外泌体miRNA在帕金森病诊断中的价值

姚玉芳 张福波 徐鑫

【摘 要】目的：血浆外泌体miRNAs是否可作为帕金森病（PD）的生物标志物，探索其在PD诊断中的潜在价值。方法：将52例帕金森病（PD）患者纳入研究组;48例健康成人作为对照组。采集所有受试者血样，从血样中提取外泌体miRNAs进行比较。结果：研究组外泌体miR-331-5p和miR-505与对照组相比有明显差异，即miR-331-5p显著增高，miR-505显著减低，且差异有统计学差意义。结论：外泌体miR-331-5p和miR-505极可能可以作为帕金森病的生物标志物。

【关键词】外泌体miRNA;帕金森病;生物標志物

【中图分类号】R730. 45            【文献标识码】B 【文章编号】1002-8714（2020）09-0078-01

帕金森病的临床特征是运动迟缓、静止性震颤和肌强直[1]。帕金森病至今仍难以诊断，主要由临床症状主观判断，临床诊断可能晚于疾病发生几年。因此，寻找有潜力的生物学标记对早期PD的诊断价值较为紧迫。外泌体是一种转运蛋白质、脂质、DNA、 mRNA和micro-RNA （miRNA）等物质的离子体，在许多疾病中是被公认为是必不可少的交通工具。miRNA的核苷酸的长度为18-25，通过它们的相互作用进行翻译非编码区目标基因从而调节蛋白质。据很多报道表明，PD患者血浆miRNA表达显著高于或低于健康人[2]。例如，来自PD患者的血浆miR-626和miR-505降低，而miR-331-5p， miR-193a-p， miR-137升高。

方法：研究组52例PD患者，对照组48例健康人均来自沧州市中心医院;PD患者的诊断依据为英国帕金森病学会诊断标准;所有 患者MMSE得分> 24，并且帕金森病药物治疗至少2周。排除标准：（1）缺血性、出血性卒中或严重头部外伤;（2） 认知功能评MMSE得分等于或者小于24分;（3）摄入抗氧化剂或维生素补充剂大于6个月;（4） 有恶性肿瘤、糖尿病、肺部疾病、肝脏或血液系统疾病、或需要透析的慢性肾功能衰竭。所有病人都签署了知情同意书。本研究通过沧州市中心医院伦理委员会的审查。

1.1 标本采集：使用10ml EDTA管采集所有受试者外周静脉血，然后离心收集血浆上清液1.5 ml;在血清中提取外泌体，然后使用外泌体RNA试剂盒提取外分泌体miRNA;同时使用试剂盒提取血浆miRNA。将血浆及外泌体miRNA 进行RT-qPCR（ 使用德国miScript工具包）分析和定量。分析两组血浆及外泌体miRNA的表达，包括 miR-505、miR-331-5p，、miR-454、miR-137等。

1.2 统计学方法：

使用 SPSS 22分析两组血浆及外分泌体不同miRNAs的差异性，如果 p < 0.05. 差异显著，有统计学意义。

结果：研究显示100例受试者：包括52例PD研究组和48例健康对照组的临床特征（年龄、性别、体重指数、MMSE得分等）无显著性差异（P>0.05）。如图两组血浆miRNA的表达两组无显著差异（P>0.05）。然而， 两组外泌体miRNAs有显著差异，研究组中外泌体miR331-5-p明显高于对照组，而miR505在外泌体中几乎不表达，明显低于对照组（P<0.05），差异有统计学意义。

讨论：有研究表明循环外泌体miRNA对于阿尔兹海默病有诊断价值[3]， 目前尚无相关研究报道其在PD中的作用。根据先前的证据，PD患者与健康人我们进行了一次几种外泌体miRNA的分析。我们发现两组miR-331-5p和miR-505均在外分泌体中有显著差异，而在血浆中无明显差异。我们逻辑上猜测miR-331-5p可能通过外泌体转运给PD相关细胞，因此他可能参与PD的病理过程。Khoo等人报道miR-505在PD发生中有一定作用[4]，而我们研究发现PD患者外泌体miR-505是显著降低的。我们推测miR-505可能不是通过外泌体传递给PD相关细胞。

我们结论：本研究证明外泌体miR-331-5p和miR-505可能对于帕金森病（PD）的诊断具有重要的诊断价值。

参考文献

[1] Oertel WH. Recent advances in treating Parkinsons disease. F1000Res.2017; 6： 260.

[2] Viswambharan V， Thanseem I， Vasu MM， Poovathinal SA， Anitha A. miRNAs as biomarkers of neurodegenerative disorders. Biomark Med 2017; 11： 151- 167.

[3] Liu CG， Song J， Zhang YQ， Wang PC. MicroRNA-193b is a regulator of amyloid precursor protein in the blood and cerebrospinal fluid derived exosomal microRNA-193b is a biomarker of Alzheimers disease. Mol Med Rep 2014; 10： 2395- 2400.