血小板糖蛋白受体Ⅲa的PLA1/A2多态性与子痫前期患者遗传易感性的相关性

程淑清 陈安儿

[摘要] 目的 探讨血小板糖蛋白受体Ⅲa（GPⅢa）基因PLA1/A2多态性与子痫前期（PE）遗传易感性的相关性。方法 选取2016年9月～2018年9月于本院住院分娩的PE患者120例为PE组，对照组为120例正常妊娠妇女。采用常规检测收集普通风险指标并比较其在PE 组及对照组之间的差异。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测GPⅢa的PLA1/A2多态性，分析血小板糖蛋白受体Ⅲa（GPⅢa）的PLA1/A2多态性与子痫前期患者遗传易感性的相关性。 结果 对照组和PE组A1/A1、A1/A2、A2/A2基因型频率分别为75.0%（90/120）、23.3%（28/120）、1.7%（2/120）和70.0%（84/120）、26.7%（32/120）、3.3%（4/120），差异无统计学意义（P>0.05）;对照组和PE组的等位基因频率A1、A2分别为76.3%（116/152）、23.7%（36/152）和79.7%（118/148）、20.3%（30/148），差异无统计学意义（P>0.05）。与A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2基因型具有较高的收缩压和舒张压，差异有统计学意义（P<0.001）。结论 中国人群PLA1/A2多态性与子痫前期风险无关，尚需在更大的样本中进行验证。

[关键词] 子痫前期;血小板糖蛋白受体;多态性;遗传易感性

[中图分类号] R96          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）29-0020-04

[Abstract] Objective To explore the correlation between the PLA1/A2 polymorphism of the platelet glycoprotein Ⅲa receptor（GPⅢa） genes and genetic susceptibility with preeclampsia（PE）. Methods A total of 120 patients with PE hospitalized in our hospital for delivery from September 2016 to September 2018 were selected as the PE group and 120 normal pregnant women were taken as the control group. Common risk indicators were collected through conventional detection and their differences between the PE group and the control group were compared. The technology of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP） was used to detect the PLA1/A2 polymorphism of GPⅢA， so as to analyze the correlation between PLA1/A2 polymorphism of GPⅢa and genetic susceptibility of the patients with PE. Results The genotype frequencies of A1/A1， A1/A2 and A2/A2 in the control group and the PE group were respectively 75.0%（90/120）， 23.3%（28/120）， 1.7%（2/120） and 70.0%（84/120）， 26.7%（32/120）， 3.3%（4/120）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. The allele frequencies of A1 and A2 in the control group and the PE group were respectively 76.3%（116/152）， 23.7%（36/152） and 79.7%（118/148）， 20.3%（30/148）， and the differences were statistically insignificant（P>0.05）. Compared with genotype A1/A1， genotype A1/A2 and genotype A2/A2 had higher systolic and diastolic blood pressure， and the differences were statistically significant（P<0.001）. Conclusion Whether PLA1/A2 polymorphism in Chinese population is related to the risk of PE or not still needs to be verified by larger samples.

[Key words] Preeclampsia; Platelet glycoprotein receptor; Polymorphism; Genetic susceptibility

