泽泻水提物的化学成分研究

朱怀昌，陶美娟，杨玉琳，李小艳*，许文,2*，黄鸣清,2，吴水生,2

(1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学生物医药研发中心，福建 福州 350122)

泽泻为泽泻科泽泻属植物东方泽泻[Alismaorientale(Sam.)Juzep.]的干燥块茎，是福建省道地药材，具有利水渗湿、泄热化浊、降血脂等功效[1]。现代药理研究表明泽泻具有广泛的生物活性，如利尿[2]、抗草酸钙结晶[3]、降脂[4]、抗炎[5]、抗氧化等[6]。从19世纪60年代以来，国内外学者对泽泻的化学成分研究主要集中在泽泻脂溶性部位，化学成分主要以三萜类为主，分离并鉴定已达近百种[7]，但是对其水溶性化学成分的研究尚不足，仅有多糖、氨基酸、胆碱等成分报道[8]，泽泻汤剂的物质基础研究鲜有报道。临床上，泽泻除了用散剂外，多为水煎剂，如泽泻汤、猪苓汤、柴苓汤等。因此，研究泽泻水提物化学成分不仅为泽泻水溶性化学成分阐明奠定基础，同时也为泽泻汤剂的药理活性提供科学依据，对阐明泽泻临床用药药效物质基础具有重要的科学意义。

除了具有利水渗湿作用外，课题组前期研究发现泽泻水提物还具有降糖[9]和抗氧化作用[6]，另有文献研究表明泽泻提物具有激活核因子E2相关因子2(Nrf2)的作用[10]，Nrf2是机体最主要的抗氧化信号系统，与血脂、血糖等信号调控关系密切[10]，Nrf2靶点激活剂如姜黄素[11]、白藜芦醇[12]等具有良好的降糖、改善胰岛素抵抗作用，因此泽泻水提物中可能具有激活Nrf2的化学成分，故本研究对泽泻水提物进行化学成分分离鉴定，并采用荧光素酶报告基因法筛选泽泻水提物中激活Nrf2活性成分，为泽泻水提物的化学物质基础和水溶性部位的开发利用提供科学依据。

1 仪器与试剂

柱色谱硅胶(100～200目，青岛海洋化工有限公司)；Bruker Avance超导核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)；Waters Auto Purification 自动纯化系统；Waters SQD2 型质谱(美国Waters公司)；LC-20A 型半制备液相色谱仪(日本岛津公司)；轴向压缩层析柱中低压液相色谱仪(苏州利穗科技有限公司)；色谱填料Sephadex LH-20和Toyopearl HW-40S(北京绿百草科技发展有限公司)。

293T细胞(中国科学院上海细胞库，由本实验室保存)；Nrf2表达质粒pGL3-ARE、空载质粒pGL3-N(厦门欣基生物科技有限公司)；Lipofectamine3000脂质体(美国Invitrogen公司)；双荧光素酶试剂盒Dual-Luciferase Reporter Assay System(英国Promega公司)；Nrf2阳性药叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,tBHQ)购自上海源叶生物科技有限公司；乙腈、甲醇为色谱纯(德国Merck公司)；其余试剂均为分析纯。

泽泻干燥块茎采自福建建瓯市吉阳GAP种植基地，经福建中医药大学药用植物实验室正高级实验师范世明鉴定为泽泻科泽泻属植物东方泽泻[Alismaorientale(Sam.)Juzep.]的干燥块茎，样本存放于福建中医药大学药学院药用植物标本室。

