绿毛藻乙醇提取物化学成分抗肿瘤活性研究

徐 锦

（浙江省诸暨市人民医院医学检验科，浙江 诸暨 311800）

绿毛藻（Chlorodesmis Harvey）水鳖科植物，是一种优质、速生、高产的沉水植物，广泛分布于我国淡水水域中，含有许多结构新颖和生理活性显著的化学成分。在对浙江省内水藻进行的抗肿瘤和抗炎活性筛选中，绿毛藻都表现出良好的生物活性。本文对采自浙江省诸暨市的绿毛藻70%乙醇提取物化学成分进行了研究，其中分离得到5个化合物，分别鉴定为β-谷甾醇（A），叶绿醇（B），对羟基苯甲醛（C），3-吲哚甲醛（D），胆甾-5-烯-3β，7α二醇（E）。应用人肿瘤细胞株HCT-8，Bel-7402，BGc-823，A549和HELA模型对化合物活性进行筛选，本文对绿毛藻开发抗肿瘤前导化合物提供依据。

1 材料、仪器及试剂

绿毛藻2019年7月采集于浙江省诸暨市，由浙江农林大学植物学白尚斌教授鉴定，标本编号：JY2019-152保存在浙江农林大学暨阳学院中药学专业研究室。

显微熔点测定仪（温度未校正）；三用紫外分析仪；傅立叶变换红外光谱仪（IMPAC-500型）；核磁共振谱仪（TMS为内标）；质谱仪；凝胶SephadexLH- 20；柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶GF254。所用试剂为杭州市华东医药试剂厂分析纯和色谱纯产品。

2 提取分离

干绿毛藻（10 kg）粉碎得干粉，用70%的乙醇水混合溶液回流提取3次，合并提取液，用旋转蒸发仪减压浓缩得浸膏。然后，将浸膏用超声水浴锅分散于水中。用3倍量的乙酸乙酯进行萃取分离，合并萃取液用旋转蒸发仪浓缩得到浸膏300 g。用硅胶柱色谱梯度洗脱，以正己烷-乙酸乙酯为流动相，TLC检视合并。应用正己烷-丙酮（50∶1）梯度洗脱，重结晶得单体A（300 mg）和B（50 mg）；正己烷-丙酮（30∶1）洗脱得到单体D（300 mg）。正己烷-丙酮（2∶1）洗脱组分得到单体C（20 mg）。正己烷-丙酮（2∶1）洗脱组分经分离得到单体E（100 mg）。

3 确定结构

单体A淡黄色固体（丙酮）；mp:137-139℃；EI-MS m/z[M]+= 414.12；该单体1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）图谱与文献[2]报道的数据相符合，确定为β-谷甾醇。

单体B无色浅油状物；EI-MS m/z [M]+= 296.32；该单体1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）图谱与文献[3]报道的的数据相符合，确定为叶绿醇。

单体C黄色晶体（丙酮）；mp 114-116℃，EI-MS m/z[M]+= 122；该单体1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）图谱与文献[4]报道的数据相符合，确定单对羟基苯甲醛。

单体D针晶（氯仿）；mp 196-198℃；EI-MS m/z [M]+= 145；其1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）和13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）图谱与文献[5]报道的数据相符合，确定为3-吲哚甲醛。

单体E白色晶体（氯仿）；mp:196-198℃；EI-MS m/z [M]+= 402；1H-NMR（D6-丙酮，500 Hz）δ:0.71（3 H，s），0.86（6 H，m），0.95（3 H，d，J = 6.0 Hz），0.98（3H，s），2.99（1 H），3.40（1 H，m），3.68（1 H），3.74（1 H，m），5.52 （1 H，d，J = 5.5Hz）。13C-NMR（D6-丙酮，125 Hz）δ: 37.9 ，32.4，71.3，42.8，145.6，125.4，65.1，38.7，43.2，38.0，21.5，40.2，43.0，50.3，24.8，29.0，57.0，12.0，19.2，36.7，18.6，37.0，24.5，40.3，28.7，23.0，22.8。与文献[6]报道的数据相符合，确定化为胆甾-5-烯-3β，7α二醇。

4 抗肿瘤活性筛选

采用MTT法[7]对从绿毛藻中所得的5个单体A、B、C、D、E，应用人肿瘤细胞株HCT-8，Bel-7402，BGc-823，A549和HELA模型对化合物活性进行筛选。结果病名单体E有良好的体外药理活性，IC50（μg/ml）分别为2.70，3.12，2.5，2.02和2.90。本文研究结果对绿毛藻开发抗肿瘤前导化合物提供依据。