不同方法测定饲料中的中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维含量分析

李 博，张丹丹，程 景，靳 光，王栋才，孙锐锋，徐 芳，梁 圆，张元庆

（山西农业大学（山西省农业科学院）动物科学学院，山西太原 030032）

传统测定饲料中粗纤维（CF）的方法是经过稀酸、稀碱处理后烘干可得，此方法测定的结果仅包括部分纤维素、半纤维素和木质素，测得的结果会低于实际测定结果[1]。Van Soest 等[2]在1991 年提出测定饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的方法，主要是通过消煮、过滤法进行参比分析，目前仍是学界公认的精准度较高的方法。在此原理基础上，发展了滤袋法、ANKOM 纤维仪法[3-4]。朱立涛等[5]、张崇玉等[6]用滤袋法测定了饲料原料的CF 含量，同时以国标法测定结果验证了滤袋法测定结果的准确性，表明滤袋法测定粗纤维是可行的。刘磊等[7]采用滤袋法测定了饲料CF、NDF 和ADF 残渣中各成分含量。国内研究已对滤袋法和ANKOM 测定方法进行改进[8-9]。但ANKOM原装滤袋价格昂贵，为了节约成本，同时探索一种测定NDF、ADF 准确高效的方法，本试验将传统滤袋用于ANKOM 仪器中测定饲料中NDF、ADF，并采用滤袋法和ANKOM 纤维仪法验证其测定准确性及可行性，为饲料中NDF、ADF 的不同测定方法分析以及饲料数据库建立时的差异分析提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验选取13 个高纤维、低纤维饲料（小麦秸、构树、连翘、苜蓿、苜蓿青贮、全株玉米青贮、豆科青贮、精料、白酒糟、豆粕、玉米胚芽饼、DDGS、喷浆玉米），65℃烘干制成风干样品，粉碎，过40 目筛，然后将样品充分混合均匀，密封保存以备分析测定。

饲料纤维分析滤袋（传统滤袋）由北京一牛肉牛信息技术研究中心研制，进口特制无纺布，42 mm×53 mm，孔径38～45 μm。ANKOM 专用滤袋F57（ANKOM 2000i 型全自动纤维分析仪，孔径25 μm，美国ANKOM 科技公司）。

1.2 滤袋法测定NDF、ADF 含量

1.2.1 滤袋法测定饲料NDF 含量 ①将滤袋用2B 铅笔编号后置于105℃烘箱中烘干，称重。②样品烘干称重，计算水分或干物质含量。③称取风干饲料样品0.5～0.6 g，无损转移至滤袋中，并用塑料袋封口机封口。每个样品做4 个平行样。④在600 mL 高腰烧杯中加入约260 mL中性洗涤剂、2～3 滴十氢化萘、耐高温α-淀粉酶6 mL和0.5 g 无水亚硫酸钠，再放入3～4 个已装好样品的滤袋，并放置压块。⑤套上冷凝装置，在调温电炉上加热，煮沸1 h。⑥煮沸完毕后取出滤袋，并用热水冲洗和洗衣机甩干5 次以上，直至洗液中无泡沫，再用20 mL丙酮冲洗2 次。⑦将滤袋置于105℃烘箱中烘干，称重。

1.2.2 滤袋法测定饲料ADF 含量 ①同1.2.1 测定步骤①、②和③。②在600 mL 高腰烧杯中加入约260 mL酸性洗涤剂、2～3 滴十氢化萘，再放入3～4 个已装好样品的滤袋，并放置压块。③同1.2.1 测定步骤⑤。④煮沸完毕后取出滤袋，用热水冲洗和甩干滤袋至洗液呈中性，再用少量的丙酮冲洗2 次。⑤同1.2.1 测定步骤⑦。

1.3 ANKOM 测定饲料NDF、ADF 含量 使用ANKOM专用滤袋F57，操作步骤遵循ANKOM 2000i 的操作说明。每个饲料样品做4 个平行，样品称样0.5～0.6 g。

1.4 ANKOM（传统滤袋）测定饲料NDF、ADF 含量使用传统滤袋，具体操作步骤遵循ANKOM 2000i 的操作说明。每个饲料样品做4 个平行，样品称样0.5～0.6 g。

1.5 统计分析 试验数据用Excel 2016 整理，以平均值±标准差的方式表示。使用SPSS 21.0 对变量结果进行配对样本T 检验及线性回归分析，P＞0.05 为差异不显著，P＜0.05 为差异显著。

2 结果

2.1 不同方法测定饲料中NDF 含量的分析 由表1 可知，经过配对样本T 检验分析，ANKOM 纤维仪法、ANKOM 纤维仪（传统滤袋）与滤袋法以及ANKOM纤维仪（传统滤袋）与ANKOM 纤维仪法配对分析测定结果差异均不显著。

