不同浓度五倍子提取液对变形链球菌影响的体外研究

余 晶 邓 蔚

南昌市第一医院口腔科，江西南昌 330008

龋病是口腔临床常见和多发的细菌性疾病，我国的平均患龋率在38%左右，儿童的患龋率可高达76.6%[1-2]。口腔的主要致龋菌种为变形链球菌，参与龋病的发生与发展，并且在早期产生菌斑生物膜的过程中起到不可忽视的作用[3]。因此，对菌斑的产生进程进行有效抑制，阻碍变形链球菌等致龋菌的出现、繁殖可有效防治龋病。当前，氯已定、氟化物等在口腔领域内是公认的有较强抗菌能力的药物，若长期使用会造成口腔菌群紊乱，口苦、着色等不良反应，具有一定的局限性[4]。五倍子越来越被广泛用于龋病的防治中，但其浓度的选择不尽相同。本研究回顾性分析100 例龋病患者的临床资料，探讨不同浓度五倍子提取液对变形链球菌的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2015年6月～2019年1月于我院治疗的100 例龋病患者的临床资料，根据患者治疗方式的不同将其分为A 组（n=40）、B 组（n=30）和C 组（n=30）。A 组中，男20 例，女20 例；年龄6～25 岁，平均（12.16±2.09）岁；病程1～5年，平均（2.50±0.49）年。B组中，男15 例，女15 例；年龄5～26 岁，平均（12.11±2.14）岁；病程1～6年，平均（2.52±0.44）年；C 组中，男16 例，女14 例；年龄6～25 岁，平均（12.15±2.10）岁；病程1～4年，平均（2.54±0.46）年。三组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

纳入标准：①患者均经临床确诊为龋病；②患者病历资料完整。排除标准：①合并其他口腔疾病者；②患传染性疾病者；③口腔严重感染者；④患有精神及意识障碍，不能配合采集口腔唾液者。

1.2 方法

A 组患者使用院内自制的含氟漱口液漱口，使用中性或者酸性氟化钠配方，0.2% NaF（900 mg/LF-），10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小时内不进食或漱口，1 次/周。

B 组患者使用液体二倍稀释法稀释为16 mg/ml浓度的五倍子提取液漱口，10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小时内不进食或漱口，1 次/周。五倍子提取液的提取方法：五倍子可购于中药材市场；将1 kg 五倍子粉碎后置于60～70℃下用3 L 去离子水进行10 h 的水浴，并多次振摇、过滤，合并滤液，将活性碳加入其中脱色、过滤，直至滤液浓缩为稠膏状，获取五倍子原药；置入95%乙醇中后进行搅拌溶解、过滤，乙醇液减压浓缩得类白色粉末状物，然后冷冻干燥，获取五倍子水提取物纯品干粉；依据具体需求配制不同浓度五倍子水提取物溶液，分装后钴（Co）-60 照射备用，并放于棕色玻璃瓶4℃下避光储存[5]。

C 组患者使用液体二倍稀释法稀释为32 mg/ml浓度的五倍子提取液漱口，10 ml/次，含漱1 min 后吐出，半小时内不进食或漱口，1 次/周。五倍子提取液的提取方法同B 组。

三组患者均连续治疗3 个月，并进行为期半年的随访。

1.3 观察指标及评价标准

比较三组的细菌培养基中变形链球菌菌落数、不良反应发生情况及随访期间复发情况。

①变形链球菌菌落数：分别于治疗前后取患者口腔唾液制作细菌培养基，将口腔唾液样本在BHI 琼脂培养基上接种，放于37℃恒温厌氧箱（85% N2，10%H2，5% CO2）中培养24 h；选取单克隆菌株转种于内有5 ml BHI 培养液试管内，放于37℃YQX-Ⅲ型号的恒温厌氧箱中（上海乔跃电子科技有限公司）持续培养24 h，制备菌悬液，调整浓度为100 CFU/ml 备用。对变形链球菌菌落数进行计数，每组实验重复3次，取平均值。②不良反应总发生率：统计并比较三组患者治疗期间口腔神经损伤、氟牙症、氟中毒等并发症总发生率。③复发率：统计并比较三组患者随访期间龋病复发情况，龋病治愈后又开始发展为浅龋（外表白垩色或黑褐色，探之有粗糙感或表面缺损、质地松软），或出现自觉症状（对冷、酸、热、甜可出现激发性痛，刺激去除，症状消失）为复发。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，三组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用独立样本t 检验，组内比较采用配对样本t 检验； 计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组治疗前后细菌培养基中变形链球菌菌落数的比较

