气相色谱质谱法同时测定动物组织中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺及氯霉素

张春辉

【摘 要】目的：建立食品中莱克多巴胺、盐酸克伦特罗和氯霉素的气相色谱质谱联检验方法。方法：样品经提取后经衍生化试剂衍生，气相色谱质谱联用仪分析。采用EI离子源电离离子定性原则结合保留时间进行确证。结果：在适宜的质谱条件下，电子轰击电离可获得稳定可靠的碎片离子。盐酸克伦特罗线性范围为10～200μg/L，相关系数r=0.999 3，回收率为95.3%～96.8%，RSD%为1.51～1.76。氯霉素线性范围为10～200μg/L，相关系数r=0.999 9，回收率为92.1%～93.1%，RSD%为1.62～1.82。莱克多巴胺线性范围为10～200μg/L，相关系数r=0.999 3，回收率为91.6%～92.8%，RSD%為1.91～2.26。结论：该法快速、准确、灵敏，适用于动物组织中莱克多巴胺、盐酸克伦特罗和氯霉素的确证检测。

【关键词】气相色谱质谱法;盐酸克伦特罗;莱克多巴胺;氯霉素

【中图分类号】S859.84 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2020）09-0079-03

0 引言

盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和氯霉素曾作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业生产，但在使用中发现其在动物源性食品中残留会引起多种急性和慢性毒副作用，危害人体健康。目前，这3种化合物已被列为禁用兽药。兽药残留相关的食品安全问题的频发，也使其成为国际贸易中的非关税性贸易壁垒，引起国际社会和各国政府的高度重视，纷纷采取措施对兽药残留进行严格监控。因此，发展快速、简易、高灵敏、高通量的兽药残留检测技术已成为当前的迫切需要[1]。

目前，关于食品中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和氯霉素残留的检测方法主要有液相色谱法（LC）[2-8]、气相色谱法（GC）[9-11]、液相色谱-串联质谱联用法（LC-MS/MS）[12-15]、气相色谱质谱法（GC-MS）[16-18]，GC、LC法由于采用氢火焰离子化检测器和紫外检测器检测，缺乏对色谱流出物分子结构的鉴别，依赖保留时间定性，当存在杂质干扰或保留时间漂移时就无法准确定性识别。气相色谱质谱法中盐酸克伦特罗等采用的是EI离子源，氯霉素采用的是负化学离子源，在相同的离子源下不能同时测定。因此，建立一种能同时测定动物组织中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺及氯霉素的检验方法，对食品安全监测具有重要的意义。

本文建立了动物组织中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺及氯霉素的气相色谱质谱检测方法，该方法操作简单，干扰小，结果精密度良好，准确度可靠，适用于动物组织中莱克多巴胺、盐酸克伦特罗及氯霉素的测定。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

甲醇、甲苯为色谱纯（德国CNW公司），正己烷、乙酸乙酯为色谱纯（美国honeywell公司），双三甲基硅烷三氟乙酰胺BSTFA、三甲基氯硅烷TMCS为分析纯，无水硫酸钠、氯化钠、碳酸钠、氨水为分析纯（西陇科学股份有限公司），盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素（国家标准物质中心）。

1.2 仪器

仪器包括GCMS6800型气相色谱质谱联用仪（天瑞仪器仪器股份有限公司）、超声波清洗机（深圳市洁盟清洗设备有限公司）、台式高速离心机（盐城市凯特实验仪器有限公司）、分析天平（上海精科天美科学仪器有限公司）。

1.3 仪器条件

1.3.1 色谱条件

色谱柱：5%苯基甲基聚硅烷弹性毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）。进样口温度：270 ℃。升温程序：初温120 ℃保持3 min，以25 ℃/min升至230 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min升至280 ℃保持3 min。载气：高纯氦气（99.999%）。流速：1.5 mL/min，不分流进样，不分流时间0.5 min。进样量：2μL。

