“医联体”新模式支持下的益气温阳方对慢性心力衰竭大鼠血浆血管紧张素II、醛固酮水平影响的实验研究

赵志强，韩林延，苑光芬，牟宗毅*

（1.珲春市中医医院，吉林 延边 133300；2.长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021）

益气温阳汤是以汉张仲景《金匮要略》中温经汤为基础方加减化裁而来，经赵志强医生20余年广泛应用于慢性心力衰竭（CHF）在临床取得较好疗效，但其治疗作用机制尚不十分明确，我科室2015年3月～2016年3月收治的心肾阳虚型CHF患者80例作为研究对象，证明其总有效率达到90%[1]。近年来越来越多的研究证实以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮 (ALD)为主导的神经内分泌激活是CHF发病的关键机制。AngⅡ和ALD水平可作为心衰严重程度以及疗效判断的重要指标[2]，随着对中医药治疗CHF的重视程度的提高，相关中药治疗CHF时AngⅡ和ALD水平变化影响的报道逐渐增多。本研究通过随机、对照的动物实验，应用益气温阳方干预CHF大鼠模型，测定大鼠血浆中AngⅡ、ALD水平，探索此方治疗CHF有效的可能机制。

1 材 料

1.1 实验动物

SPF级SD大鼠50只，雌雄各半，体重250～300 g。购自于辽宁长生生物技术股份有限公司，动物合格证许可证号：SCXK（辽）2015-0001。

1.2 实验药品的配制与试剂

①实验药物采用北京康仁堂药业有限公司的配方颗粒其基本方剂组成：吴茱萸，桂枝，当归，黄芪等13味中药，每付共含生药127 g。

②福辛普利钠：规格：10 mg/片，批号：20181201，批准文号：国药准字H19980197 ，中美上海施贵宝制药有限公司产品；③盐酸阿霉素：规格：25 mg，批号：313A028，北京索莱宝科技有限公司产品；④AngII酶联免疫试剂盒：规格，96T，批号：20190101A，美国R&D公司产品；⑤ALD酶联免疫试剂盒：规格，96T，批号：20190101A，美国R&D公司产品。

2 方 法

2.1 实验用药制备

益气温阳方吴茱萸、黄芪、桂枝、当归等11味中药免煎颗粒制剂购自于北京康仁堂药业有限公司，一付药加蒸馏水60 ml研磨混匀后，继续加蒸馏水定容至72.58 ml，配制为益气温阳方混悬液，4℃保存备用。实验时，配制原液即为益气温阳方高剂量组给药制剂（相当于人临床用药2倍）；将原液用蒸馏水稀释2倍后，即为益气温阳方低剂量组给药制剂（相当于人临床用药等倍）。

福辛普利钠混悬液：称取福辛普利钠10 mg，加蒸馏水60 ml研磨混匀后，继续加蒸馏水定容至72.58 ml，配制为福辛普利钠混悬液，4℃保存备用。实验时，配制原液即为福辛普利钠给药制剂（相当于人临床用药2倍）。

2.2 造模方法

慢性心力衰竭大鼠模型的复制：盐酸阿霉素腹腔注射15 mg/kg，分6次2周内注射完毕。

2.3 实验分组与给药

将SPF级SD大鼠50只适应性喂养1周后，按体重以1:4比例分成2组：①空白对照组10只；②慢性心力衰竭造模组40只。动物单笼饲养，自由进食饮水。慢性心力衰竭造模组40只，腹腔注射盐酸阿霉素腹腔注射15 mg/kg，分6次2周内注射完。空白对照组10只(Con)，腹腔注射生理盐水，给药容积同盐酸阿霉素；在第4次腹腔注射阿霉素后慢性心力衰竭造模组随机分为4组，模型组(Adr)、造模+低剂量益气温阳组(AdrXm)、造模+高剂量益气温阳组(AdrXh)、造模+福辛普利组(AdrF)。给药方法：将大鼠分组后， 继续完成造模， 同时开始予治疗用药(即Con、Adr组予生理盐水灌胃；AdrXm组予低剂量益气温阳方、AdrXh予高剂量益气温阳方、AdrF予福辛普利6mg/kg·d-1灌胃，连续给药21 d)。给药方案：设定低剂量组为等效剂量，高剂量组为等效剂量的2倍。每公斤大鼠每日给药体积为10 ml/kg。

2.4 大鼠血浆AngⅡ、ALD含量的测定

采血前每只大鼠准备好2份试管，①AngⅡ测试管:加0.03 mol/L的EDTA·Na2、0.34 mol/L的8-羟基喹啉和0.32 mol/L的二巯醇各20 μl;②ALD测试管:加肝素抗凝。眼眶后静脉丛取血约6 ml，分别滴入2个试管中，摇匀，离心(3000 r/min)，分离血浆(试管①、②)，置-20℃保存备检，采用上述测试剂盒，按说明书进行测试，计算血管紧张素Ⅱ、醛固酮(ALD)水平。

