免疫胶体金技术在中药材活性成分检测中的研究进展

刘立微

摘  要：中药材质量主要取决于其自身活性成分，目前工作人员主要依靠仪器设备检测中药材自身活性成分，这种检测方式较为复杂，无法做到快速检测。而免疫胶体金技术可以有效改善这种情况，该技术具有较高灵敏度，较强的特异性，便于处理样品，能够快速检测等特征，与传统方式相比其实用性显著。文章从该技术工作原理与特点等多方面对其进行介绍，并探究该项技术在重要活性成分检测中的应用情况。

关键词：免疫胶体金;中药材活性成分;研究进展

胶体金是免疫胶体金技术应用过程中不可或缺的部分，利用该项技术自身具备的特征，可以在光镜电镜环境下对胶体金内部抗原物质金进行检测定位，定性，甚至是定量研究，是一项全新的标记技术。现如今，随着科学技术不断发展创新，该技术在应用过程中逐渐完善，成为第四大标记技术。因其本身具有高灵敏度，较强特异性，便于处理，快速检测等多项优势，已广泛应用在各个检测仪器当中，例如光镜，电镜，流式细胞仪等，最近几年，该技术也被用于检测中药材自身活性当中。

1 免疫胶体金（ICG）技术的概述

1.1 ICG技术的基本原理及特点

1.1.1 基本原理

氯金酸若受到抗坏血酸，白琳等多种还原剂的影响将会形成某种颗粒物质，且带有负电的疏水胶溶液，如果受到静电影响液体会逐渐成为胶体状态，故此将其称作胶体金。运用还原法可以将氯金酸制成大小不一的胶体金颗粒。在弱碱环境当中，这种颗粒本身会带有负电荷，能够与其他直径较大分子或者蛋白质分子融合在一起，利用显微镜对其进行观察可以发现物质当中含有部分黑褐色颗粒，另外部分标记物与相应配体结合在一起会形成粉红色斑点。胶金体无法影响蛋白质或者其他分子生物特征，因此该技术常被运用于免疫学，组织学等多项医学领域当中。

1.1.2 特点

和其他医学技术进行比较可以看出，免疫胶体金技术具有以下几项特征;第一，该技术可以借助静电发挥的作用与多种生物分子进行统合，且不会改变生物分子原有活性;第二，该技术拥有某种特异性，并不会吸收组织细胞;第三，免疫胶体金标记技术常用于光镜和荧光显微镜当中，IGSS方法是目前最有效的免疫方法，因胶体金本身也可以激发电子，故此可以用于扫描电镜工作当中，且其颗粒较为密集，且在显微镜环境下分辨率较高，因此分辨过程较为轻松。

1.2 ICG检测技术的应用

1.2.1 胶体金技术在电镜技术上的应用

目前随着免疫胶体金技术愈发成熟，该技术在运用过程中已经与电镜技术相互融合，且成为最为常用的免疫细胞化学方法。该技术不仅有上述所说的特征，且可以对抗原体进行测量，定性，观察，通过观察结果结合实际情况选用标记方法。免疫胶体金技术多重标记法可以将形态，功能融合在一起，借助这种方式能够了解分子之间的关系，包括其合成，分泌等过程。借助不同方式观察戊型肝炎病毒却发现胶体金方法当中有许多病毒颗粒都被金属颗粒包裹，根据金属颗粒分布情况可以轻松找到病毒颗粒，由此可以看出免疫胶体金电镜技术在运用过程中具有简便，快速的能特征，提升检测效果。

1.2.2 在快速检测上的应用

免疫胶体金技术目前已经成为免疫学领域当中常用的检测方法之一，主要用于检测药物中残留的细菌，病毒等。常用的方法有胶体金免疫层析法、斑点免疫金渗滤法制成试纸条或试剂盒。制备盐酸克伦特罗载体抗原，免疫动物后产生高效价的特异性抗体，纯化抗体与胶体金结合成免疫金，制备成简易的检测试纸条。通过检测试纸条的敏感性、保存期、金标抗体工作浓度选择、操作方法对比、实验检测及与单抗金标试纸条平行检测等试验，证明建立的免疫金试纸法快速检测盐酸克伦特罗具有实用性、可靠性和稳定性。通过优化胶体金溶液的pH值和呕吐毒素的三联检测卡。结果证明：该三联检测卡操作简便、快速、准确、稳定，且能同时检测3种真菌毒素，有较好的应用前景。

2 中药材活性成分检测方法的概述

2.1 化学检测法

以往工作人员常用化学反应等方法检测中药材自身活性成分，从药材内部将活性成分提取出来，并对其采取提纯措施，根据成分自身化学结构选择相应鉴别方法，例如可以用将盐酸与镁粉混合在一起，通过二者产生的化学反应鉴定芦丁中的活性物质黄酮类化合物，观察溶液颜色变化情况判断液体当中是否含有相应化合物。和仪器检测方法不同，该方法操作简单便捷，且无需投入过多时间精力，但其靈敏度和专一性无法和仪器检测法比较，这种方法无法做定量分析，故此该方法不常用于检测中药材活性成分。

2.2 仪器联用法

为了提高检测方法的专属性、灵敏度、准确度等，通常将色谱的高效分离与质谱的高分辨力联合应用，将色谱仪与质谱仪或其他仪器串联使用。文献中建立了超高效液相色谱一串联质谱（uPLc-Ms/MS）测定癍痧凉茶中18种活性成分的定量分析方法，结果表明：所建立的方法线性良好、灵敏度高、精密度高、准确度好、稳定性理想。

3 免疫胶体金技术在中药材活性成分检测中的应用

大多情况下，中药材活性成分检测中会将单克隆抗体技术与ICG技术联用，制备成胶体金免疫检测试纸条。制备免疫胶体金试纸条，首先需制备相应的单克隆抗体，因中药材活性成分多为小分子物质，只有反应原性而不具备免疫原性，必须将其连接到一些大分子蛋白载体上以形成偶联物，借助大分子T细胞表位间接诱导B细胞激活、分化增殖，产生针对半抗原的特异性抗体。常见的载体有牛血清白蛋白、多聚赖氨酸等。而偶联的方法由目标化合物的官能团决定，若半抗原带有游离羧基，可用碳化二亚胺法、混合酸酐法、活泼酯法;若半抗原带有酮基，可用manni ch反应和羧甲基羟胺法。半抗原与载体蛋白偶联后通过纯化获得具免疫原性的人工合成抗原，并将其免疫动物，一般选用的动物为小鼠或大鼠，使动物体内产生致敏B淋巴细胞。处死动物并取出其脾脏，制备成脾细胞悬液，加入促进剂，再与同系的骨髓瘤细胞按一定比例混合，获得杂交瘤细胞，通过色谱法或沉淀法纯化抗体，并进行效价测定。

4 结束语

综上所述可以看出，如今我国中医药在临床领域已经得到广泛的应用，对药材需求量越来越多。然而因药材资源匮乏，环境质量不断下降导致大部分天然药材安全性无法得到保障，甚至部分药材已经出现变异情况。鉴于这种情况有关部门要加强对药材市场的监管力度，结合实际情况选用检测方法。目前，在对中药材活性成分检验过程中，免疫胶体金技术已经成为最常用的检测技术，和传统技术进行比较可以发现，该技术方法简单快捷，特异性较强，可以快速检测出中药材自身活性成分，发展前景广阔。

参考文献

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