2 提取与分离

泽泻干燥块茎10 kg，粉碎，过60目筛。用超纯水(3×60 L)加热回流提取3次，减压浓缩得到泽泻水提物(浓度1 g生药/mL)，用乙酸乙酯30 L萃取6次，合并浓缩得到上层乙酸乙酯部位(78 g)，硅胶拌样，用130 mm×650 mm型轴向压缩层析柱(填料：100～200目硅胶)，流动相：石油醚-乙酸乙酯，进行梯度洗脱(20∶1→1∶4)，每250 mL接一个馏分，经TLC薄层合并，得到5个亚组分Fr.1～5。Fr.1经Sephadex LH-20(CHCl3-MeOH 1∶1)纯化得到化合物9(13 mg)、化合物10(17 mg)，Fr.3经自动纯化液相制备系统(乙腈-水55∶45)得到化合物11(23 mg)、化合物12(12 mg)，Fr.4经自动纯化液相制备系统(乙腈-水48∶52)得到化合物14，经进一步的硅胶(石油醚-乙酸乙酯1∶2)洗脱纯化得到化合物14(18 mg)；Fr.5经自动纯化液相制备系统(乙腈-水48∶52)和LC-20A型半制备液相色谱仪(乙腈-水45∶55)制备得到化合物13(25 mg)和15(12 mg)。

下层水溶性部分用3倍量80%乙醇醇沉，放入4 ℃冷藏柜冷藏24 h，醇沉多糖后取出抽滤，弃去多糖，收集过滤液，滤液减压浓缩，硅胶拌样上样硅胶柱，以CHCl3-MeOH进行梯度洗脱(20∶1→1∶4)，得到6个亚组分(Fr.1～Fr.6)，Fr.1～Fr.5用Sephadex LH-20(MeOH)和Toyopearl HW-40S(甲醇-水 1∶3)进行反复的凝胶柱层析，最后得化合物1(11 mg)、化合物2(13 mg)、化合物3(33 mg)、化合物4(200 mg)、化合物5(12 mg)。Fr.6在硅胶上先用EtOAc-MeOH-H2O-HAc(12∶3∶1∶1)洗脱液进行柱层析，并用Toyopearl HW-40S在流动相甲醇-水(1∶3)中进行凝胶柱层析，进一步纯化得到化合物6(34 mg)、化合物7(20 mg)、化合物8(25 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：无色粉末，ESI-MSm/z:181 ([M+H]+,C6H12O6:M=180)。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ:3.66,3.54 (2H,d,J=11.5 Hz,H-1),4.11 (1H,d,J=8.5 Hz,H-3),3.94 (1H,dd,J=8.5,7.5 Hz,H-4),3.74 (1H,m,H-5),3.72,3.60 (2H,dd,J=11.0,3.0 Hz,H-6);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ:61.5 (C-1),105.2 (C-2),78.7 (C-3),77.2 (C-4),83.5 (C-5),64.7 (C-6)。以上数据与文献报道的β-D-呋喃果糖基本一致[13-14]，故鉴定化合物1为β-D-呋喃果糖(β-D-fructofuranose)。

化合物2：无色油状物，ESI-MSm/z:209 ([M+H]+,C8H16O6:M=208)。1H-NMR (500 MHz,CD3OD)δ:3.71 (2H,m,H-1),4.09 (1H,d,J=8.0 Hz,H-3),3.94 (1H,t,J=7.5 Hz,H-4),3.64 (2H,d,J=11.5 Hz,H-6),3.74 (2H,m,H-1′),1.14 (3H,t,J=7.0 Hz,H-2′);13C-NMR (125 MHz,CD3OD)δ:61.2 (C-1),104.8 (C-2),77.6 (C-3),76.1 (C-4),82.1 (C-5),63.8 (C-6),58.3 (C-1′),15.7 (C-2′)。以上数据与文献报道的β-D-乙基呋喃果糖苷基本一致[15-16]，故鉴定化合物2为β-D-乙基呋喃果糖苷(ethyl β-D-fructofuranoside)。

