E-cad、MGMT和P-gp在胰腺导管腺癌中的表达及临床意义

孙彦珍，郭广秀，张功亮，黄金长

（赣州市人民医院病理科，江西 赣州341000）

胰腺癌是一种恶性程度很高的消化系统肿瘤，近年来它的发病率和死亡率在许多国家均呈上升趋势，其中95%的患者在诊断后的1年内死亡，总体5年生存率仅有6%［1］。胰腺癌的临床症状隐蔽，早期确诊率低，侵袭性强，预后差。胰腺癌80%～90%为导管腺癌，因此研究胰腺导管腺癌浸润、转移的分子机制和有效的临床诊断方法具有重要意义。E-钙黏蛋白（E-cadherin protein，E-cad）为一种介导细胞间粘附的钙依赖性跨膜糖蛋白，可维持细胞间的连接作用［2］。MGMT是机体修复烷基化合物的关键酶，对抗烷化剂造成的DNA损伤，与多种肿瘤发生相关。P-gp是目前广泛关注的多药耐药蛋白，与肿瘤细胞的选择性耐药密切相关。本研究旨在讨论这三种蛋白在胰腺导管腺癌中的表达与各临床参数的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料收集赣州市人民医院病理科2016年至2020年手术切除的原发性胰腺导管腺癌石蜡标本30例，术前均未经过放、化疗治疗，且有完整的临床病理资料。其中女性14例，男性16例。年龄36～91岁，平均56岁。高-中分化18例，低分化12例。取正常胰腺组织10例为对照组，来自外伤性胰腺或胰腺炎行部分胰腺组织切除标本。

1.2 主要试剂兔抗人E-cad单克隆抗体，鼠抗人MGMT单克隆抗体及鼠抗人P-gp单克隆抗体均购自福州迈新公司，均为工作液。

1.3 方法采用免疫组织化学SP法检测E-cad，MGMT及P-gp蛋白的表达。组织标本经10%福尔马林固定，常规制作石蜡包埋切片，切片厚度为3μm，免疫组化步骤严格按照试剂盒说明书操作，同时每例复染HE切片1张。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为空白对照，用DAB显色。

1.4 结果判断根据阳性对照及内对照判定实验的成功与否，两名高年资病理医师用×400高倍镜观察，随机选取5个不重叠视野，每个视野计数200个细胞，阳性细胞数＞10个，判读为阳性，以细胞核、胞质和胞膜出现棕黄色颗粒为阳性表达。

1.5 统计学分析采用SPSS 15.0软件对不同组别的阳性表达率进行比较，采用χ2检验和Fisher确切概率计算。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E-cad的表达情况E-cad在胞膜着色（图1），在胰腺导管腺癌组织的阳性率为46.7%，在正常胰腺组织的阳性率为100%。在高-中分化的胰腺导管腺癌中阳性率为55.6%，低分化胰腺导管腺癌中阳性率为33.3%，高-中分化的阳性率高于低分化的阳性率（P＜0.05）。在有脉管癌栓的胰腺导管腺癌组织中阳性率为22.2%，无脉管癌栓的阳性率为38.1%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在有神经束膜侵犯的胰腺导管腺癌组织中的阳性率为20%，无神经束膜侵犯的阳性率为60%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05，见表1）。

图1 E-cad在胰腺癌中的表达，膜阳性（HE染色，×400）

表1 E-cad在胰腺癌中的表达与临床病理特征之间的关系

2.2 MGMT的表达情况MGMT在胞浆着色（图2），在胰腺导管腺癌组的阳性率为70%，正常胰腺组织为30%。有神经束膜侵犯的胰腺癌的阳性率为20%，无神经束膜侵犯的阳性率为60%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。在组织学分级和是否有脉管癌栓的胰腺导管腺癌中的阳性表达差异无统计学意义（P＞0.05，见表2）。

图2 MGMT在胰腺癌中的表达，胞浆阳性（HE染色，×400

表2 MGMT在胰腺癌中的表达与临床病理特征之间的关系

图3 P-gp在胰腺癌中的表达，膜/质阳性（HE染色，×400）

2.3 P-gp的表达情况P-gp在细胞膜/质着色（图3）。在有脉管癌栓的胰腺导管腺癌中阳性率为22.2%，无脉管癌栓的阳性率为47.6%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。有神经束膜侵犯的胰腺导管腺癌的阳性率为26.7%，无神经束膜侵犯的阳性率为66.7%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05，见表3）。在不同组织学分级的胰腺导管腺癌表达差异无统计学意义（P＞0.05），见表3）。