2.5 统计学处理

计量资料采用均数±标准差(±s)表示，全部结果均用SPSS 10.0 for Windows10 统计学软件进行分析处理。组间比较采用单因素方差分析。

3 结 果

与空白对照组相比较，模型组大鼠血浆AngII、ALD含量明显升高 (P＜0.01)，证明模型组动物心衰级别较严重，CHF动物模型复制成功；与模型组比较，各治疗组均可显著降低AngII、ALD含量(P＜0.01)；造模+福辛普利组、造模+高剂量益气温阳组动物与模型组比较，其血浆中AngII、ALD含量明显降低（P＜0.001）；造模+低剂量益气温阳组动物与模型组比较，其血浆中AngII、ALD含量显著性降低（P＜0.05），证明益气温阳方可减低CHF模型动物心衰程度，改善心衰症状。其详细结果见表1。

表1 各组大鼠血浆Ang II、ALD含量变化（±s）

注：与模型组比较：***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05

组别 n Ang II nmol/L ALD nmol/L空白对照组 10 220.84±10.94***46.75±1.83***模型组 10 416.34±5.11 110.57±1.81造模+低剂量益气温阳组 10 397.00±24.77* 98.65±12.97*造模+高剂量益气温阳组 10 382.55±15.49***86.98±14.31***造模+福辛普利组 10 386.71±14.79***90.03±14.69***

4 讨 论

现今中医把CHF归属于“心悸、怔忡、咳喘、水肿、胸痹、积聚、虚劳”等范畴。该研究通过对CHF患者临床证候学的研究发现，阳气亏虚、血淤水停为其主要病机，以益气温阳主，活血利水为辅的有效治法，精心筛选了相应药物组成益气温阳方，经临床运用， 疗效满意。益气温阳汤是以汉张仲景《金匮要略》中温经汤为基础方加减化裁而来，为历代医家治疗妇科疾病的常用方剂，其具有温中寓养、温中寓通、气血双补之特点，与中医心肾阳虚型“心水病”（心力衰竭）的治疗大法极为契合，临床应用治疗慢性心力衰竭屡收良效。应用温经汤化裁而成的益气温阳方治疗心力衰竭，目前国内尚无报道。方中吴茱萸、桂枝，温经散寒，通利血脉，其中吴茱萸功擅散寒止痛，桂枝长于温通血脉，共为君药。党参、黄芪、附子共为臣药，益气健脾，以资生化之源，阳生阴长，气旺血充，助吴茱萸、桂枝以温经散寒。当归、丹参活血祛瘀，养血调经；赤芍助诸药活血散瘀；麦冬甘苦微寒，养阴清热，并制吴茱萸、桂枝之温燥；共为佐药。甘草尚能调和诸药，兼为使药。诸药合用，共奏益气温阳，调经散寒之功。

关于心衰的病理机制，1992年Packer提出解释心力衰竭进展的神经内分泌假说，其对病理生理的观点中主要包括两大因素，即心室重构和神经内分泌细胞因子系统的激活，其中最主要的为交感神经系统(SNS)及肾素-血管紧张素-醛固酮系统 (RAAS)的激活[3]。RAAS中称为最为重要的活性激素的AngII是在体内参与多种重要功能，CHF时其水平升高已被广泛认同。AngII具有较强的血管收缩作用，能够维持重要脏器血供和血压，增加回心血量，使心排血量增多。但持久、过度的AngII升高，会促使CHF向不良方向发展[4]。在细胞水平，AngII促进血管平滑肌细胞(VSMC)生长和组织肥厚，促进心肌间质纤维化[5]。在器官组织水平，可引起血管平滑肌收缩，使阻力增加，心室前后负荷增加，引起心肌肥厚及心室重构。此外，AngII促进肾上腺皮质球状带细胞合成和分泌ALD，血浆中ALD浓度升高，导致钠水潴留，血容量扩张，前负荷增加，造成体循环及肺淤血。高ALD血症可减少交感神经末梢对去甲肾上腺素（NE）的再摄取，增强NE活性，引发心律失常与冠脉痉挛，在心室重构，成纤维细胞增生，以及胶原沉积中也起重要作用。有研究报道，人的心肌细胞有ALD受体，ALD通过其受体可使心肌细胞坏死[6]，但其具体机制尚不清楚。

本研究表明，采用盐酸阿霉素腹腔注射复制的CHF大鼠模型血浆AngII和ALD的含量升高，提示模型复制成功。经药物治疗后，各治疗组可有效降低大鼠血浆AngII和ALD的含量，进一步表明各治疗组可抑制AngII和ALD的过度分泌和释放，使其外周血管扩张，增强心肌收缩力，减轻心脏前后负荷，改善心脏缩舒功能，最终达到改善心力衰竭症状的目的，但对其益气温阳方的作用机制仍需进一步探讨与研究。相信随着研究模式的不断开发与大规模临床研究，心衰的中医药治疗必将迎来崭新的历程。