2.2 不同方法测定饲料中ADF 含量的分析 由表2 可知，ANKOM 纤维仪法、ANKOM 纤维仪（传统滤袋）与滤袋法经过配对以及ANKOM 纤维仪（传统滤袋）与ANKOM 纤维仪法配对分析测定结果差异均不显著。

表1 不同方法测定饲料中的NDF 含量的分析（风干基础） %

2.3 ANKOM 测定饲料中的NDF、ADF 含量校正结果以滤袋法测定饲料中的NDF、ADF 结果校正ANKOM纤维仪法和ANKOM 纤维仪（传统滤袋）测定结果，建立的回归公式极显著（P＜0.001），ANKOM 纤维仪法和ANKOM 纤维仪（传统滤袋）测定结果与滤袋法测定结果有密切的相关性，建立的公式有意义（表3）。

3 讨 论

Van Soest 等[2]提出的测定NDF、ADF 方法，虽说仍是国际上公认的测定NDF、ADF 准确度较高的方法，但在实际测定过程中发现煮沸时间、消煮方式、饲料质量、洗涤液比例、过滤时滤孔的孔径大小以及滤膜面积等均会对饲料NDF、ADF 的测定结果产生影响[10-12]。另外在测定过程中，每次消煮只能测定一个样品，测定量少；消煮过程中，温度及冷凝水调节不当时会造成洗涤剂沸腾，且在抽滤过程中容易造成样品损失。

表2 不同方法测定饲料中的ADF 含量的分析（风干基础） %

表3 不同方法测定饲料中NDF、ADF 含量校正结果

滤袋法是在Van Soest 法的基础上，改进得到的一种精确、简便的方法。使用滤袋法测定时可将多个滤袋放于同个烧杯中一起消煮，可以扩大样品测定量；在洗涤过程中省去抽滤步骤，避免抽滤耗时耗力，而滤袋也因其独特的材质可避免洗涤时造成的包装破裂样品损失。所以滤袋法测定同时可以批量测定多个样品，既提高了试验测定的准确度、精确度；也提高了试验的效率，节省时间[4]。杨喆等[13]利用滤袋法测定苜蓿草中粗纤维的含量，操作方法简单，检测效率高，且适用于大批量测定；张晨等[14]研究表明聚酯网袋法与国标法测定饲料的CF 以及滤袋法与国标法测定饲草中NDF、ADF含量结果[15]均差异不显著，且用滤袋法效率高、成本低，精密度优于国标法。

ANKOM 纤维仪法相较于滤袋法，可以解决因加热不均造成的洗涤剂浓度变化引起的测定误差，减少了因人为操作造成的测定误差，且试验操作过程简单、安全，测定样品量更大。Nguyen 等[16]分别按照AOAC 991.43 和AOAC 2011.43 方法用ANKOM 仪器测定日粮总纤维以及可溶性和不溶性纤维的含量无差异，表明ANKOM 仪器测定纤维含量准确率较高。但ANKOM纤维仪价格昂贵，原装滤袋价格较高。

利用滤袋法和ANKOM 纤维仪法测定饲料NDF、ADF 时，称取的样品质量均为0.5～0.6 g，相较于Van Soest 法，滤袋法和ANKOM 法省去了抽滤的过程，消除了因为抽滤产生的误差。滤袋材质及孔径的大小同样会影响纤维的测定结果[17]，一般纤维测定仪会配有专用的纤维滤袋，ANKOM 纤维滤袋价格昂贵，来源单一，测定样本量大时费用较高。因此，本研究设计了利用传统滤袋代替ANKOM 滤袋测定饲料NDF、ADF 含量试验，各操作步骤与ANKOM 纤维仪法均保持一致，所用饲料来自同一批，消除因饲料原料、操作等不同造成的测定误差。通过与滤袋法配对样本T 检验分析试验结果，NDF、ADF 测定结果差异均不显著，表明用传统滤袋代替ANKOM 原装滤袋测定饲料中的NDF、ADF 含量是可行的。在此基础上，本研究建立了滤袋法校正ANKOM 法（传统滤袋）测定测定饲料中的NDF、ADF 含量回归公式，说明ANKOM 纤维仪法和ANKOM 纤维仪（传统滤袋）测定结果与滤袋法测定结果有密切的相关性，建立的公式有意义。

4 结 论

本研究通过配对样本T 检验分析，使用传统滤袋代替ANKOM 滤袋测定饲料NDF、ADF 含量差异不显著，可以用传统滤袋代替ANKOM 原装滤袋测定饲料中的NDF、ADF 含量。不同方法测定测定饲料中的NDF、ADF 含量建立的校正公式分别为NDF滤袋法=-1.46+1.064NDFANKOM（R2=0.923，P＜0.001），NDF滤袋法=0.786+0.993NDFANKOM（传统滤袋）（R2=0.884，P＜0.001）；ADF滤袋法=0.545+1.026ADFANKOM（R2=0.954，P＜0.001），ADF滤袋法=1.176+0.996ADFANKOM（传统滤袋）（R2=0.936，P＜0.001）。