治疗前，三组细菌培养基中的变形链球菌菌落数比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，三组细菌培养基中的变形链球菌菌落数均少于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后，C 组的细菌培养基中变形链球菌菌落数少于A、B 组，差异有统计学意义（P＜0.05）； 治疗后，B 组细菌培养基中的变形链球菌菌落数少于A 组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 三组治疗前后细菌培养基中变形链球菌菌落数的比较（CFU/ml，±s）

表1 三组治疗前后细菌培养基中变形链球菌菌落数的比较（CFU/ml，±s）

“-”表示未测定，无数据

组别 治疗前 治疗后 t 值 P 值A 组（n=40）B 组（n=30）C 组（n=30）F 值P 值1325.25±200.04 1300.27±220.25 1315.27±210.66 0.122 0.885 6.618 7.058 15.532 0.000 0.000 0.000 tC 组与A 组比较值PC 组与A 组比较值tC 组与B 组比较值PC 组与B 组比较值tB 组与A 组比较值PB 组与A 组比较值------1056.98±160.33 956.66±150.33 622.75±123.55 78.200 0.000 12.217 0.000 8.788 0.000 2.823 0.006

2.2 三组患者不良反应总发生率的比较

三组患者均未出现氟中毒，C 组患者治疗期间的不良反应总发生率低于A 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B 组患者治疗期间的不良反应总发生率低于A组，差异有统计学意义（P＜0.05）；C 组患者治疗期间的不良反应总发生率与B 组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表2）。

表2 三组患者不良反应总发生率的比较[n（%）]

2.3 三组患者复发率的比较

C 组患者随访期间的复发率为0.00%（0/30），低于A 组的20.00%（8/40），差异有统计学意义（χ2=6.774，P=0.009）；B 组患者随访期间的复发率为3.33%（1/30），低于A 组，差异有统计学意义（χ2=4.250，P=0.039）；C组患者随访期间的复发率与B 组比较，差异无统计学意义（χ2=1.017，P=0.313）。

3 讨论

龋病是口腔临床常见和多发的细菌性疾病，是导致中国人失牙的第二大病因[6]。引发口腔疾病的主要致龋菌为变形链球菌、黏性放线菌、血链球菌等。其中变形链球菌在龋病的产生中起到最为主要的作用，在早期产生菌斑生物膜中作用也十分明显。一般而言，没有致龋菌，就不会引起龋病。菌斑生物膜这种特定的生态环境是致龋菌赖以生存的基础，因此对菌斑的形成进行控制，对变形链球菌等致龋菌的生长繁殖进行有效的抑制能有效防治龋病[7]。

以往临床多使用氟化物防龋，氟可以较为明显的降低患龋率，是当前全球范围内公认的最有效的防龋手段之一[8]。但如果对水、牛奶及食盐中的有效浓度不能严格进行控制会引发氟牙症、氟骨症等，且长时间使用含氟牙膏会产生耐氟菌株，不利于防龋。因此，寻求一种无毒副作用并具有防龋功能的方式来防治龋病十分重要。中草药为自然生药，其抗菌作用一般比抗生素和化学药剂弱，但对机体副作用小，有着较弱的耐药性，且对需氧菌以及厌氧菌抗菌效果好，故用中草药治疗感染性疾病有较大的优势[9-10]。其中五倍子对细菌的抑制作用早已得到证实，在口腔领域中的应用已备受关注。五倍子具有敛肺降火、 涩肠止泻、收湿敛疮等功效，抗菌性能好，且毒副作用相对较小[11-12]。同时五倍子提取物不但能抑制致龋菌，也能对牙齿硬组织产生影响。因为五倍子中主要化学成分为鞣质，有抑制细菌、络合、抗氧化等多重功效，口腔科学者们将五倍子用于口腔领域，发现其对各种口腔常见致病菌有抑制作用，同时能够抑制脱矿，促进再矿化[13-14]。且有体外和动物实验研究表明在五倍子对龋病防治、牙周病治疗、根管消毒等方面有着巨大的潜力[15]。本研究结果显示，治疗后，三组细菌培养基中的变形链球菌菌落数均少于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后，B、C 组细菌培养基中的变形链球菌菌落数少于A 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗后，C 组细菌培养基中的变形链球菌菌落数少于B 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B、C 组患者治疗期间的不良反应总发生率均低于A 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B、C 组患者随访期间的复发率均低于A 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示32 mg/ml的高浓度五倍子提取液用于龋病患者的临床治疗中，能有效减少变形链球菌菌落数，对变形链球菌的抑菌作用更强，且能有效降低不良反应总发生率以及复发率，安全性较高，治疗效果较好。

综上所述，在龋病患者中使用32 mg/ml 高浓度五倍子提取液的抑菌效果较好，能有效提高抑制链球菌的效果，降低不良反应发生率以及复发率，安全性较高。