1.3.2 质谱条件

EI源：温度230 ℃。电子能量：70 eV。气质接口温度：280 ℃。检测电压：1 400 V。质量扫描范围：50～550 u。

监测离子：盐酸克伦特罗为86、262、243 m/z，定量离子为86 m/z;氯霉素为225、208、194 m/z，定量离子为225 m/z;莱克多巴胺为250、179、267、502 m/z，定量离子为250 m/z。

1.4 分析步骤

1.4.1 试样提取

称取试样5 g（精确到0.001 g），置于50 mL离心管中，加乙酸乙酯20 mL，再加10%碳酸钠溶液10 mL，10 000 r/min以上均质60 s，8 000 r/min离心10 min，取上清液至离心管中，残渣中加入乙酸乙酯10 mL在漩涡混合器上混合1 min，8 000 r/min离心10 min，取上清液至离心管中，合并上清液;在收集的有机溶剂中加0.1 mol/L盐酸5 mL，充分混匀后，在8 000 r/min离心5 min，取下层液，同样步骤重复萃取一次，合并萃取液，待净化。

1.4.2 试样净化

依次用甲醇5 m L、水5 mL、30 mmol/L盐酸溶液5 mL润洗SCX阳离子交换固相萃取柱，取上述上清液过柱，弃去流出液，并依次用水5 mL和甲醇5 mL淋洗柱子，抽干;用4%氨化甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液50 ℃氮吹至干，吹干物待衍生。

1.4.3 衍生化

吹干物加入甲苯100μL和衍生剂（BSTFA+TMCS 99∶1）100μL，加塞后于涡旋混合器充分混匀，在70 ℃恒温衍生60 min，氮气吹干，加甲苯0.5 mL溶解供GC-MS分析。

将盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素标准溶液用甲醇配制成1、10、20、50、100、200μg/L的标准使用液，加4%氨化甲醇5 mL后，氮气吹干，与样品同步进行衍生化。

1.4.4 气相色谱-质谱测定

（1）定性方法。在相同试验条件下，试样峰与标准峰相对保留时间是相同的，用nist库进行离子比对定性，试样峰中选择性离子相对强度不超过标准溶液相应选择离子相对强度平均值±20%。

（2）定量方法。在规定的色谱条件下，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，采用外标法定量。

2 结果与讨论

2.1 样品色谱图

盐酸克伦特罗标准溶液色谱图（50μg/L）、氯霉素标准溶液色谱图（50μg/L）、莱克多巴胺标准溶液（50μg/L）定量离子色谱图、空白样品加标（50μg/L）TIC总离子流图分别如图1至图4所示。

2.2 线性实验

盐酸克伦特罗在10～200μg/L范围内以峰面积对浓度作图，所得曲线方程Y=2 360.135 4X+39 823.416 9，相关系数r=0.999 3。

莱克多巴胺在10～200μg/L范围内以峰面积对浓度作图，所得曲线方程Y=103.403 4X-119.706 2，相关系数r=0.999 3。

氯霉素在10～200μg/L范围内以峰面积对浓度作图，所得曲线方程Y=2015.795 1X-6 140.837 6，相关系数r=0.999 9。

2.3 回收率和精密度

在鸡肉、猪肉、虾肉中分别加入盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素50μg/kg，平行试验6次，计算其添加回收率及重复性相对标准偏差。

鸡肉中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素的添加回收率和重复性相对标准偏差见表1。

2.4 结果讨论

采用电子轰击离子源气相质谱法同时测定动物组织中莱克多巴胺、盐酸克伦特罗和氯霉素。在50μg/kg添加水平下，加标回收率在90%以上。本法快速、准确、灵敏，适用于动物组织中莱克多巴胺、盐酸克伦特罗和氯霉素的确证检测。同时，本法首次采用电子轰击离子源气相质谱法测定物组织中氯霉素，填补了国内无电子轰击离子源气相质谱法测定氯霉素的技术空白。

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