一例香猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的诊断与防控

杨通莲 汪忠荣 梁美英

（1.从江县动物疫病预防控制中心，贵州从江 557400；2.黔东南州动物疫病预防控制中心，贵州凯里 556000）

猪繁殖与呼吸综合征常称猪蓝耳病，由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种高度接触性传染病[1]。该病毒可感染不同品种、性别和年龄的猪，典型症状：母猪高热和繁殖障碍；仔猪与肥育猪呼吸道困难，给养猪业造成很大的经济损失。2020年8月15日某合作社香猪场向县动物疫病预防控制中心报告，该场饲养的153日龄香猪有4头不食，用阿莫西林和卡拉霉素等治疗未见好转。县级兽医技术人员立即到现场进行调查、采样送兽医实验室检测，现将有关诊断情况报告分析。

1 材料

1.1 病料

无菌采集发病香猪肝脏、肺脏、脾脏、扁桃体和淋巴结等组织。

1.2 试剂

猪蓝耳病变异株病毒直接扩增RT-qPCR抗原检测试剂盒（批号：20191016414，中国农业科学院兰州兽医研究所）由贵州省动物疫病预防控制中心赠送，猪瘟通用型荧光RT-PCR检测试剂盒（批号：CSFV200313401）购于上海快灵生物科技有限公司。

2 方法

2.1 细菌分离培养

在净化工作台中，无菌操作，挑取肺脏，肾脏和心脏样品接种到LB培养基，在生化培养箱中37℃培养24h，然后观察。

2.2 病毒核酸检测

（1）根据试剂盒说明书操作，取10mg组织样本放入1.5mlEP管中，加入500µl裂解液B1，用组织研磨器充分研磨。

（2）在研磨液中加入500µl裂解液B2混匀。

（3）常温12000rpm离心2min，去150µl上清液于干净的EP管中，即为模板。

（4）按说明书要求配制反应液和设置反应程序。

（5）结果判定

①猪蓝耳病

阳性对照扩增曲线有明显对数扩增曲线，且Ct值≤25，阴性对照扩增曲线无Ct值显示，二者均成立才可判定试验成立，否则无效。

阳性：检测样品Ct值≤30，为猪蓝耳病毒变异株核酸阳性。阴性：样品Ct值＞35或无数值，判为阴性。可疑：若30＜Ct值≤35时为可疑，需重新对样品裂解处理检测，如仍为可疑，判为阳性，若重复检测Ct值＞35，判为阴性。

②猪瘟

阳性对照扩增曲线有明显对数扩增曲线，且Ct值＜30，阴性对照扩增曲线无Ct值或Ct值＞34或无扩增曲线，二者均成立才可判定试验成立，否则无效。

阳性：检测样品Ct值＜30，为猪瘟核酸阳性。阴性：样品Ct值＞34或无数值，判为阴性。可疑：若30≤Ct值≤34时为可疑，需重新对样品裂解处理检测，如仍为可疑，判为阳性，若重复检测Ct值＞35，判为阴性。

3 结果

3.1 病理剖解

剖检1头病猪可见：全身淋巴结出血、肿大；肺脏暗红色，出血、肿胀；肺实变；心外膜有针尖大的出血点，喉头和膀胱黏膜均有出血点；肾脏有出血点、肿大（图1）；肝脏质硬、肿大、暗红色（图2）；脾脏肿大、出血。

图1 肾脏肿大、有出血

图2 肝脏肿大、出血

3.2 细菌分离培养

培养24后观察，未见细菌生长。

3.3 荧光PCR检测

实时荧光RT-PCR检测，结果猪蓝耳病毒变异株核酸阳性（见图3），猪瘟病毒核酸阴性。

4 防控措施

4.1 紧急接种猪蓝耳病疫苗

对全场香猪群进行超剂量紧急免疫，按育肥猪2头份每头，种猪5头份每头接种，接种时在接种好的猪身上做好标记和免疫记录，做到一头不漏。

4.2 加强管理、改善饲养条件

首先对圈舍彻底清扫后，消毒。改变原饲养方式，原只喂精料的，现改为精料加青汁饲料（南瓜、红薯藤等）。在饮用水中加入少量高锰酸钾消毒。其次完善防疫设施，严格控制工作人员随意进出，严防鸟类进入圈舍觅食，并对病猪作无害化处理。加强灭鼠灭蚊。

图3 猪蓝耳病扩增结果

5 讨论

调查可知，该场存栏香猪280头，其中母猪20头，肥猪260头，8月 日开始发病，期间死亡6头，4头病猪体温平均41.1℃，确诊后，病猪全部扑杀并无害化处理。猪蓝耳病疫苗注射后一周后，疫情得到控制，未发现新病例，猪群食欲逐渐恢复，至8月底，其疫情完全获得控制。

该场2019年8月建成，9月开始引进香猪，猪场离村公路局里不到100米，且在村寨入口处，同时本村公用垃圾池养殖场旁公路边。场内没有更衣室，只有一道消毒池进场，管理不规范，其消毒池干枯，无消毒水，消毒池和消毒间形同虚设，外来人员可以进出随便，存在重大的疫病传播隐患，为此次疫病发生埋下了伏笔。一是猪场内消毒设施缺乏，喷雾器等设备几乎没有，据工作人员介绍，场内没有进行定期消毒；二是没有免疫程序，免疫根据政府每年的春秋两防进行，场内的技术人员为村防疫员，无专职技术员，免疫工作由其负责，导致免疫次数不够，免疫病种少，造成猪场缺乏抵御重大疾病。饲养员是村里贫困户，缺乏规模饲养场实践经验，无疫病防控意识，猪发病后管理人员未引起重视，没有采样检测确诊，全凭借经验用抗生素治疗。查阅兽医免疫注射记录，发现兽医记录不全，检查场内现有疫苗，部分疫苗真空度不够，影响疫苗效价；观察饮水，颜色泛黄、尝试味苦，不符合饮用标准；饲料存放处，蝇多，天气昼夜温差较大等原因，导致猪群的抗病力下降。而最初发病的肥猪，据调查也是饲养在管理和通风最差的一栋育肥猪舍内，综合分析，应是多方面的原因共同作用，导致猪蓝耳病的感染[2]。此次疫病的发生使我们更为清楚的认识到防疫工作和饲养管理同等重要，严格科学的防疫措施能有效的阻止病原的入侵，合理的免疫程序和有效的疫苗免疫，能保证猪群维持较高的抗体水平，进而增强抵御传染病的能力，是创造经济效益的基础。