酸碱处理去除血液制品中热原工艺的探索

李常禄

摘  要：目的是对酸碱处理去除血液制品中热原工艺进行探索和研究。方法是通过调整高热源制品的plH、离子强度蛋白浓度等参数，使用不同的温度和不同的时间对热源的变化进行观察。结果当pHIO或pH4被孵放一定的时间后会出现毒素明显降低的现象，其中，在使用鲎试法和家免法对经过pHI10.37C孵放的人血白蛋白（HAS）制品进行检测后，结果为热源以及其他指标均为合格，都达到了现行的要求。结论使用酸碱处理法对血液制品中的热源是十分经济且有效的方法。

关键词：酸碱处理;血液制品;热原质

血液制品是各种血浆蛋白制品的统称，比如胎盘血白蛋白、人血白蛋白以及静脉注射的人免疫球蛋白等都属于血液制品。制作成血液制品的原料为健康的人血浆，一个健康的人血浆和蛋白质在血液中的比例分别为92%和7%左右而血液制品则是通过对血液中蛋白质进行提取分离。但是由于在自然环境中存在很多的热源质，热源质会对很多大规模的血液蛋白分离技术产生影响，会受到热源污染的影响产生热源反应，热源是一种毒性反应物质，其中美药理性很强，会对血液制品造成一定的影响和破坏。

1 对热源的处理方法分类

本文将会深入研究去除血液制品中热原的方法，其中一类方法是针对不同细菌内部的相对分子的质量来去除细菌内的毒素，这种情况可以使用分子筛或者是使用超滤的方法进行去除处理。一般情况下这种方法主要是应用于低分子量的输液药品中，针对注射型药物所使用的方法有两种，一种是使用各种层析法，这种方法使用的范围较广并且十分的有效，不过该该方法所需要的设备比较昂贵，不能对数量较大的药品进行处理;另外一种的方法是使用酸碱氧化剂的化学方法对其进行处理。这种化学方法的效果也十分的有效，不过该方法对制品有一项要求即该制品对化学条件具有一定的稳定性。在本次的研究中主要是使用酸碱的化学方法，研究的方法结果如下文所示。

2 材料与方法

2.1 主要试剂

内毒素工作标准品为中国药品生物制品检定所提供;鲎试剂为福建省福州东方鲎试剂厂产品，其灵敏度为0.5EU/ml;人血白蛋白及免疫球蛋白由本所血液制剂室提供。

2.2 酸碱对溶液中内毒素的影响

将注射用生理盐水分成2份，分别用1mol/LHCI或1mol/L NaOH调pH至4.0+0.5、10+0.5，分别加入一定量的标准内毒素，使内毒素浓度为4EU/ml，除菌过滤后分成4份，分别放在57+0.5C、37土0.59、20+0.5C、（2～8）土0.5C孵放，在不同的时间取样，用鲎试法测其内毒素含量。

2.3 碱处理去除热原的最佳条件

将20%的人血白蛋白制品（鲎试法和家兔法检测热原均合格）用注射用水稀释，使其蛋白浓度为10%，用1mol/L NaOH调pH到10.0+0.2，再加入一定量的标准内毒素，使其浓度为4EU/ml之后分成3份，将其中2份的Na+浓度调为40mmol/L，除菌过滤后分别置于37+0.5C、57+0.5C孵放。另一份调Na*浓度为160mmo/L，除菌过滤后37土0.5C孵放，不同时间取样用特异性鲎试剂（去C*因子）凝胶法测其内毒素含量。并对样品进行HPLC、电泳及外观等的分析。

2.4 碱处理法复制3批高热原人血白蛋白

将20%人血白蛋白用注射用水稀释至10%，用1mol/L NaOH调pH到10.0士0.2，除菌过滤后37C孵放，不同时间取样用特异性鲎试剂（去C*因子）凝胶法（TAL）测其内毒素含量。孵放后TAL阴性的制品再用家兔法验证，并对制品进行全检。

2.5 酸孵放对静脉注射免疫球蛋白（IVIG）中内毒素的影响

在5%的低pH（pH4t0.2）静脉注射丙种球蛋白中，分别按5EU/ml及2.5EU/ml的量加入内毒素，摇匀后取样，采用家兔法检测热原，另将样品于24士1C孵放24d，同样用家兔法检测热原。

3 结果

3.1 酸碱处理对生理盐水中内毒素的去除效果

将内毒素浓度为4EU/ml的生理盐水样品置于pH（4、10）且温度不同的地方进行孵放，在对该样品分别在不同的时间利用鲎试法进行检测，检测结果为：样品在pH4且在不同的温度中进行孵放，时间均在24小时之内，这时其内毒素含量出现了快速的下降，时间到达35小时后，其浓度下降至1EU/ml;当样品在pH10时，显示的结果为孵放温度越高，内毒素的下降速度越快，当温度为57度时，时间为35小时后下降为阴性，当温度为37度时孵放的时间到达76小时时下降为阴性，其检测的结果如下图1和图2所示。

3.2 碱处理对人血白蛋白中内毒素去除效果

含4EUml内毒素的10%人血白蛋白，在pH10条件下，57C孵放24h、37C孵放48h经鲎试验检测均为阴性，且钠离子浓度对内毒素的降解作用无影响，见图3。另外，碱处理前后制品的HPLC及PACE电泳图谱无差异。碱处理前制品多聚体含量为1.42%，单体加双体为98.58%;经pH10、37C孵放多聚体含量为1.39%，单体加双体为98.61%。

3.3 碱处理法复制高热原人血白蛋白的效果

碱处理（pH10、37C）3批高热原人血白蛋白制品，第6天家兔法和鲎试法检测其热原均合格，且其余各项检定指标均符合现行《中国生物制品规程》要求。

4 讨论

经过本实验可以进行以下总结，当酸碱程度在pH4和pHI0的条件下，细菌中的内毒素可以被充分的去除从而达到降低血液制品中热源的目的。而酸碱条件之间进行比较可以得出，碱性条件会比酸性条件去除热源的规律性更强，也具有更强的稳定性，在碱性条件下钠离子浓度的高低不会对处理热源的效果产生影响。人血白蛋白在PH10和37度的条件下进行6天的孵放，其常规的指标并未出现明显的变化，同时也达到了现行的《中国生物制品规程》的要求，不过白蛋白的额结构有无出现变化并未明确，具体的结果需要进行进一步的检测;当处于pH4实验环境中时，对免疫白蛋白进行零处理时，对其中一些抗体产生了一些影响，其中白喉抗毒素、抗-HBs的抗体活性并未出现明显的变化。综上所述，经过验证后可以得出去除热源的有效条件为在酸碱度为pH4、温度为24度时间为24小时时，对热源的去除效果最好，可以作為常规的免疫球蛋白中灭活病毒的方法。

参考文献

[1]孟丽，杨汇川，龚曼琳，等.酸碱处理去除血液制品中热原工艺的探索[J].中国生物制品学杂志，2001（01）：51-53.

[2]翁守能，张超.人血白蛋白制品污染热原去除新工艺[J].医疗卫生装备，1990（3）.

[3]王克勤，蔡兴三，严涛世.去除人血白蛋白制品中污染热原的工艺[J].广后医学.