化合物3：棕红油状物，ESI-MSm/z:127 ([M+H]+,C6H6O3:M=126)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:9.41 (1H,s,H-1),7.49 (1H,d,J=3.6 Hz,H-3),6.64 (1H,d,J=3.6 Hz,H-4),4.66 (2H,s,H-6);13C-NMR (100 MHz,D2O)δ:180.3 (C-1),161.3 (C-2),126.8 (C-3),110.9 (C-4),151.6 (C-5),56.0 (C-6)。以上数据与文献报道的5-羟甲基糠醛基本一致[17]，故鉴定化合物3为5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethyl-furaldehyde)。

化合物4：无色粉末，ESI-MSm/z:343 ([M+H]+,C12H22O11:M=342)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:5.42 (1H,d,J=3.8 Hz,H-1′),4.22 (1H,d,J=8.7 Hz),4.05 (1H,t,J=8.4 Hz),3.74-3.92 (9H,m),3.56 (1H,dd,J=10.0,3.8 Hz),3.47 (1H,t,J=9.3 Hz);13C-NMR (100 MHz,D2O)δ:62.2 (C-1),103.6 (C-2),81.3 (C-3),76.3 (C-4),73.8 (C-5),60.0 (C-6),92.5 (C-1′),72.3 (C-2′),72.5 (C-3′),71.0 (C-4′),69.1 (C-5′),61.2 (C-6′)。以上数据与文献报道的蔗糖基本一致[18]，故鉴定化合物4为蔗糖(sucrose)。

化合物5：白色粉末，ESI-MSm/z:505 ([M+H]+,C18H32O16:M=504)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:5.01 (1H,d,J=3.8 Hz,环A H-1),5.44 (1H,d,J=3.8 Hz,环B H-1),4.24 (1H,d,J=8.8 Hz,环C H-3),3.68-4.09 (13H,m),3.53-3.60 (2H,m),13C-NMR (100 MHz,D2O)δ:环A:98.3 (C-1),68.4 (C-2),69.3 (C-3),69.1 (C-4),71.3 (C-5),61.0 (C-6);环B:91.20 (C-1),70.0 (C-2),73.8 (C-3),69.3 (C-4),72.5 (C-5),65.8 (C-6);环C:61.3 (C-1),103.7 (C-2),76.2 (C-3),70.8 (C-4),81.2 (C-5),62.4 (C-6)。以上数据与文献报道的棉子糖基本一致[19]，故鉴定化合物5为棉子糖(raffinose)。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm/z:667 ([M+H]+,C24H42O21:M=666)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:4.99 (1H,J=3.8 Hz,环A H-1),4.99 (1H,J=4.0 Hz,环B H-1),5.42 (1H,J=3.9 Hz,环C H-1),4.22 (1H,J=8.7 Hz,环D H-3),3.98-4.08 (2H,m),3.50-3.93 (15H,m);13C-NMR (100.0 MHz,D2O)δ:环A:98.0 (C-1),68.2 (C-2),69.4 (C-3),69.1 (C-4),70.9 (C-5),61.0 (C-6);环B:98.2 (C-1),68.3 (C-2),69.2 (C-3),69.2 (C-4),68.7 (C-5),66.3 (C-6);环C:92.1 (C-1),70.9 (C-2),72.8 (C-3),69.4 (C-4),71.2 (C-5),65.7 (C-6);环D:61.4 (C-1),103.7 (C-2),76.5 (C-3),74.0 (C-4),81.4 (C-5),62.4 (C-6)。以上数据与文献报道的水苏糖基本一致[20]，故鉴定化合物6为水苏糖(stachyose)。