子癇前期（PE）是一种可遗传的妊娠特有内皮疾病，免疫不良、胎盘发育不足和滋养细胞浸润、胎盘缺血、氧化应激和血栓形成是PE发展的关键因素[1]。多种血栓形成风险的基因变异影响PE遗传易感性，包括纤溶酶原激活物抑制剂1型（PAI-1）基因启动子中的缺失/插入多态性[2]、FV Leiden突变和5、10亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）的C>T677多态性[3]。血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa是纤维蛋白原和von Willebrand因子的膜受体[4]，其介导的血小板聚集和血栓形成在子痫前期的发生、发展及预后方面具有关键性调节作用。GPⅢa基因PLA1/A2多态性是由第2外显子的编码突变（98C>T）导致33Leu>Pro取代，从而在血小板上产生两种抗原性不同形式的成熟GPⅡb/Ⅲa抗原（PLA1和PLA2）。2001年在北欧白种人中首次报道GPⅢa 98T多态性的携带可能是子痫前期的未知危险因素[5]。但2003年一项基于南非黑人的研究显示PLA1/PLA2多态性并非子痫前期的病理病因的危险因素[6]。目前尚无PLA1/PLA2多态性与中国人群PE遗传易感性的相关性研究。因此本研究选取PE患者作为研究对象，将明确PLA1/PLA2多态性是否参与PE发病机制，为预警病情发展和基因水平治疗干预提供思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2016年9月～2018年9月我院产科收治的子痫前期患者120例，诊断标准参照第8版《妇产科学》[7]。年龄22～39岁，平均（27.4±3.5）歲，平均孕龄（34.3±3.2）周。纳入标准：妊娠20周后出现高血压（收缩压≥140 mmHg或舒张压≥90 mmHg）并伴有蛋白尿≥300 mg/24 h或随机尿蛋白定性≥（+）。排除标准：既往有子痫前期病史者;有不良烟酒嗜好者;妊娠合并其他疾病者。选择同期健康足月孕妇120例作为对照组，年龄23～40岁，平均（26.8±3.4）岁，均排除染色体疾病、生殖道感染性疾病、代谢内分泌疾病及免疫系统性疾病等其他内外科合并症者。本研究经本院临床医学伦理委员会审核批准，且所有入选对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1风险指标检测  促凝管空腹采集入组孕妇静脉血4 mL，待血液凝固后3500 r/min离心15 min获得相应血清，-80℃保存待用。采用全自动生化分析仪Backman AU5800测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血肌酐（Scr）和尿蛋白;采用WofenTOP 700测定D-D二聚体（D-Dimer）;血小板计数（PLT）采用Mindray BC6800。

1.2.2 DNA提取及基因分型  EDTA抗凝采血管抽取PE组和对照组外周静脉血2 mL，使用QIAamp DNA blood kit（Qiagen，Germany）提取基因组DNA，-80℃冰箱保存。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测GPⅢa的PLA1/A2多态性，扩增引物序列分别为5'-TGCTGGACTTCTCTTTGGGC-3'（F）和5'-TCAGGTC TCTCCCCGCAAAG-3'（R），PCR循环条件：96℃变性15 s，57℃退火40 s，72℃延伸30 s，共39个循环，75℃再延长5 min。使用MyCycler热循环仪系统（Bio-Rad，USA）进行扩增。

1.3观察指标

收集并比较PE组和对照组患者的年龄、孕龄、体质量指数（BMI）、收缩压（SBP）和舒张压（DBP）等普通风险指标。

1.4统计学分析

采用SPSS 25.0 统计学软件进行数据统计分析。计数资料以[n（%）]表示，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用Student's t检验，Hardy-Weinberg遗传平衡分析采用拟合优度χ2检验。组间等位基因多态性的比较采用Pearson's χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PE组和对照组普通风险指标比较

见表1。对年龄、孕龄等指标进行计量资料单因素分析结果显示，所有指标呈正态分布且方差齐性，其中PE组生产时的孕龄、PLT计数显著低于对照组（P<0.05），收缩压、舒张压、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer显著高于对照组（P<0.05）。而两组孕妇的年龄、体质量指数、ALT及AST等指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 PE组和对照组的GPⅢa基因型和等位基因频率

Hardy-Weinberg 遗传平衡检验结果显示，对照组GPⅢa基因的PLA1/A2位点基因型分布和等位基因频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05），表明该研究所选样本具有良好的群体代表性。基因分型结果显示，GPⅢa基因的PLA1/A2多态性基因型A1/A1、A1/A2和A2/A2在对照组人群中则分别为75.0%（90/120）、23.3%（28/120）和1.7%（2/120），在PE组中的表达分别为70.0%（84/120）、26.7%（32/120）和3.3%（4/120），组间比较差异无统计学意义（χ2=1.140，P=0.565）。PE组等位基因A1和A2频率分别为76.3%（116/152）和23.7%（36/152）;对照组分别为79.7%（118/148）和20.3%（30/148），组间比较差异无统计学意义（χ2=0.509，P=0.475）。见表2。

2.3 PLA1/A2基因多态性对临床指标的影响

见表3。年龄、孕龄、体质量指数、尿蛋白、PLT、Scr、ALT、AST和D-Dimer指标在各基因型间比较，差异无统计学意义（P>0.05）;收缩压和舒张压在各基因型间存在显著差异，与A1/A1基因型相比，A1/A2和A2/A2两种基因型收缩压和舒张压较高，差异有统计学意义（P<0.05）;与A1/A2基因型相比，A2/A2基因型收缩压和舒张压较高，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

