补阳还五汤对运动疲劳脑损伤大鼠脑组织凋亡信号通路的影响

尹瑞欣

【摘 要】目的：探究补阳还五汤对运动疲劳脑损伤大鼠脑组织凋亡信号通路的影响。方法：选择36只SD大鼠为研究对象，将其分为模型组和补阳还五汤组各18只。观察并对比两组大鼠的PI3K/AKT 信号通路、脑组织水含量、脑组织细胞凋亡数量以及脑血屏障（BBB）通透性等。结果：补阳还五汤组大鼠的PI3K/AKT相比模型组显著增高，且脑组织水含量、BBB通透性相比模型组显著降低，P<0.05，存在统计学意义。结论：补阳还五汤对脑损伤具有保护作用，不仅能够降低BBB通透性，还能降低脑组织水含量，激活PI3K/AKT信号通路。

【关键词】补阳还五汤;脑损伤;大鼠脑组织;凋亡信号通路

【中图分类号】R651.1+5 【文献标识码】B 【文章编号】1002-8714（2020）09-0158-01

引 言

补阳还五汤临床治疗中被应用于缺血性、出血性脑病中，能够通过减少脑组组细胞凋零，促进神经细胞修复等，增强防治效果。胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）信号转到通路是脑损伤后出现的细胞凋亡活动中具有影响力的信号通路。根据脑出血相关研究发现，补阳还五汤能够激活数条和细胞凋亡联系紧密的信号转导通路，对其进行用药干预之后，脑组织中的PI3K/AKT信号通路中的PI3K、AKT蛋白表达会发生变化，关系到脑水肿、脑组凋亡信号通路变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择36只SD大鼠为研究对象，分为模型组和补阳还五汤组各18只。所有大鼠平均体质量（250±22）克，均为成年雄性清洁级大鼠。

1.2 方法

对两组大鼠均采用10%的水合氯醛进行麻醉，采用立体仪进行固定，在头部正中行纵形切口，将大鼠骨膜剥离，裸露出冠状缝和前囟。在前囟之前2毫米位置、中线右侧3毫米位置钻直径为1毫米的小孔，采用微量注射器从股动脉处抽取适量血液，采用立体仪按照钻孔垂直进针6毫米，缓缓注入血液80微升，留针10分钟后撤针，用消毒真缝合切口。以此建立模型组，并此基础上，28天对其灌入补阳还五汤，汤剂药方包括赤芍4.5克、生黄芪120克、当归尾6克、桃仁3克、干地龙3克、川芎4.5克、红花3克，药量为26g·kg-1·d-1。

1.3 观察指标

观察并对比两组大鼠的PI3K/AKT 信号通路、脑组织水含量以及脑血屏障（BBB）通透性等。

PI3K、AKT 蛋白检测采用Leica石蜡切片机进行连续冠状切片，厚度为5微米，在4℃冰箱环境下保存，进行凋亡蛋白与基因的免疫组化测试，其中PI3K的稀释度为1：150，AKT的稀释度为1：100。

脑组织含水量（%）=（湿重-干重）/湿重X100%。

脑血屏障（BBB）通透性采用伊文恩蓝（EB）法进行检测。

1.4 统计学方法

利用SPSS 22.0 统计学软件进行方差分析，出现P<0.05，则代表存在统计学意义。

2 结果

补阳还五汤组大鼠的PI3K为（15.88±2.14）μg/ml，AKT为（15.89±2.01）μg/ml相比模型组（8.97±1.21）μg/ml、（8.35±1.74）μg/ml显著增高，P<0.05，有统计学意义。

补阳还五汤组大鼠脑组织含水量（68.25±3.54）%显著低于模型组（78.69±5.47）%，P<0.05，有统计学意义。

一般通过EB含量判断BBB通透性，EB增高，BBB通透性强，反之，BBB通透性差。研究发现补阳还五汤组大鼠的EB含量（14.36±0.78）μg/ml明显低于模型组（25.54±1.02）μg/ml，P<0.05，有统计学意义。

3 讨论

通常脑出血后细胞凋亡密切相关的PI3K/AKT信号通路，在激活过程中被分为四个步骤：第一，某些物质产生或对酪氨酸激酶活性受体产生刺激并激活;第二，激活PI2K;第三，激活丝氨酸或苏氨酸蛋白激酶;第四，磷酸化之后的丝氨酸或苏氨酸蛋白激酶会对下游凋亡蛋白进行调控，进而保护脑组织。

在本研究中，在建立脑出血模型大鼠的基础上，为补阳还五汤组大鼠灌入补阳还五汤后发现，PI3K、AKT的蛋白阳性表达明显增高，而且大鼠脑组织含水量、BBB通透性明显低于模型组。补阳还五汤作為中药汤剂，具有补气、活血、通络等功效，对心脑血管具有明显的药理作用，能够良好的保护脑细胞和脑组织，将PI3K/AKT信号转导通路激活，通过宏观调控，能够减轻大鼠的脑水肿情况，抑制细胞凋亡。随着对细胞凋亡和其机制之间关系的深入研究，能够进一步了解脑出血的情况，进而为脑损伤、脑出血疾病临床治疗提供切入点和治疗思路。由于本研究内容有限，对脑损伤大鼠脑组织凋亡信号通路的研究有限，还未知其他激活通路的信号，还需进一步研究。

参考文献

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