布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的影响因素及注意事项

刘坤洋

摘要：本文对布鲁氏菌病虎红平板凝集试验中的影响因素及应注意的事项进行了较全面的分析和总结，以提高试验的准确性，为本病的进一步确诊和疫情分析提供科学依据。

关键词：布鲁氏菌病;虎红平板凝集试验;影响因素;注意事项

目前，布鲁氏菌抗体检测仍是我国布病诊断最常用、最主要的检测方法。其中虎红平板凝集试验（RBPT）具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查，同时由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验。现将RBPT中的影响检测结果的因素及应注意的问题进行简要分析。

1   RBPT的影响因素

1.1 RBPT抗原

RBPT抗原的质量是影响布病血清学试验结果准确性的关键性因素之一，不同厂家的抗原对同一批血清样本的检测结果存在不同程度的差异，如果RBPT的假阳性率过高，不仅造成工作量加大，也会造成不必要的经济损失。

1.2 血清

血清质量也是影响布病血清学试验结果准确性的重要因素之一，而采集的时间与分离方式直接影响血清的质量。用于RBPT的血清最好是新鲜、清亮透明、无溶血、防止细菌污染，并且避免反复冻融。纤维蛋白原能与虎红抗原产生非特异性凝集反应，而且纤维蛋白原含量越高凝集反应发生的越快、越强。因此，如果待检血清中含有纤维蛋白原也会出现RBPT假阳性结果，严重影响检测结果的准确性。

1.3 温度

试验时，RBPT抗原与被检样品的温度、环境温度对试验结果的准确性也有很大影响。RBPT用的抗原需要恢复至室温（22±4℃），并且使用前要充分混合均匀。血清与温度和时间成反比关系，放置血清的时间越短，温度越低，假阳性率越高。由此可见，在一定温度范围内，温度越高，血清学反应进行的越快。本试验要求在室温下进行，因此，在试验前要注意观察环境温度是否适合进行本試验。

1.4 药物

血清中的药物浓度也会干扰检测结果的准确性，在经过治疗后或治疗期间血清凝集不明显。因此，在血液样品采集前除了要查明动物的免疫背景，还要查清动物的患病及治疗情况，以免出现误诊、漏诊现象。

1.5  试验操作

RBPT虽然操作简便，但在试验过程中操作是否规范、抗原及血清加入的量是否准确并混匀、结果判定的时间是否准确等因素也会影响试验结果的准确性。

2  注意事项

2.1  对照的设立

每次试验时必须设立标准阴性、阳性血清对照，用以判断试验是否成立。同时在试验前应使用弱阳性对照血清确定试验条件的敏感性。

2.2  试剂的保存及使用

RBPT抗原应用OIE标准血清校准过的血清进行最后标化，于4℃暗处保存，避免冻结和污染。试验时使用的抗原应与用0.5%石碳酸生理盐水1/45稀释的OIE标准阳性血清出现清晰的阳性反应，而不与1/55稀释的血清反应。为了避免RBPT抗原被污染，降低温度变化对抗原灵敏度的影响，可以每次试验前只取出足够本次试验用的抗原量。

2.3  血清

采集的血液样本在分离血清之前，避免长时间晃动以及与冰袋接触，以免发生溶血。为了分离到合格的血清样本，最好在早晨喂料前或停食后6小时进行采血，将装有血液的注射器或采血管摆成斜面，以促进血清更好的析出。除特殊要求外，用于血清学试验时采集血液样本时不要加抗凝剂，以免影响对检测结果做出正确的判定。血清样品在使用前一定要上下颠倒混匀，对于冰冻保存的血清样品应充分融化后再进行试验。

2.4  试验操作

虽然RBPT操作易于掌握，结果判定直观，但在试验过程中所用抗原和血清量都很少，试验时加入的量一定要准确。抗原与血清混合均匀后室温轻微摇晃4分钟后立即判定结果，若抗原抗体反应超过4分钟后也会产生假阳性结果。

3  讨论

RBPT作为快速、准确筛查布鲁氏菌病特异性抗体的简便方法，不仅反应敏感稳定，同时由于抗原的pH为3.65±0.05，可抑制引起非特异性反应的IgM、增强特异性IgG的活性，也具有较好的特异性。但在试验操作过程中要严格按照标准的操作规程进行，注意影响试验的各种因素，降低各种因素对试验结果准确性的影响。