化合物7：白色粉状物，ESI-MSm/z:851 ([M+Na]+,C30H52O26:M=828)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:5.43 (1H,d,J=2.4 Hz,α-D-葡萄糖 H-1),4.99 (3H,br s);13C-NMR (100 MHz,D2O)δ:环A:101.2 (C-1),71.5 (C-2),72.3 (C-3),71.1 (C-4),72.2 (C-5),64.0 (C-6);环B:100.8 (C-1),72.2 (C-2),71.1 (C-3),69.3 (C-4),71.7 (C-5),69.1 (C-6);环C:100.6 (C-1),71.1 (C-2),72.0 (C-3),69.2 (C-4),71.1 (C-5),68.6 (C-6);环D:94.9 (C-1),74.1 (C-2),75.5 (C-3),71.2 (C-4),73.8 (C-5),65.3 (C-6);环E:63.3 (C-1),106.6 (C-2),79.2 (C-3),84.2 (C-4),76.8 (C-5),64.3 (C-6)。以上数据与文献报道的毛蕊花糖基本一致[21]，故鉴定化合物7为毛蕊花糖(verbascose)。

化合物8：白色结晶粉末，ESI-MSm/z:505 ([M+H]+,C18H32O16:M=504)。1H-NMR (400 MHz,D2O)δ:5.27 (1H,d,J=3.8,环C H-1),4.99 (3H,br s);13C-NMR (100 MHz,D2O)δ:环A:98.9 (C-1),69.0 (C-2),70.2 (C-3),70.0 (C-4),71.7 (C-5),61.9 (C-6);环B:98.8 (C-1),69.2 (C-2),70.2 (C-3),70.1 (C-4),69.6 (C-5),67.3 (C-6);环C:93.0 (C-1),72.2 (C-2),73.8 (C-3),70.5 (C-4),70.7 (C-5),66.6 (C-6)。以上数据与文献报道的甘露三糖基本一致[22-23]，故鉴定化合物8为甘露三糖(manninotriose)。

化合物9：白色粉末，ESI-MSm/z:261 ( [M+Na]+,C15H26O2:M=238)。1H-NMR(400 MHz,CDCl3)δ:0.96,0.97 (3H each,d,J=3.64 Hz,H-12,H-13),1.21,1.27 (3H each,s,H-14,H-15),5.51 (1H,d,H-6);13C-NMR (67.5 MHz,CDCl3)δ:50.6 (C-1),21.5 (C-2),40.5 (C-3),80.1 (C-4),50.2 (C-5),121.3 (C-6),149.6 (C-7),25.0 (C-8 ),42.6 (C-9),75.2 (C-10),37.2 (C-11),21.3 (C-12 ),21.4 (C-13),22.5 (C-14 ),21.1 (C-15)。以上数据与文献报道的环氧泽泻烯基本一致[24-25]，故鉴定化合物9为环氧泽泻烯(alismoxide)。

化合物10：无色油状物，ESI-MSm/z:243 ([M+Na]+,C15H24O:M=220)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:0.97 (6H,t,J=4.0 Hz,H-12,13),1.22 (3H,s,H-14),4.74,4.68 (each 1H,brs,H-15),5.54 (1H,s,H-6);13C-NMR (67.5 MHz,CH3OH)δ:55.8 (C-1),25.7 (C-2),40.7 (C-3),81.0 (C-4),48.9 (C-5),123.2 (C-6),150.3 (C-7),31.0 (C-8),38.2 (C-9),155.2 (C-10),38.7 (C-11),21.7 (C-12),22.0 (C-13),24.1 (C-14),107.0 (C-15)。以上数据与文献报道的泽泻烯醇基本一致[26]，故鉴定化合物10为泽泻烯醇(alismol)。

