RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞的表达及与IL-2、IL-8、IL-10的相关性

刘彩丽 廖翠乐 熊长虹

【摘要】 目的：观察小儿难治性支原体肺炎（refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）患儿支气管肺泡灌洗液（BALF）中巨噬细胞及IL-2、IL-8、IL-10水平的表达。方法：选取2014年10月-2018年10月在本院儿科住院治疗的94例RMPP患儿为RMPP组，选取同期轻型肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）60例为MPP组及60例行支气管异物取出术儿童为对照组。ELISA检测BALF中IL-2、IL-8、IL-10水平，苏木精-伊红染色下计数巨噬细胞百分比。比较各组肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平及巨噬细胞计数，分析RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞计数与IL-2、IL-8、IL-10水平的相关性。结果：三组患儿BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。RMPP組患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组及MPP组，IL-10含量低于对照组及MPP组，差异均有统计学意义（P<0.05）;MPP组患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组，IL-10含量低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。MPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数为（32.2±6.3）%，高于RMPP组的（27.6±5.7）%，低于对照组的（66.1±7.9）%，差异均有统计学意义（P<0.05）;RMPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。三组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数比较，差异有统计学意义（P<0.05）。RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞计数与IL-10水平呈正相关（P<0.05），与IL-2、IL-8水平均呈负相关（P<0.05）。结论：RMPP患儿BALF中的IL-2、IL-8含量升高，IL-10含量降低，与巨噬细胞百分比关系密切。

【关键词】 小儿难治性支原体肺炎 肺泡灌洗液 巨噬细胞 IL-2 IL-8 IL-10

[Abstract] Objective： To observe the expression of macrophages and IL-2， IL-8 and IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） of children with refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia （RMPP）. Method： A total of 94 patients with RMPP hospitalized in our hospital from October 2014 to October 2018 were selected as the RMPP group. Sixty cases of mycoplasma pneumoniae pneumonia （MPP） in the same period were selected as MPP group and 60 children undergoing bronchial foreign body removal were selected as the control group. The levels of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF were detected by ELISA. The percentage of macrophages was counted by hematoxylin eosin staining. The levels of IL-2， IL-8， IL-10 and macrophage count in BALF of each group were compared， and the correlation between macrophage count and IL-2， IL-8 and IL-10 levels were analyzed. Result： There were significant differences in the contents of IL-2， IL-8 and IL-10 in BALF among the three groups （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP group were higher than those of control group and MPP group， and the content of IL-10 was lower than those of control group and MPP group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The contents of IL-2 and IL-8 in BALF of MPP group were higher than those of control group， and the content of IL-10 was lower than that of control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of MPP group was （32.2±6.3）%， which was higher than that of RMPP group （27.6±5.7）% and lower than that of control group （66.1±7.9）%， the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of macrophages in BALF of RMPP group was lower than that of control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were significant differences in the number of macrophages in BALF among the three groups （P<0.05）. The number of macrophages in BALF was positively correlated with IL-10 （P<0.05）， and negatively correlated with IL-2 and IL-8 （P<0.05）. Conclusion： The content of IL-2 and IL-8 in BALF of RMPP children increased， while the content of IL-10 decreased， which was closely related to the percentage of macrophages.

[Key words] Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia in children Alveolar lavage fluid Macrophages IL-2 IL-8 IL-10

First-authors address： Maternity and Child Care Hospital of Qingyuan， Qingyuan 511500， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.27.011

小儿难治性支原体肺炎（Refractory mycoplasma pneumoniae pneumonia， RMPP）是儿童常见重症肺炎，进展迅速，出现多器官功能衰竭，病死率高[1-2]。支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid， BALF）细胞学检查可以直接获取肺泡炎症细胞，是研究肺炎病理生理最为有效的方法。研究表明，支原体肺炎患者BALF中性粒细胞升高、巨噬细胞降低[3]。IL-2、IL-8、IL-10作为临床常用的炎性因子，研究证实，重症肺炎患者外周血中存在各种炎性因子水平的升高[4]。但RMPP患儿BALF中巨噬细胞、炎性因子水平两者的关系尚不清楚。鉴于此，笔者观察了RMPP患儿BALF中巨噬细胞百分比、炎性因子IL-2、IL-8、IL-10的水平，并与正常儿童、轻型肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）对比，希望为RMPP的诊治提供思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年10月-2018年10月在本院兒科住院治疗的94例RMPP患者为RMPP组。（1）纳入标准：年龄2～14岁;RMPP符合《儿童社区获得性肺炎管理指南》的诊断标准[5];依从性好，可以配合临床治疗。（2）排除标准：合并有肺结核、支气管哮喘、医院获得性肺炎及严重营养不良、免疫功能低下。选取同期轻型MPP 60例为MPP组及60例行支气管异物取出术儿童为对照组。患儿家属均对本研究知情同意，本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 所有患儿术前完善各项检查，禁饮食，予以经纤维支气管镜检查或支气管肺泡灌洗术，根据术前胸部CT检查明确病变部位，2%利多卡因局部麻醉，探查各支气管段无病变后，将支气管镜放置于病变肺段入口处，温生理盐水反复灌洗3次以上，总量<2 mL/kg。负压回收大于30%灌洗液，退镜。回收的灌洗液无菌纱布过滤，标本分为2份，第一份标本4 ℃下500 r/min离心5 min，沉淀送细胞学检查;第二份标本4 ℃下500 r/min离心5 min，取上清液放于离心管中进行炎性因子检查。

