一例长毛兔病毒性出血症的诊断与防制

吴凤笋，罗 琴，张桂云

(河南牧业经济学院，河南 郑州 450046)

兔病毒性出血症(Rabbit viral hamorrhagic disease,RHD)俗称“兔瘟”，是由兔病毒性出血症病毒(Rabbit viral hamorrhagic disease virus，RHDV)感染引起的急性烈性传染病[1]，对易感兔感染性强，潜伏期短，传播速度快，以感染兔全身多个器官淤血、出血、坏死为主要病理变化，发病率和死亡率都很高[2]。该病一年四季均可发生，但寒冷季节高发，3月龄以上的青年兔和成年兔易感性最强。各品种家兔均可感染该病，长毛兔易感性最高[3]。一旦兔群内出现感染发病，带毒兔的排泄物、分泌物和尸体就会大量散播病毒，引起新的个体发病。目前，该病无有效治疗药物，常常引起发病兔大量死亡，给兔场造成重大经济损失，是危害养兔业的重大传染病之一。

近年来，兔病毒性出血症疫苗的广泛接种使该病的发生明显减少。但由于免疫程序不当、疫苗质量不合格或者免疫注射不规范等原因，在养兔集中地区仍呈零星散发态势[5]。2020年10月，焦作市某长毛兔养殖场出现不明原因的连续死亡，送病兔、死兔到我校病理室诊断。通过了解发病情况、分析临床症状、病理剖检、实验室检查，确诊为兔病毒性出血症。现将该病的诊断及防制情况报告如下。

1 发病概况

该养殖场存栏有500多只长毛兔，其中幼兔100多只。10月3日有长毛兔突然死亡，连续5 天共死亡25只，多为成年兔；死前未见腹泻和鼻炎等症状，使用磺胺类药和青链霉素注射治疗，效果不佳。陆续还有兔出现精神沉郁、食欲下降和死亡，病情有扩大的趋势。

2 临床症状及剖检病变

2.1 临床症状

发病长毛兔主要表现：高热(40 ℃以上)，食欲不振，呼吸急促，可视黏膜、皮肤发绀，部分病兔出现咳嗽，排出带有淡黄色粘液的粪球。多在发病后几个小时至2天内死亡，临死前尖叫、身体抽搐、角弓反张、四肢划水样。5只病死兔口鼻有鲜红色泡沫样血液流出。

2.2 剖检病变

对送检的病死兔进行病理剖检，主要病理变化：肝脏肿大，呈土黄色，质脆易碎；胆囊肿大，胆汁稀薄；胃内充满食物，胃黏膜坏死脱落，黏膜下有绿豆大小的暗红色出血点散在分布，肠系膜淋巴结肿大，结肠内粪球表面有黄色胶冻样黏液；脾脏体积增大，呈暗红色；肺脏淤血肿大，表面散在有大量出血斑点，切面流出泡沫样液体，气管黏膜呈深红色，气管腔内充满白色泡沫样液体；心包液略有增多，心脏柔软，体积增大，心外膜血管扩张充血，心房及右心室内充满凝固不全的血液；肾脏体积增大、淤血，切面外翻，皮髓质分界不清，膀胱高度充盈，内含大量淡黄色尿液。

3 实验室检查

3.1 细菌学检查

无菌取脾脏、肝脏组织接种到鲜血琼脂培养基上，37 ℃培养24 h，观察培养基上无细菌生长。同时取肝脏、脾脏触片，革兰氏染色镜检，涂片均未发现细菌。

3.2 血凝和血凝抑制试验

将采集的肝脏称重，剪碎，按1:10比例加入灭菌的PBS液，捣碎成匀浆，在4 ℃冰箱浸制30 min，3 000 rpm离心20 min，取上清液备用。

血凝试验：第一步，96孔微量反应板的第1～12孔每孔各加入50 μL PBS液；第二步，第1孔加入50 μL 肝脏研磨上清液，混匀后取出50 μL加入第2孔，混匀后再取出50 μL加入第3孔，依次做2倍系列稀释到第11孔，混匀后取出50 μL弃去，第12孔设PBS液作阴性对照；第三步，每孔加入50 μL 1%人O 型血红细胞悬液，震荡混匀，放入湿盒置37 ℃温箱静置35 min后观察结果[4]。

