李鑫,段丽萍,赵贝,王燕飞,吉雅图,敖登高娃,佗拉,刘俊猛
(内蒙古自治区乌拉特后旗动物疫病预防控制中心,巴彦淖尔 巴音宝力格 015543)
包虫病是由细粒棘球绦虫的幼虫所引起的人与动物共患寄生虫病[1]。细粒棘球绦虫的成虫寄生在犬、狼、狐狸等食肉动物小肠内,人和牛羊等草食动物为中间宿主,通过食入被细粒棘球绦虫孕节或虫卵污染的食品和饲料、草场及水源后而感染,在肝脏、肺脏等器官内发育为包囊,引起严重的、甚至是致死性的疾病。由于棘球蚴的生长力强、体积大,其不仅可压迫周围组织,使之萎缩、功能障碍、生长发育受阻、生产性能下降,而且极易造成继发感染,特别是蚴体包囊发生破裂,引起过敏反应,并可导致死亡,因而给人畜生命安全带来威胁[2]。因此,棘球蚴病是影响社会经济发展的重要公共卫生问题[3-5]。全世界每年大约有200万~300万人患包虫病,至少有 100 个国家存在包虫病疫情。包虫病在我国西藏、四川、青海、新疆、甘肃、内蒙古流行较为严重,2011年包虫病患病人群上升到70万,因家畜死亡和脏器废弃造成的直接经济损失逾10亿元[6]。2013年,该病已引起我国政府的高度重视,并被列为重点防控的人畜共患寄生虫病之一。同时,包虫病也是直接导致我国西部广大农牧民“因病致贫、因病返贫”的主要原因[7]。世界卫生组织(WHO)和我国卫生部、农业部十分关注包虫病的防治,农业部将其列为二类动物疫病,卫生部将其列入丙类传染病。2009年农业部、卫生部将其列入人畜共患病防控名录。2010 年吴德荣等[8]报道了新疆阜康地区棘球蚴感染情况,发现农牧民、学生、家畜和犬的感染率分别为 0.10%、2.80%、15.54%和4.23%,其中未成年学生的感染率与直接接触未驱虫的犬密切相关。乌拉特后旗是内蒙古自治区确定的34个包虫病重点防控旗县之一。在2015年以前,由于多种原因尚未进行包虫病的流行病学调查,也未开展过有组织的防控工作。为了贯彻实施全国包虫病等重点寄生虫病防治规划(2016—2020)和自治区关于《畜间包虫病防治技术方案(试行)》的通知,动物疫病预防控制中心从2015年开始在全旗开展犬、羊、骆驼感染状况的流行病学调查,并且根据包虫病在乌拉特草原感染和传播的特点,系统开展防控研究,旨在有效降低家畜包虫病的感染率,保障人畜安全。
以嘎查(1)“嘎查”是牧区旗县“村”的称呼。(村)为单位,采集新鲜犬粪,统一编号,采集当天在冷藏条件下及时送实验室,置液氮中(-196 ℃)冷冻7 d,取出室温下解冻,然后取其1 g,加样品处理液1 mL, 置室温下30 min,然后3 000 r/min 10 min,取上清4 ℃保存备用。
以嘎查(村)为单位,按比例选择高危羊群(无主犬和狼、狐狸活动频繁区域),从中随机选取羊颈静脉无菌采血,分离血清,4 ℃保存备用。
犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒和羊抗体检测试剂盒,购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。
所用疫苗为羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗,由重庆澳龙生物制品有限公司提供,生产批号:2016008-1,2017007。
乌拉特后旗辖区内共有6个苏木(2)“苏木”是牧区旗县“乡”的称呼。(镇)、50个嘎查(村),其中前达门苏木、获各琦苏木、潮格镇属于纯牧区,巴音镇、呼和镇、乌盖苏木为半农半牧区。动物疫病预防控制中心在2015年共组成6个包虫病普查小分队,分别对6个苏木(镇)、50个嘎查(村)所有牛、羊、骆驼、家(牧)犬的饲养数量、饲养方式等进行入户调查,并登记制作电子档案,同时分别对饲养的牛、羊、骆骆开展抽样检测,并于2016年至2019年继续开展调查检测。
1.5.1 犬粪抗原检测
