子血缘关系鉴定显得十分重要。微卫星DNA属于第三代遗传标记，具有多态性丰富、呈共显性和简单易行等特点，可用于亲子血缘关系鉴定。本研究利用14个微卫星DNA标记，通过计算排除概率可进行亲子血缘鉴定，以期为宁乡猪的保种选育提供理论依据。

1  材料与方法

1.1 样本采集

用耳钳剪取257头宁乡猪小块耳组织，-20 ℃保存备用。

1.2 DNA提取及聚合酶链式反应

按常规酚-氯仿法提取基因组DNA。聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增条件为：95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，56 ℃复性30 s，72 ℃延伸30 s，共计40 个循环，最后60 ℃延伸30 min。

1.3 微卫星DNA分型

利用全自动测序仪对PCR产物进行测序，确定等位基因片段大小，毛细管电泳后分型，参照DNA分子量标记，利用ABI遗传分析仪对荧光标记的DNA片段进行检测。微卫星DNA标记SWC59如图 1 所示。

2  结果与分析

通过14个微卫星DNA标记研究了124头后代个体与133个候选母本的亲子关系。共获得14个微卫星DNA标记的172个等位基因，SW2496、SW1400和 SW1047等位基因数分别为20个、19个和18个。各个基因座的基因杂合度也不同，SW1918最高，其杂合度是0.846，SW963最低，其杂合度是0.288，各个基因座的平均杂合度是0.625。亲子鉴定部分结果如表1所示。

3  讨论与结论

由于混合授精、多次授精和记录错误等原因，在猪场进行亲子鉴定十分重要。亲子鉴定的方法很多，包括利用第一代、第二代和第三代遗传标记，但第三代遗传标记——微卫星DNA标记效果最好。本研究利用14个微卫星DNA标记对267头宁乡猪进行了亲子鉴定，结果可靠准确。