T-SPOT.TB 与传统检测技术对活动性结核病的鉴别诊断分析

方四廷

（弋阳县人民医院感染科 江西 上饶 334400）

活动性结核病是临床常见的传染性疾病，患者处于活动期，有结核杆菌排出现象。患者主要有咳嗽、食欲不振、低热、干咳等症状，具有强传染性。随着检验技术的不断进步，临床对活动性结核病诊断方法也明显增多，包括组织病理学检查、抗酸染色、结核菌素试验、结核菌培养等[1]。结核菌培养结核病诊断的“金标准”，但是测试时间长、检出率极低，容易延误病情。T-spot.TB 试验利用酶联免疫斑点技术对特异性抗原进行检测，可重复操作，大大提高了诊断效率。本文就结核菌培养、T-spot.TB 试验对活动性结核病的诊断价值进行分析。

1.资料与方法

1.1 一般资料

将选取本院2019 年1 月—2020 年1 月收治的120 例活动性结核病患者进行观察，其中男性患者89 例，女性患者31 例；年龄23 ～70 岁，平均年龄（47.7±5.3）岁；病程0.5 ～9 月，平均病程（5.6±0.9）月；所有患者均符合WHO 关于活动性结核病诊断标准，有结核亲密接触史，经影像学检查确诊，本次研究获得本院医学伦理会审批，患者均知情同意。

1.2 方法

结核菌培养：采集患者晨起的第2 或3 口痰的痰液标本3～5ml，放置于室温后进行碱处理，接种酸性改良罗氏培养基斜面，8周后观察菌落生长情况，菌落超过斜面面积的25%即为阳性。

T-spot.TB 试验：采集外周血，采集量为8ml，离心后对单个核细胞进行提取，洗涤后对细胞数量进行计算。结核特异性抗原PBMCs、ESAT-6 加入预包被抗体反应孔孵育，时间为18h。向预包被抗体加入效应T 淋巴细胞释放因子，洗板后加入二抗，孵育1h 后洗板，加入显色液，7Min 后用蒸馏水反应，Elispot进行效应T 细胞数量。阳性：（1）空白对照孔斑0 ～5 个点，抗原B 或抗原A 孔斑点数-空白对照孔斑点数≥6；（2）空白对照孔斑6 ～10 个点，抗原B 或抗原A 孔斑点数/空白对照孔斑点数≥2。

1.4 统计学方法

采用SPSS18.0 处理，计数资料用百分比（%）表示，经χ2检验，P ＜0.05 表示差异有统计学意义。

2.结果

2.1 两种检测技术对活动性结核阳性检出率比较

T-spot.TB 试验阳性率明显高于结核菌培养，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表1。

表1 两种检测技术结果比较[n（%）]

2.2 诊断价值比较

T-spot.TB 试验结果显示活动性结核病患者T 细胞斑点数的中位数是69.5（32.0，135.0），T-spot.TB 试验灵敏度、特异度、阴性预测值与阳性预测值均高于结核菌培养，差异有统计学意义（P ＜0.05），如表2。

表2 两种检测技术的诊断价值比较（%）

3.讨论

活动性结核主要因感染结核分支杆菌引起，具有病程长、传染性强、病死率高的特点，对患者及周围密切接触者的身心健康均有不良影响[2]。疾病发生后不仅会给患者造成持续不适感，使患者在工作以及生活中均受到影响，由于症状反复发作因此易导致患者出现负性情绪，同时由于结核分枝病毒具备传染性，因此患者的照护者以及周围人群均存在较大心理压力，不愿意与患者接触，周围人群的疏远也会导致患者的情绪受到打击，不利于患者生活质量改善。因此为使患者的疾病得到有效控制，就需要尽早使疾病得到诊断，并为其开展积极治疗。

结核菌培养出结核分枝杆菌阳性是临床诊断结核病的金标准，但是结核菌培养试验耗时较长，观察时间至少为2 ～6 周，甚至2 个月，且受实验室条件、检验人员技术、标本采集质量的影响阳性率较低，不利于结核病的及时诊治[3]。

结核分枝杆菌基因中特殊的RDI 序列可生成结核特异性抗原CFP-10、ESAT-6，从而刺激T 淋巴细胞生成干致敏T 淋巴细胞、IFN-γ[4]。T-SPOT.TB 试验利用人体感染结核杆菌后会出现细胞免疫这一原理，酶联显色后ELISPOTReader 分辨系统计算斑点数量，通过效应T 细胞数量，判定是否感染结核分枝杆菌。斑点数量越多或者在短时间内迅速增多，提示结核病的活动程度越高，应加大抗结核药物使用剂量[5]。本文中T-SPOT.TB 试验阳性率达到90.%，且诊断特异性、灵敏度均高于结核菌培养试验，大大提高了对结核病的准确检出率，试验时间仅需24h，可重复试验，对实验室、样本要求相对降低，可及时指导临床进行治疗。

综上所述，T-SPOT.TB 试验是现代免疫学、基因学发展的接触产物，可快速、准确进行活动性结核病诊断，相较传统检测技术具有明显优势。