湖南省耒阳市一起猪伪狂犬病诊断与分析

胡小林

（湖南省耒阳市三都镇畜牧水产站，湖南耒阳411228）

猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）可导致发病仔猪腹泻、呕吐和神经症状，该病是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染所致，该病对仔猪和繁殖母猪危害最大，其中母猪感染该病后表现繁殖障碍性疾病[1-2]。我国首次于1984 年报道该病，该病逐渐在我国大部分地区报道。目前PR 是威胁我国养猪业发展的主要传染病之一[3]。近年来，多种有效的猪伪狂犬病疫苗在我国得到推广与应用，但我国大部分猪场仍为伪狂犬病阳性猪场，且该病在散养场流行情况尤为严重。

2019 年7 月初，湖南耒阳市某散养户部分新购仔猪出现疑似PR 感染情况，结合临床与实验室诊断结果，判定疫情由PRV 感染引起。为了初步分析该地区PRV 流行毒株遗传变异情况，通过对该毒株gE 基因部分序列进行扩增、测序与分析，为相应的疫苗种类选择与防控程序制定提供参考。

1 发病情况

湖南耒阳市某散养户于2019 年7 月初外购54 头3 周龄仔猪育肥，购入时不知猪群的疫苗免疫程序，且对猪群没有进行常见传染病（如猪圆环病毒病、猪呼吸与繁殖障碍综合征和伪狂犬病等）免疫预防。1 周后部分稍瘦弱猪群出现腹泻、呕吐和精神沉郁等症状，养殖户对全场猪群肌肉注射阿莫西林进行治疗，猪群发病情况不见好转，且有恶化趋势。其后，发病严重的猪群出现明显的神经症状，共有6 头仔猪发病，全部死亡。

2 临床症状

发病猪群虚弱、站立困难、精神沉郁；严重腹泻，肛门处粪便，且肛门括约肌无力；此外，猪群体温升高至41℃左右，呼吸困难、采食量下降，部分仔猪呕吐、共济失调。

3 实验室诊断

3.1 细菌分离鉴定

采集病猪病变组织（如肺、扁桃体和淋巴结等）进行细菌分离：用火焰灼烧过的接种环蘸取组织内部液体分别接种于普通营养培养基和血琼脂平板培养基，标记后分别放置于37℃，5%CO2环境下培养，在18 h 和36 h 分别观察培养基中是否有菌落出现。结果发现两种培养基在不同时间内均未出现菌落，提示猪群发病不是由细菌感染所致。

3.2 病原检测与分析

采集病猪脑部和淋巴结等病变组织，取适量组织与灭菌PBS 混合，匀浆，高速离心15 min，用DNA/RNA 提取试剂盒提取组织上清基因组，并将RNA 反转录为cDNA，设计不同特异性引物分别检测猪圆环2 型病毒（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、猪蓝耳病毒（PRRSV）和PRV（gE 基因）。结果显示，3 份组织样品均含有PRV 核酸（见图1），但未检出其它病原（图略）。

3.3 猪伪狂犬病毒gE 基因序列扩增与分析

随机选择一份PRV 阳性的PCR 产物送至测序公司进行双向测序，对返回的序列进行拼接后，从NCBI 下载部分PRV 国内流行毒株gE 基因序列，并用DNAstar 软件对序列进行比对和分析。序列分析结果：本研究获得的PRV（Hunan YY）分离株gE基因部分序列长度为482 bp，与中国流行变异毒株序列相似性为98.5%～99.9%，其中与湖南怀化分离株（PRV-HNHH）和江苏分离株株（PRV-JS2012）的相似性为99.9%。分析结果表明疫情发生由PRV变异株感染所致。

4 讨论

伪狂犬病为高致病性传染病之一，其中猪为该病的易感动物，对我国养猪业危害巨大[5]。PRV 可感染各发育阶段猪群，仔猪感染该病临床表现神经症状、呕吐和腹泻等，并出现高死亡率；而育肥猪患病则出现呼吸症状和生长迟缓等，不易被养殖户察觉，种猪感染该病则导致不孕不育或流产死胎等，给猪场带来巨大的经济损失[6]。近年来，很多研究报道免疫接种伪狂犬病毒Bartha 株弱毒疫苗的猪场仍然会发生PR，提示传统的疫苗无法对猪群提供充分的保护。因此，免疫接种根据国内PRV 流行株设计或制备的疫苗成为防控PR 发生的主要途径之一[7]。

为了确定耒阳市某散养猪场仔猪发病原因，通过对病猪临床症状及实验室诊断结果，确定为PRV野毒感染所导致。通过对该毒株gE 基因部分序列进行扩增、测序与分析，发现该毒株与PRV 中国流行变异株的gE 基因核苷酸序列同源性高达98.5%～99.9%，可确定该病为PRV 变异株感染所引起。

基于以上结果，我们采取以下措施：对发病严重的猪群进行扑杀与无害化处理，对发病较轻或假定健康猪群紧急免疫PRV 弱毒疫苗，同时在饲料中添加适量的恩诺沙星和黄芪多糖；对猪场用甲醛进行熏蒸和消毒，其后彻底打扫卫生，每周消毒2 次；通过以上治疗和防控措施的实施，疫情得到有效控制。

近年来，湖南省养猪业发展迅速，但仍然存在很多散养户，其养殖模式相对落后，部分猪场仔猪外购后进行饲养育肥。本次病例发生原因也是如此，养殖户对购入仔猪免疫情况不了解，且未对猪群及时免疫接种相应疫苗，此外，猪场饲养管理水平低下也是主要原因之一。