子痫前期是妊娠常见并发症，严重危及孕产妇和围产儿的生命健康安全，其临床症状主要表现为妊娠20周后出现高血压，并伴有蛋白尿或母体出现重要脏器和器官的异常改变、胎儿胎盘受累等[8]。PE是一种具有家族倾向，且与人种、种族和环境因素相关的多系统复杂疾病，目前该疾病的发病机制尚未明确，因此探寻PE的具体发病机制，以制订有效的临床防治方案，已成为当前产科领域急需解决的难题之一。本研究结果显示，子痫前期患者显示出高水平的收缩压、舒张压、血肌酐、尿蛋白和D-Dimer及低水平的孕龄、PLT计数。

GPⅡb～Ⅲa是与纤维蛋白原和von Willebrand因子（vWF）结合的血小板受体。其在血小板聚集和受损血管壁上的血栓形成中起关键作用[9-10]。编码GPⅡb～Ⅲa的基因位于染色体17q21上，遗传变异可能会影响GP复合物的激活和聚集本身[11]。正常凝血状态下，血小板在血液中自由循环，不与血管壁或彼此相互作用。当不同诱导剂促成血小板激活后，GPⅡb/Ⅲa发生膜内侧外翻的构象改变，与纤维蛋白原亲和力显著增加，导致血小板聚集。国内外多项研究表明[12-14]，GPⅡb/Ⅲa蛋白介导的血小板聚集、血栓形成在子痫前期的发生、发展及预后方面起关键性调节作用。子痫前期患者GPⅢa蛋白表达较对照组明显升高，血小板活性显著增强，表明GPⅡb/Ⅲa在子痫前期凝血过程中起关键性调节作用，可以作为诊断及预测子痫前期进展的一项指标。GPⅡb/Ⅲa蛋白在子痫前期患者体内持久存在，可能是导致子痫前期患者在终止妊娠后，血液持续高凝状态，远期并发血栓、缺血性心血管疾病的风险显著增高的原因[15]。迄今为止，GPⅡb/Ⅲa基因多态性与子痫前期遗传易感性及相关并发症患病风险的研究较少。

血小板GPⅢa的PLA1/A2多态性已在心血管疾病中得到广泛研究，且PLA2等位基因的存在与体外血小板聚集增加有关，而与缺血性心血管疾病在体内有关[16-18]。PLA2多态性血小板比PLA1多态性血小板更容易激活糖蛋白GPⅡb/Ⅲa，进而易与纤维蛋白原结合，从而提示PLA2多态性血小板更倾向于促进血栓的形成，增加心血管事件。本研究也显示PLA1/A2多态性与收缩压和舒张压存在一定的联系。一项基于北欧白人的研究显示，PLA1/A2多态性与PE患病风险有关，携带PLA2的个体PE风险较高。然而，基于南非黑人的研究表明PLA1/A2多态性与PE遗传易感性无关。本研究基于中国本土人群的结果显示，PE组患者和正常对照组GPⅢa的PLA1/A2多态性位点的基因型分布和等位基因频率比较，差异无统计学意义，表明PLA1/A2基因多态性在PE的发生发展中可能并不起关键性作用，尚不能认为该位点与PE遗传易感性相关。荟萃分析显示，小剂量阿司匹林可以明显降低早发PE及围产期病死率，而PLA1等位基因纯合的血小板似乎对低剂量阿司匹林的抑制作用不敏感。阿司匹林的这种敏感性可能具有潜在的临床意义，可以根据患者的PLA基因型最佳地调整特定的抗血小板治療[19]。然而，GPⅢa PLA1/A2多态性在中国很少见，与本研究结果相一致，显示这些候选功能多态性不太可能是中国人阿司匹林药效学的重要贡献者[20]。虽然以上证据均显示GPⅢa基因PLA1/A2多态性与PE风险无关，但GPⅢa基因与PE风险的关系尚未彻底弄清。另外，PLA1/A2基因多态性与PE心血管相关并发症的患病风险关系尚未了解清楚，这对PE患者的综合治疗和产后护理至关重要。

综上所述，PE是一种复杂的多因素、多系统疾病，关于易感基因的研究正在深入开展，在PE的发生、发展过程中，每个基因的多态性在PE的危险性方面均可能有一定作用。本研究首次在中国人群中证实GPⅢa基因PLA1/A2多态性与子痫前期的易感性无关，但仍需更大样本进行验证。另外，鉴于GPⅢa重要的生物学功能，需要进一步的临床研究明确PLA1/A2多态性与子痫前期相关并发症的关系，完善和改进子痫前期相关并发症的预防和治疗。

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（收稿日期：2020-05-19）