化合物11：白色粉末，ESI-MSm/z:509 ([M+Na]+,C30H46O5:M=486)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:0.91,1.07,1.08,1.11,1.13,1.16,1.29 (各3H,s,30,29,28,19,26,27,18-CH3),1.23 (3H,d,J=9.0 Hz,H-21),1.89 (1H,d,J=13.5 Hz,H-9),2.69 (1H,d,J=10.0 Hz,H-24),2.92 (1H,m,H-20),3.16 (1H,dd,J=7.0,17.5 Hz,H-12),3.06 (1H,m,H-23),4.04 (1H,m,H-11);13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ:30.8 (C-1),33.5 (C-2),219.5 (C-3),46.9 (C-4),48.4 (C-5),19.9 (C-6),34.9 (C-7),39.9 (C-8),48.6 (C-9),36.9 (C-10),69.4 (C-11),35.7 (C-12),176.7 (C-13),49.7 (C-14),45.5 (C-15),208.2 (C-16),139.3 (C-17),23.2 (C-18),25.4 (C-19),26.2 (C-20),20.0 (C-21),37.7 (C-22),69.7 (C-23),67.6 (C-24),59.3 (C-25),19.4 (C-26),24.8 (C-27),29.5 (C-28),19.1 (C-29),23.5 (C-30)。以上数据与文献报道的泽泻醇C基本一致[25]，故鉴定化合物11为泽泻醇C(alisol C)。

化合物12：白色粉末，ESI-MSm/z:491 ([M+Na]+,C30H44O4:M=468)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:0.97,0.97,1.08,1.12,1.12,1.19,1.32 (各3H,s,19,30,29,28,18,26,27-CH3),1.25 (3H,d,J=7.2 Hz,H-21),2.41 (1H,d,J=10.8 Hz,H-9),2.71 (1H,d,J=8.0 Hz,H-24),3.02 (1H,m,H-22),3.14 (1H,m,H-23),6.18 (1H,dd,J=2.0,10.0 Hz,H-12),6.72 (1H,dd,J=3.2,10.0 Hz,H-11);13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ:32.2 (C-1),33.3 (C-2),219.0 (C-3),47.2 (C-4),46.1 (C-5),19.2 (C-6),31.2 (C-7),39.1 (C-8),48.1 (C-9),36.0 (C-10),138.2 (C-11),122.1 (C-12),171.5 (C-13),47.7 (C-14),44.4 (C-15),208.0 (C-16),138.5 (C-17),24.1 (C-18),24.9 (C-19),25.8 (C-20),19.4 (C-21),38.4 (C-22),69.4 (C-23),67.5 (C-24),59.0 (C-25),19.3 (C-26),24.7 (C-27),29.2 (C-28),19.2 (C-29),21.9 (C-30)。以上数据与文献报道的泽泻醇L基本一致[26]，故鉴定化合物12为泽泻醇L(alisol L)。

化合物13：白色粉末，ESI-MSm/z:527 ([M+Na]+,C30H48O6:M=504)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:0.89,1.07,1.08,1.11,1.16,1.29,1.32 (3H each,s),1.23 (3H,d,J=7.0 Hz),1.91 (1H,d,J=11.5 Hz,H-9),1.97 (1H,d,J=18.5 Hz,Ha-15),2.48 (1H,d,J=19.0 Hz,Hb-15),3.01 (1H,d,J=5.5 Hz,H-24),3.20 (1H,dd,J=6.0,14.5 Hz,Ha-12),3.61 (1H,d,J=7.5 Hz,H-23),4.05 (1H,dd,J=6.0 Hz,H-11);13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ:30.8 (C-1),33.5 (C-2),219.5 (C-3),46.9 (C-4),48.3 (C-5),19.9 (C-6),34.9 (C-7),40.0 (C-8),48.4 (C-9),36.9 (C-10),69.3 (C-11),34.9 (C-12),177.3 (C-13),50.1 (C-14),45.2 (C-15),209.6 (C-16),140.3 (C-17),23.1 (C-18),25.4 (C-19),25.6 (C-20),20.0 (C-21),36.2 (C-22),69.6 (C-23),77.0 (C-24),73.8 (C-25),27.0 (C-26),26.3 (C-27),29.5 (C-28),19.3 (C-29),23.4 (C-30)。以上数据与文献报道的16-羰基泽泻醇A基本一致[25]，故鉴定化合物化合物13为16-羰基泽泻醇A(16-oxo-alisol A)。