依据血凝试验结果配制出4个血凝单位(4HA)肝脏研磨上清液，进行血凝抑制试验。

血凝抑制试验：第一步，在96孔反应板上第1～11孔每孔各加入50 μL 灭菌的PBS液；第二步，第1孔加入已知RHD阳性血清50 μL，做2倍系列稀释到第10孔，混匀后取出50 μL弃去；12孔加入RHD阳性血清50 μL作为对照；第三步，第1孔～11孔依次加入4HA 肝脏研磨上清液50 μL，震荡混匀，37 ℃ 感作30 min后，每孔再加入50 μL 1%人 O 型血红细胞悬液，震荡混匀，放入湿盒置37 ℃温箱静置35 min，观察结果。第11孔、12孔分别为4HA肝脏研磨上清液、RHD阳性血清对照孔。

血凝试验结果：第1孔至第6孔红细胞被完全凝集，PBS液对照孔未出现红细胞凝集，该肝脏组织的血凝效价为10×26；血凝抑制试验结果第1孔至第5孔红细胞没有出现凝集，第6孔至第10孔出现红细胞凝集，4HA肝脏研磨上清液对照孔红细胞完全凝集，RHD阳性血清对照孔未出现红细胞凝集。

血凝和血凝抑制试验结果表明该肝脏研磨上清液能凝集人O 型血红细胞，并且其血凝特性能被已知的RHD阳性血清所抑制，说明该肝脏组织中含有RHDV。

4 诊断结果

根据细菌学检查结果，可以排除细菌感染性疾病。根据血凝和血凝抑制试验结果，结合发病情况、临床症状及病理剖检变化，综合判定该场此次发病为兔病毒性出血症病毒(RHDV)感染引起的兔病毒性出血症(RHD)。

5 防制措施

兔病毒性出血症是兔病毒性出血症病毒感染引起的烈性传染病，目前尚无有效药物治疗。对本确诊病例，要求养殖场对病情严重的兔立即扑杀，并对尸体及污染物进行无害化处理；轻症病兔及时隔离饲喂，并紧急注射兔瘟单价疫苗4 mL/只，同时肌注维生素C 2 mL/只，青霉素5万单位/kg，以预防继发感染；对全群健康兔用兔瘟单价苗进行普防，剂量加倍，做到一兔一针头，严格消毒；加强饲养管理，对圈舍进行彻底清扫，每天用5%来苏尔溶液对圈舍、用具及环境进行消毒，地面、粪便用2%氢氧化钠溶液消毒；随时检查兔群，发现可疑病兔及时挑出隔离；停止兔、兔毛买卖及无关人员进出，兔舍用具固定使用。

通过采取以上措施，兔群死亡逐渐减少，5天后没有再出现新的发病和死亡。

6 讨论

本次疫情较典型的兔病毒性出血症的发病率、死亡率低，与该场进行过兔瘟免疫有关。送检人员提供该场日常免疫程序如下：成年长毛兔每年免疫兔瘟三联苗3次，分别安排在2月底、6月底及10月底，每次每只2 mL；幼兔30日龄免疫兔瘟三联苗1次，每次每只1 mL，55日龄再加强免疫一次，以后按成年兔进行免疫。所以，兔群中大部分个体具有一定的免疫保护能力，发病死亡的应该是体内兔瘟抗体水平低下，不能进行有效保护的个体。

分析本次发病原因，传染来源虽然无法准确判断，但其发病时间是在两次免疫间隔的最后阶段，兔群中有少部分兔由于个体免疫功能问题或上次免疫注射问题，抗体水平偏低，失去了抵抗病毒感染的能力；再者天气逐渐转凉，一旦有兔瘟强毒侵染兔群，免疫力较低的兔就会被感染发病甚至死亡。为了避免类似疫情再次发生，建议在养兔密集地区用兔瘟三联疫苗进行免疫接种，可以安排一年免疫4次。有条件的兔场可以进行兔瘟抗体检测，依据抗体水平制定合理的免疫程序。

兔病毒性出血症病毒非常稳定，对外界环境抵抗能力强，能在病死兔体内存活3个月以上[5]，所以该病毒可能在养兔密集地区常年存在，养殖场不可掉以轻心。兔瘟病毒疫苗免疫效果很好，严格按照免疫程序及时免疫，可以避免感染发病。临床实践证明兔瘟单价苗免疫效果要优于三价联苗，在兔瘟常年存在的地区，可以考虑选用兔瘟单价疫苗免疫，同时增加免疫次数，避免因部分兔抗体水平低下被感染发病，使全群受到威胁，给养兔生产带来重大损失。