基于空弯和李斯特两种细菌质量安全检验技术的探究

钟雷响 曹爱巧

1.深圳市农产品质量安全检验检测中心 广东深圳 518055

2.广东省市场监督管理局食用农产品监管重点实验室 广东深圳 518055

空肠弯曲菌是一种食源性人畜共患的细菌，许多动物都携带了这种细菌，并且通过食物链的传递，最终传递给人类导致人类生病。我们食用的家禽就是主要的传染源，感染此菌后会引起急性的肠炎、格林巴利综合症、反应性关节炎等多种疾病。然而此菌生物量较少，培养环境较为苛刻，在日常食源性风险检测中比较难以检测出来，需要通过微需氧活化培养方能检出，所以空肠弯曲菌一直是检验工作重点和难点[1]。李斯特菌也是一种人畜共患的病菌，它在低温的环境下容易生存，从而污染食物，引发急性的腹泻、发热、脑膜炎等，死亡率较高，其在食品检测中也是重点关注对象。现如今许多农产品随着加工技术的发展纷纷制成成品送出，其制作的过程中都需要对此菌进行严格的检测控制。

1 细菌概念

1.1 李斯特菌

李斯特菌是一种单核球增多性李斯特菌，是一种兼性厌氧细菌，是李斯特菌症的病原体，属于革兰氏阳性菌，一般以食物作为传染媒介，是较为致命的食源性病原体。李斯特菌在环境中无处不在，能够感染大部分的食品，肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被人们证实是李斯特菌的感染源，较为严重的感染可能引起血液和脑组织感染。人与动物食用污染食品后会引起很严重的食物中毒，它广泛引起人与动物的疾病，比如我们常见的败血症、脑膜炎和单核细胞增多病。对于食品安全有着非常严重的威胁，是冷藏食品中最威胁人类健康的病菌之一。

1.2 空肠弯曲菌

空肠弯曲菌属于弯曲菌属，是革兰氏阴性菌。空肠弯曲菌对生长环境要求比较严格，需要温度更高的微氧环境才能够生长，并且其生长速度较慢。但是如果一旦感染上了空肠弯曲菌，其导致的肠炎大多数为急性炎症性肠炎，并且可以进一步向下传染到结肠和直肠当中，引起这两个器官的炎症也是其较为厉害的特点之一，感染时极易腹泻且频率较高。由于空肠弯曲菌影响的肠炎特别表现为腹痛，可以为连续性的阵痛，与急性阑尾炎极为相似，儿童也极易感染，有一些调查发现多数感染此病的儿童有肉眼可见的便血，新生儿通常没有明显的症状，很少病重发热,呕吐为主要表现形式。

2 细菌质量安全检验技术

2.1 李斯特菌

随着我国科学技术的不断发展，除了传统的《GB 4789.30-2016》方法外，各种新方法不断出现，主要包括普通PCR方法、实时荧光定量PCR、多重PCR等，并广泛应用于牛奶的检测研究中，普通PCR方法应用较为广泛，并且其可以对李斯特菌进行定量的检测，RT—PCR是在普通PCR反应体系当中加入一条与模板特异性结合起来，其可以标记两个荧光基础的探针并在传统的仪器上增加了信号检测系统，它的探测结果会以荧光的形式显现出来，较为清晰。而Maninis等以mRNA为基础建立了对LM进行检测的RT.PCR方法，这种方法比较快速，其检测的时间缩短了，并且，对李斯特菌的随机基因组DNA片段进行研究，开发了一种利用随机基因组DNA微阵列检测牛奶中李斯特菌的方法，该方法的检测限为8 1g（CFU／mL），结果显示DNA微阵列法可检测实验室培养基和牛奶中的uM，并且能将其与其他李斯特菌种和食源性致病菌区分。DNA微阵列可以同时应用多对引物通过多重PCR扩增多个病原体的特异基因，因此该方法最大的优点是能够同时检测不同种类的致病菌。但是目前而言，检测方法在实际应用中存在着一些弊端。其比传统方法虽然说操作上较为简单，但是它消耗的时间长，不能够满足人们对于其快速检测的要求，并且也不适用于大规模的检测当中。而PCR方法以及基于PCR方 法建立的其他检测方法较为快速简单，并且其已经可以逐步取代传统的方式，运用于生牛乳中的细菌辨别[2]。但是其也存在弊端，不能够分辨出细菌的活性，增加了检测的失误现象，对于一些产品还是需要用传统的方法进行验证。相信在未来的新型鉴定中，利用 PCR 技术和免疫学方法能够开发一种较为全面的检测方法，解决李斯特菌便捷准确的检测手段。

2.2 空肠弯曲菌

空肠弯曲菌也是如此，其也是能够引起人类细菌性肠炎的重要病菌之一。对空肠弯曲菌的检测方法主要还是《GB 4789.9-2016》，其他检测方法有ELISA检测方法、PCRt31、 荧光定量PCR、蛋白质组学等方法，但是目前这些方法还是存在一定的弊端，如ELISA检测方法需要的时间比较长，并且对于实际的消耗量比较多，容易出现一些特别的反应。荧光偏振检测法是一种特殊的荧光检测技术，该技术主要基于荧光基团在被偏振光激发后会发出偏振光原理来进行。这样的检测方法是基于其检测的体系的，在检测的结果中荧光偏振（FP）值较为稳定，不容易受其颜色影响，可以实现多标记物定性定量的检测较为有优点。而逐渐引起人们的关注FPIA检测时，如保持液体粘性和温度恒定，那么分子转动速度就只与分子大小相关[3]。PEB1A荧光素分子相对比较小，能够在溶液中自主移动，这样分子的FP值就比较小。如果待测液中含有PEB1A 特异性抗体，那么抗体就会和PEB1A荧光素分子结合，使分子复合物变大，导致FP值增大，利用荧光素FITC对空肠弯曲菌进行追踪与标记，可以建立一种新的检测技术，实现对农产品中空肠弯曲菌的快速监测。

3 结语

空肠弯曲菌和李斯特菌都是常见的菌种，目前检测技术上有许多的方法，不同的方法各有千秋和不足，检测技术还需不断开拓提升，相信在不久的未来，将会有更优方法适用于两种细菌的质量安全检验，达到便捷准确的检测目的，提升检测效率。