化合物14：白色粉末，ESI-MSm/z:569 ([M+Na]+,C32H50O7:M=546)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:0.89,1.07,1.08,1.12,1.13,1.24,1.33 (各3H,s,18,19,29,30,28,26,27-CH3),1.16 (3H,d,J=6.4 Hz,H-21),1.94 (1H,d,J=9.6 Hz,H-9),2.20 (3H,s,OAc),3.20 (1H,dd,J=6.0,14.0 Hz,H-12),3.79 (1H,dd,J=2.4,9.2 Hz,H-23),4.05 (1H,m,H-11),4.60 (1H,brd,J=1.2 Hz,H-24);13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ:31.9 (C-1),33.5 (C-2),219.5 (C-3),46.9 (C-4),48.4 (C-5),20.8 (C-6),34.9 (C-7),40.1 (C-8),48.7 (C-9),36.9 (C-10),69.8 (C-11),39.4 (C-12),177.4 (C-13),50.1 (C-14),45.6 (C-15),209.4 (C-16),140.0 (C-17),22.9 (C-18),25.3 (C-19),25.6 (C-20),20.0 (C-21),36.1 (C-22),72.6 (C-23),78.4 (C-24),69.5 (C-25),27.1 (C-26),26.8 (C-27),29.5 (C-28),19.2 (C-29),23.4 (C-30),170.9 (C-31),21.3 (C-32)。以上数据与文献报道的16-羰基-24-乙酰泽泻醇A基本一致[25]，故鉴定化合物14为16-羰基-24-乙酰泽泻醇A(16-oxo-alisol A 24-acetate)。

化合物15：ESI-MSm/z:489 ([M+H]+,C30H48O5:M=488)。1H-NMR (400 MHz,CDCl3)δ:1.23 (3H,d,J=6.56 Hz,H-21),3.63 (1H,d,J=10.5 Hz,H-23),3.02 (1H,brs,H-24);13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ:31.74 (C-1),34.53 (C-2),219.31 (C-3),46.98 (C-4),48.05 (C-5),19.97 (C-6),33.58 (C-7),40.51 (C-8),42.71 (C-9),36.22 (C-10),22.17 (C-11),24.99 (C-12),180.40 (C-13),50.44 (C-14),45.43 (C-15),209.96 (C-16),140.23 (C-17),23.35 (C-18),23.67 (C-19),26.98 (C-20),19.51 (C-21),40.29 (C-22),69.37 (C-23),77.36 (C-24),73.69 (C-25),25.47 (C-26),26.34 (C-27),29.25 (C-28),19.69 (C-29),22.02 (C-30)。以上数据与文献报道的16-羰基-11-去氧泽泻醇A基本一致[27]，故鉴定化合物15为16-羰基-11-去氧泽泻醇A(16-oxo-11-deoxy-alisol A)。

4 泽泻单体对Nrf2活性筛选

参考文献报道的Nrf2活性筛选方法[28]，将泽泻单体用培养基(糖类)或DMSO溶解后(三萜和倍半萜，DMSO体积比<0.5%)，用培养基稀释为样品系列工作液，终浓度均为1、10、50 μmol·L-1。培养293T细胞至对数生长期后，取出铺24板细胞培养板，并加入500 μL不含抗生素的完全培养基，24 h之后，每孔板加入600 ng的pGL3-ARE质粒(空白对照组用空载质粒对照)，采用Lipofectamine 3000脂质体进行转染。转染质粒后，各孔细胞按分组给予系列样品和阳性对照药(tBHQ)处理，24 h后，吸尽细胞培养液后直接加入报告基因细胞裂解液，取50 μL培养基上清测定。用萤火虫荧光素酶测定得到的相对发光单位(relative light unit,RLU)值与Renilla荧光素酶测定得到的RLU值的比值来比较样品对Nrf2/ARE目的报告基因的激活程度。泽泻水提物中分离得到15个化合物对Nrf2活性检测的结果如图1所示。与对照组相比，不同浓度的化合物1～10对Nrf2/ARE目的报告基因均没有激活作用；而化合物11～15可显著激活Nrf2/ARE目的报告基因，并且在浓度为10 μmol·L-1时，5个化合物激活程度均达到峰值。当浓度为1和10 μmol·L-1时，5个化合物组和阳性对照药tBHQ组相比无显著性差异，并且呈剂量依赖，而当浓度高达50 μmol·L-1时激活作用与10 μmol·L-1无显著性差异，结合结构分析，本次实验中发现具有Nrf2激活作用的物质均为泽泻16-羰基的三萜类成分，而同时测试的《中国药典》指标性成分三萜23-乙酰泽泻醇B，结果发现16位非羰基取代的23-乙酰泽泻醇B未表现明显激活作用，因此16-羰基取代的泽泻三萜可能是泽泻激活Nrf2信号通路的药效物质基础之一。