表3 P-gp在胰腺癌中的表达与临床病理特征之间的关系

3 讨论

上皮-钙粘素（E-cad）是一种钙依赖性黏附分子，在细胞与细胞及细胞外基质的黏附中发挥重要作用，它使细胞位置固定，不易浸润脉管及周围组织。作为跨膜蛋白，它可以连接微丝及肌动蛋白等形成连接复合体，并与相邻细胞中复合体连接，使之形成稳定连接［3］。E-cad是维持细胞极性和紧密连接的重要因子，若E-cad蛋白表达下降或功能抑制，细胞间的连接能力就会减弱，导致肿瘤细胞发生浸润性生长和转移［4］。许多研究发现［5］，E-cad表达下调与口腔鳞癌、喉癌、胃癌、胰腺癌和卵巢癌等恶性肿瘤的侵袭和转移关系密切［6］，与本实验结果一致。本研究中，胰腺导管腺癌组织E-cad蛋白的阳性表达率为46.7%，远低于其在正常胰腺组织的100%的表达，说明E-cad表达下调与胰腺导管腺癌的发生、发展有重要联系，而且与文献中E-cad在胃、食管癌中表达的研究结果相似［7］。本实验进一步探讨E-cad表达与临床病理因素的相关性，结果发现E-cad的表达仅与胰腺癌的组织学分级、有无脉管癌栓及神经束膜侵犯相关，而与肿瘤直径大小无关，说明胰腺癌的发生发展及侵袭性与E-cad蛋白有关。

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methytransferase，MGMT）是一个重要的DNA直接修复酶，能将甲基转移到自身的半胱氨酸残基上，修复DNA的损伤［8］。启动子甲基化可以下调其基因转录，降低细胞MGMT的表达，而去甲基化可以逆转由烷化剂引起的DNA损伤，从而导致对替莫唑胺和亚硝基脲类化疗药物的耐药性［9］。MGMT蛋白的表达量与其启动子甲基化的水平相关，甲基化后可使MGMT蛋白的表达减少，从而提高患者对治疗的敏感性［10］。目前，MGMT在胶质瘤的研究较多，发现其与肿瘤耐药性有关，并影响患者的预后［11-13］。有研究表明MGMT表达与多种肿瘤的发生及耐药性密切相关，如食管癌、乳腺癌、胃癌、¨肝癌［14-17］等。MGMT表达具有组织及细胞类型特异性，mRNA水平和蛋白水平是一致的。MGMT基因调节失活增加了靶细胞对烷化剂损伤。MGMT修复烷化剂破坏细胞的DNA复制，从而使化疗药物对肿瘤细胞敏感性降低。有研究发现低水平的MGMT比高水平的MGMT化疗效果好［18］。本研究显示MGMT在胰腺导管腺癌组织中的阳性表达率为70%，提示胰腺导管腺癌对烷化剂有较高的原发耐药率，对化疗药的使用有一定阻碍作用。

P-gp是ATP结合盒（ATP-binding cassette）转运体家族中重要的外排转运体，是由多药耐药基因MDRI编码的一种跨膜糖蛋白，通过与抗癌药物结合，利用ATP供能将输水亲脂性化疗药物如长春新碱等转运至细胞外，使细胞内药物浓度降低，产生耐药［19-20］。P-gp能直接或间接地参与细胞的分子代谢，抵抗caspase依赖性凋亡，在细胞凋亡中可能发挥重要的调控作用［21］。对于P-gp高表达的肿瘤患者，临床应慎重合理选择化疗药物。P-gp为MDRI基因所编码，研究表明，P-gp水平随MDRI基因扩增及Mrna增加而增加［22］，本研究显示P-gp在胰腺癌组的阳性表达率为50%，其表达与脉管及神经束膜侵犯相关（P＜0.05）。P-gp的高表达提示预后不良，可能对相应的化疗药产生耐药性。通过对P-gp的检测可以为临床化疗药物的选用及进一步的有效治疗提供可靠的理论依据。

胰腺位于机体上腹部较深位置，血供较差，出现病变后不易及早发现，多数患者在确诊时，胰腺肿瘤已发生转移，无法通过手术治疗。

综上所述，通过对E-cd、MGMT及P-gp的联合检测分析，可以为胰腺导管腺癌发展和转移进行预测评估，为临床耐药逆转剂的选择，制定有效的治疗方案提供更可靠的科学依据。