延胡索生物碱、茉莉花精油混合液对离体子宫平滑肌作用研究

陈文鑫，罗坤，刘云平，张浩金，吴宗晟，蒙田秀*，谢锋

(1.广西中医药大学赛恩斯新医药学院，广西 南宁；2.广西中医药大学中药炮制学教研室，广西 南宁)

0 引言

茉莉花的花香有着安神、镇定和松缓情绪等功效[1-2]，延胡索具有活血、利气、止痛、镇静之功效[3-5]，药用价值大、应用广泛，因此近些年与其相关的研究报道不断涌现。中药的炮制有着降低或者消除中药材毒副作用、提高中药材有效成分含量、增强其临床治疗疗效的效果。研究结果表明，延胡索通过炮制可提高其有效成分生物碱的含量并增强其治疗效果[6-9]。

离体子宫收缩模型具有灵敏、快速、经济等优点，因而被广泛采用，作为研究痛经治疗药物较为常用的方法[10]。缩宫素(OT)是离体子宫收缩模型最为常用的工具药，其可引起离体子宫较为强烈而持久的收缩，从而塑造与痛经时子宫相似的状态。此次实验我们选用了OT 为造模药物建立原发性痛经的离体子宫收缩模型，对延胡索提取物、茉莉花精油混合液缓解离体小鼠子宫收缩模型的情况进行研究，对其中一些影响因素进行考察，并对敏感的阳性药物及其有效浓度进行选用。

因此，本实验旨在通过对未孕小鼠的子宫平滑肌收缩作用的影响来探讨延胡索提取物、茉莉花精油混合液对痛经的作用,对进一步丰富痛经的用药方法做出一些探讨。

1 材料

1.1 动物

昆明种雌性小鼠90 只，体重(20+2g)，由广西中医药大学的实验动物中心供应 [SCXK(桂)2003-0003]。

1.2 药材

延胡索，茉莉花购自亳州中药材基地(符合2015 版药典标准)

1.3 药物与药剂

乐氏液的配置(2000mL 乐氏液含：10%NaCl 180g、10%KCl 8.4g、5%CaCL2 9.6g、5%NaHCO3 20g、GS 2g)；戊 酸 雌 二醇(DELPHARM Lille S.A.S，国药准字J20130009)；缩宫素注射液药物(上海第一生化药业有限公司，生产批号190901)。

1.4 仪器

实验用调温电热套(江苏近湖镇教学仪器厂)，Biolap410生物机能仪(成都泰盟科技有限公司)，HW-400E 型恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 延胡索提取物、茉莉花精油及复方混合液的制备与实验分组

醋煮延胡索：选取净延胡索500g，加入100mL 的醋,拌匀，等浸润至醋吸尽，置于锅内,加适量水，以水浸过药面为佳，用文火煮至透心，取出滤液装瓶备用，低温保存。

茉莉花精油制备：共有2kg 茉莉花，分两次提取。将冲洗后的1kg 茉莉花用纯净水浸泡2 小时，将茉莉花与纯净水的混合液置于10L 圆底烧瓶中，同时连接蒸馏萃取装置，加热使料液持续沸腾，进行水蒸气蒸馏萃取，收集器冷水冷却。等待一定时间后再将得到的萃取液进行装瓶，采取低温保存。

将收集到的两种提取物按不同比例制备成复方混合液，具体如下：延胡索生物提取物(1:0)、茉莉花挥发油(1:0)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(1:9)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(9:1)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(4:6)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(6:4)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(5:5)。

将54 只小鼠分为9 组，每组6 个。分别为：正常对照组、缩宫素组(0.2U/mL)、不同浓度的复方混合液7 组。

2.2 离体实验的操作及给药

选取未孕小鼠，体重18～22g，在实验前连续3d 灌胃注射雌二醇10mg·kg-1·d-1，以此促使子宫进一步发育成熟。于d4颈椎脱臼处死小鼠，剪开腹腔，轻轻剥离；选择在子宫二角相连处下端进行剪断，即刻剥离出子宫，置于已配比好营养液的皿中,准确去除附着在子宫上的脂肪等多余组织。之后将子宫二角相连处剪开，取其中弹性与完整度较好的一角，剪取其中一段约2cm。将所选用子宫肌条的一端用标本钩钩在固定的浴槽底部，另一端用线结扎与传感器相连。浴槽内的营养液需以能浸没子宫模型为佳。水浴温度为37±0.5℃,静置，待子宫的自发节律恢复后加入阳性药物及不同比例的复方混合液来观察子宫平滑肌收缩情况，加药顺序：先加小剂量的缩宫素，观察一段时间的节律性收缩，换液冲洗3 次，然后再分别加入不同配比的延胡索提取物与茉莉花精油复方混合液[延胡索生物提取物(1:0)、茉莉花挥发油(1:0)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(1:9)、延胡索提取物：茉莉花挥发油(9:1)等比例]，来观察子宫的伸缩情况。

实验中乐氏液每次需注意恒量，且需注意浴槽温度；换液之后，需等待曲线平稳才可滴加下一个药物。完成换液后及时观察缩宫素及复方混合液对小鼠离体子宫平滑肌条收缩活动的影响。(记录给药前与给药后10min 子宫平滑肌的收缩波间隔平均持续时间以及收缩波的频率、平均振幅。)

2.3 统计学方法

采用SPSS 13.0 统计分析软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用独立样本t检验进行组间差异分析，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

不同药物及不同浓度对离体子宫平滑肌收缩的影响：图1可看出阳性药物小剂量缩宫素能对正常小鼠的离体子宫起到节律性收缩的作用；图2 可看出不同比例的复方混合液对正常小鼠离体子宫的收缩起到不同程度的调节效果，其中在复方混合液的比例为9:1(茉莉花挥发油：延胡索)时对子宫节律性收缩的调节作用最好(P＜0.05)；图3 则可看出复方混合液在模型小鼠离体子宫上更加明显、直观的调节收缩的效果。

图1 阳性药物对正常雌鼠子宫平滑肌收缩的影响

图2 复方混合液对正常雌鼠子宫平滑肌收缩的影响

图3 复方混合液对模型雌鼠子宫平滑肌收缩的影响

3 讨论

由实验结果可见，延胡索生物碱、茉莉花精油的复方混合液对子宫的收缩具有节律性调节作用，在茉莉花挥发油：延胡索提取物(9:1)时为其调节作用差异具有显著性(P＜0.01)；除此之外，其他比例的复方混合液虽可以调节子宫平滑肌收缩波的振幅，但差异无显著性(P＞0.05)。

本研究探讨延胡索碱、茉莉花精油对小鼠离体子宫平滑肌收缩的影响，为阐明原发性痛经特点和延胡索碱与茉莉花精油的作用机制提供了依据，也为综合评价延胡索碱、茉莉花精油治疗女性原发性痛经的共性和各异性特点提供参考。同时能为当今时代女性在治疗原发性痛经时提供了更多的思路与可能性。