5 讨论

本次研究从泽泻水提物中共分离鉴定得到15种化合物，包括8个糖类、2个倍半萜和5个三萜，其中糖类8个，分别为β-D-呋喃果糖、β-D-乙基呋喃果糖苷、5-羟甲基糠醛、蔗糖、棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖和甘露三糖；倍半萜2个，分别为环氧泽泻烯和泽泻烯醇；三萜类5个，分别为泽泻醇C、泽泻醇L、16-羰基泽泻醇A、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A和16-羰基-11-去氧泽泻醇A。

图1 泽泻中15个化合物对Nrf2驱动的报告基因活性作用(均值±SD，n=3)注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

课题组前期研究表明泽泻水提物小分子化合物也具有降糖作用[9]，相比与泽泻脂溶性部位分离的成分[9]，首先泽泻水提物中具有较多的糖类，包括单糖和低聚糖(棉子糖，水苏糖，毛蕊花糖和甘露三糖)，并且目前文献报道低聚糖棉子糖和水苏糖等具有良好的改善肠道微生态的作用[29-30]，低聚糖可以通过调控肠道微生态发挥降脂、降糖的作用；其次，除了糖类，在水提物中也分离鉴定到2个倍半萜类化合物，环氧泽泻烯可以促进脂肪分化，对2型糖尿病小鼠有降糖作用[31]，泽泻烯醇具有抗炎作用[8]，提示泽泻倍半萜可能是其降糖的物质基础之一；第三，在水提物中分离得到5个微量三萜类成分，与脂溶性部位分离得到的三萜相比，这些三萜类极性相对较大，均具有16位羰基取代，而脂溶性部位分离的三萜以23-乙酰泽泻醇B(《中国药典》指标性成分，无16位羰基取代)等为主，本次的水提物中暂未富集得到23-乙酰泽泻醇B，两者的三萜组成存有差异。水提物中分离得到的泽泻醇C、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇L等三萜化合物可促进细胞葡萄糖摄取[32]和抗炎、激活PPAR等活性[33]，并且本次实验采用荧光素酶报告基因法检测泽泻水提物15个化合物中对Nrf2报告基因表达活性的影响，筛选出对Nrf2具有激活作用的物质均为泽泻16-羰基的三萜类成分，因此16-羰基取代的泽泻三萜可能也是泽泻降糖的药效物质基础之一。

综上所述，通过化学分离，泽泻水提物中具有较多的单糖、低聚糖类物质，并且同时也含有微量的倍半萜和三萜类成分，均可能是泽泻汤剂挥发作用的物质基础，其中泽泻醇C、泽泻醇L、16-羰基泽泻醇A、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A和16-羰基-11-去氧泽泻醇A可激活Nrf2报告基因，可能是泽泻激活Nrf2信号系统的物质基础之一。本研究为临床泽泻汤剂的化学物质基础和药理作用探索提供基础，丰富泽泻水提物化学成分研究，为泽泻水溶性部位的开发利用奠定基础。