1.2.2 灌洗液巨噬细胞检测 取灌洗液标本，4 ℃下500 r/min离心5 min，留取沉淀，涂片，烘干甲醇固定，干燥后Wright-Giemsa染色10 min，37 ℃恒温箱烘干，普通光学显微镜选择500个细胞，计数巨噬细胞百分比。

1.2.3 灌洗液IL-2、IL-8、IL-10的检测 取灌洗液标本，4 ℃下500 r/min离心5 min，取上清液，应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定IL-2、IL-8及IL-10水平。试剂盒由美国DSL公司提供，严格按说明书步骤进行。

1.3 观察指标 （1）比较各组肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平;（2）比较各组肺泡灌洗液中巨噬细胞计数;（3）分析RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞计数与IL-2、IL-8、IL-10水平的相关性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，方差齐者采用LSD-t检验，方差不齐采用Dunnetts T3检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。Spearman分析巨噬细胞百分率与IL-2、IL-8、IL-10水平的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较 三组患者的性别、年龄、身高及体重比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 三组肺泡灌洗液中IL-2、IL-8、IL-10水平比较 三组患儿BALF中IL-2、IL-8、IL-10含量比较，差异均有统计学意义（F=11.59、23.12、19.46，P=0.00、0.00、0.00）。RMPP组患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组及MPP组，IL-10含量低于对照组及MPP组，差异均有统计学意义（P<0.05）;MPP组患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组，IL-10含量低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组肺泡灌洗液中巨噬细胞计数比较 MPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数为（32.2±6.3）%，高于RMPP组的（27.6±5.7）%，低于对照组的（66.1±7.9）%，差异均有统计学意义（P<0.05）;RMPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。三组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数比较，差异有统计学意义（F=9.42，P=0.02）。

2.4 RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞计数与IL-2、IL-8、IL-10水平相关性分析 RMPP患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞计数与IL-10水平呈正相关（rs=0.793，P=0.003），与IL-2、IL-8水平均呈负相关（rs=-0.823、-0.917，P=0.001、0.001），见表3。

3 讨论

近年来RMPP发病率逐年升高，引起了临床医师的重视。RMPP病程迁延，发展迅速，导致呼吸衰竭以及其他系统受损，死亡率高，为目前临床中常见的急危重症之一[6]。因此早期预测RMPP并予以积极治疗，成为保障患儿生命安全的关键。但此方面内容并未引起临床医师足够重视，关于RMPP预测的报道较少，该研究领域尚存在一定的不足。细胞因子是由淋巴细胞、巨噬细胞等分泌的一种物质，可以与细胞膜特定受体结合，传递特定信号，从而调控T、B淋巴细胞，在体液、细胞免疫中发挥重要的作用。CD4+T细胞可分为Th1、Th2两种亚群。Th1细胞主要在细胞免疫中发挥作用，辅助细胞毒性T细胞分化，参与迟发型超敏反应，分泌IL-1、IL-2、IL-8、IFN-γ等;Th2细胞在体液免疫中发挥作用，可分泌IL-4、IL-6、IL-10等[7-9]。

目前普遍认为，迟发型超敏反应在MPP中起到至关重要的作用。有研究表明，IL-2可以引起淋巴细胞向周围组织浸润，巨噬细胞的富集[10]。IL-8是由巨噬细胞和内皮细胞分泌，可引起中性粒细胞的聚集[11]。研究证实，肺炎支原体感染患者血清IL-8水平升高，IL-8在肺炎支原体病理改变中发挥着至关重要的作用[12]。另外研究发现，RMPP患者血清IL-4、IL-10水平均高于正常人群，提示Th2细胞在肺炎支原体感染中发挥重要的作用[13]。IL-10可以抑制细胞分泌功能，抗炎能力强，减轻炎症因子对人体的损伤。但随着IL-10含量的增加，IL-10抑制免疫系统，导致病情恶化。有学者认为，IL-10作为一种抗炎细胞因子，能调节T细胞比例，控制炎症反应强度，含量增加提示支气管肉芽组织增生或黏膜出血坏死得到抑制[14]。另有研究表明，IL-10可以抑制Th1細胞及单核细胞，抑制IL-6、TNF-α、IL-8促炎因子的释放[15-16]。本次研究笔者观察了RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量，结果表明RMPP组患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组及MPP组，IL-10含量低于对照组及MPP组，差异均有统计学意义（P<0.05）;MPP组患儿BALF中IL-2、IL-8含量均高于对照组，IL-10含量低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。这提示BALF中细胞因子可用于初步评价病情严重程度，进而简化临床预后预测工作，为治疗途径探索提供指导依据。

正常人肺泡灌洗液中细胞分类依次为单核/巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞，肺泡灌洗液中各细胞数量的改变与肺部疾病有关。细菌进入肺部后，首先肺泡巨噬细胞聚集、浸润，识别并吞噬病菌，呈递抗原给淋巴细胞，激活人体免疫功能，巨噬细胞呈递抗原，吞噬坏死细胞，产生多种炎性因子，既是启动细胞又是细胞因子的靶点，在病情进展中发挥重要作用[17-18]。本研究结果表明，MPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数高于RMPP组，低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）;RMPP组患儿肺泡灌洗液中巨噬细胞数低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。这与其他人的研究结果基本一致[19-20]。

但此次入选样本量较小，随访时间不长，故有待于增加样本量，进一步研究其中的关系予以证实其对于改善RMPP的预后及确切机制，为指导临床治疗提供参考。综上所述，RMPP患者BALF中IL-2、IL-8及IL-10含量与MPP患儿存在差别，在临床诊断方面上具有一定的应用价值。

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（收稿日期：2020-03-12） （本文编辑：姬思雨）