黄石地区2520 例儿童呼吸道病原体检测结果分析

邹甜甜，费安兴，柯海燕，陆栋鹏，李胜

(鄂东医疗集团黄石市妇幼保健院，湖北 黄石)

0 引言

感染性病原体的诊断在国内外一直以来都是研究的热点，常见的典型病原体检测通过微生物培养或快速测序等方法，可以很好的检测出来，但是，一些非典型呼吸道病原体有很多，已经报道的包括最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q 热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等，其病原学较为复杂且常常混合存在[1,2]。呼吸道病原体一般感染人体 1～2 周后，血清中特免疫球蛋白(Ig)M 抗体急剧升高，3～4 周后可达到高峰。因此，检测血清中特异IgM 抗体可作为急性感染期的主要指标[3,4]。本研究旨在利用呼吸道感染的病原体进行快速联合多项检测的方法，对黄石地区2520 例住院患儿进行九种呼吸道非特异性病原抗体IgM 进行检测，以分析呼吸道病原体在黄石地区儿童群体中的发病情况和流行特点，明确儿童急性呼吸道感染的致病源，为儿科医生临床治疗及合理用药提供可靠的理论依据。

1 材料与方法

1.1 样本收集

收集2018 年12 月至2019 年11 月期间，在黄石市妇幼保健院住院的2520 例患儿，年龄为0～6 岁，采集患儿静脉血送至检验科临床免疫实验室检测。

1.2 方法

采用间接免疫荧光法(IFA)，利用IgM 抗体检测试剂盒检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体。

1.3 结果判读

参考安图生物科技公司呼吸道九联检检测试剂盒说明书。具体方法：

阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光(在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞)；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。

1.4 统计方法

使用Excel 进行数据录入，SPSS 17.0 统计软件进行数据分析，Pearson 法计算变量间的相关分析，显著性水平为5%。

2 结果

2.1 呼吸道感染病原体检测结果

如表1 所示，在检测的2520 例呼吸道感染患儿当中，以肺炎支原体感染阳性为主，MP-IgM 占25.70%，其中阳性占19.36%，弱阳性占6.34%；其次为合胞病毒，RSV-IgM 占2.84%，阳性占2.57%，弱阳性占0.27%；流感病毒Influenza B-IgM 占0.74%，阳性占0.35%，弱阳性占0.369%；腺病毒Adenovirus-IgM 占0.47%；副流感病毒HPIVS-IgM 占0.11%；肺炎衣原体Cb-IgM 和Q 热立克次体Cp-IgM 阳性占比最少，均占0.07%。

表1 黄石地区2520 例呼吸道九联检检测结果分析

2.2 呼吸道感染与季节性发生相关性分析

春夏季为肺炎支原体感染高发季，明显高于秋冬季，其次为合胞病毒、腺病毒感染；流感病毒和嗜肺军团菌感染主要在秋冬季，春夏季明显要少，其他病原体感染未见明显季节性差异(表2)。由此可见，患儿感染的呼吸道病原体类型与季节性密切相关。

表2 呼吸道病原体感染在季节性的阳性率结果

3 讨论

尽管呼吸道病原的检测方法多种多样，但确诊感染病原仍非常困难。细菌的病原体分离培养及病毒的培养组织细胞培养法过去常作为“金标准”。随着快速诊断技术的迅速发展，分子检测技术愈趋完善，已经被作为呼吸道病原体检测的新标准。近年来由于免疫技术的发展，特别是免疫标记技术的广泛应用，如直接、间接免疫荧光法、抗碱性磷酸酶桥联酶标法等标记技术，检测方便，快速且成本低廉适，适合于临床要求，因此在临床上有重要意义。在妇儿医院，常见儿童呼吸道感染患儿就诊，通过呼吸道感染病原体的检测，可以有效监测和诊断儿童感染性肺炎以及其他呼吸道感染性疾病[5]，而检测方法多种多样，主要的方法有：细菌的病原体分离培养及病毒的培养组织细胞培养法，血清学和直接检测法(包括电镜法)；间接、直接免疫荧光抗体法(IFA/DFA)；酶免疫测(EIA)、核酸扩增法(PCR)[6]。但像肺炎这样难以诊断的临床病例，应该使用不同的诊断方法同时检测，以获得最佳的诊断结果，本研究采用间接免疫荧光法，对2520 例样本检测，总阳性率达到30.34%，这与国内其他研究结果基本一致[7-9]。本研究结果显示黄石地区呼吸道感染患儿当中，以肺炎支原体感染阳性为主，MP-IgM 占28.6%，由此可见，肺炎支原体感染是儿童非特异性呼吸道病原体感染的主要类型之一。学龄儿童患病较多，学龄前儿童包括婴幼儿也可发生肺炎支原体感染，本研究中婴幼儿多发生肺炎支原体感染，由此可见婴幼儿也是肺炎支原体感染的高风险人群，这与其他学者报道的结果一致[10-12]。

呼吸道合胞病毒是RNA 病毒，属于副粘液病毒属，虽然在5 岁儿童中有70%存在血清抗呼吸道合胞病毒的抗体，但感染仍可不断发生于任何年龄[13]。血清抗体抗感染作用不很明显的典型例子可见于6 个月以下的婴儿，这类小儿的支气管，肺均未发育成熟；虽然这些婴儿具有母亲的抗体，但仍能发生严重的下呼吸道疾病，导致病死数明显上升，其感染症状差异很大[14]。本研究中显示，合胞病毒感染占1.8%，相对于流感病毒发病率较高，但合胞病毒感染主要在春秋季节，而流感发病主要在秋冬季节，所以两者在季节性发病流行趋势明显不同。党秋菊等在对642 例住院患儿呼吸道九联检检测结果表明，合胞病毒感染仅次于肺炎支原体和流感病毒[15]，这与我们的结果存在一定差异，可能与地区选取研究群体本身差异有关。

4 小结

整体而言，黄石地区儿童呼吸道感染以急性呼吸道感染为主，肺炎支原体阳性为主要类型。但为进一步更好改善临床对近期感染的患儿诊疗，还应采集双份样本(急性期和康复期)同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。对患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA 检测时，支原体、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，会在细胞上发生非特异性反应等方法局限性仍有待进一步改善。