2015—2019年分别采集50个嘎查(村)犬粪便390、300、450、450、505份进行抗原检测。检测方法采用ELISA法,即用犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒,由北京世纪元亨动物防疫技术有限公司提供,批号:Eg-Ag20181201E。该试剂盒是以双抗体夹心法检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原。试验前将犬粪样放入液氮冻存1周做灭活处理(如1.1所述),在抗细粒棘球绦虫特异性抗体包被的微孔板中加入处理过的样品,通过酶标记、显色反应等过程,最后用酶标仪读取数值,判定结果。
1.5.2 羊抗体检测
2015年,尚未进行包虫病疫苗免疫前,从上述50个嘎查(村)采集羊血510份,分离血清,检测感染抗体;2016—2019年连续4年进行包虫病疫苗免疫,因而,只能检测免疫抗体。检测方法全部采用间接ELISA法。试验选用羊包虫病抗体检测试剂盒,由北京世纪元亨动物防疫技术有限公司提供,批号:Eg-Ab2018016E,用以检测动物血清样本中的包虫抗体。方法是先将样品稀释,与包被板结合,然后加入单克隆抗体酶标记物,进行显色反应,用酶标仪读取数值,判定结果。其反应原理是:将待检羊血清加入包虫抗原包被的微孔板中,若待测样本中没有包虫抗体,抗包虫单克隆抗体酶标记物则直接与微孔板上的包虫抗原结合,加入显色液后在酶作用下产生颜色反应;若样本中存在包虫抗体,则与微孔板上的包虫抗原结合,抑制了抗包虫单克隆抗体酶标记物与包虫抗原的结合,使显色反应受到抑制,最后通过酶标仪测定显色反应的强弱,定性检测待测样品中的抗包虫抗体。
1.5.3 屠宰环节病变脏器检查
对辖区内绿野、游牧、友联、青山4家屠宰企业进行牛羊骆驼棘球蚴感染情况调查,通过肉眼观察和触摸方式,详细检查屠宰动物的肝脏、肺脏表面有无囊状物或硬结,对眼观有泡状物的,用剪刀剖开,察看内部有无囊壁(外囊和内囊)和囊液样结构,一旦发现病变,立即追踪溯源,并对病变脏器进行无害化处理[9]。牛羊骆驼棘蚴感染率(%)= 感染数/检查数×100%。
1.6.1 犬只管理
对全旗有主犬拴养或笼养管理,对流浪犬进行扑杀,并做无害化处理。由旗农牧局、市场监管局及执法局协同完成。
1.6.2 犬驱虫
从2016年开始对所辖区域的有主犬,每月第1周进行集中驱虫,药物选用诱食性吡喹酮。对驱虫后3 d内所产生的粪便无害化处理,犬驱虫全程在旗疫控中心监督并参与下完成。
1.6.3 羊免疫
2016年对呼和镇、获各琦苏木、巴音前达门3个苏木(镇)的所有存栏羊用包虫病基因工程亚单位疫苗进行免疫;2017—2019年连续3年对全旗辖区内所有存栏羊进行疫苗免疫,所用疫苗为羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗,颈中部上三分之一皮下注射1 mL。
1.6.4 消毒灭源
建立月消毒制度,即每月1—7日由村级防疫员监督,农牧民对自家的棚圈、卧盘用2%的可佳(亚氯酸钠)或5%的戊二醛进行消毒。
1.6.5 宣传教育
每年在全旗春秋2次防疫工作部署会议上对所有防疫员、检疫员、养殖犬户等相关人员进行培训,以图文并茂、蒙汉双语宣传材料进行广泛宣传教育。
乌拉特后旗所辖潮格镇、获各琦苏木、巴音前达门苏木3个纯牧区共有牧民1 128户,牛、羊、骆驼全部放牧,牧民一般每户平均放牧羊500只左右,放牧牛20余头,骆驼40余峰,犬1条。半农半牧区的巴音镇、呼和镇、乌盖苏木养殖户共有2 573户,牛羊圈养和放牧相结合,一般每户牧民平均饲养牛5头左右、羊100只左右、犬1~2条。具体见表1。
表1 乌拉特后旗牛羊骆驼及犬存栏数调查
对全旗发现的流浪犬全部进行扑杀,从2015年至2019年共扑杀流浪犬890条;同时对牧区和半农半牧区有主犬全部栓养或笼养。4年间累计无害化处理犬粪便达448吨。
2015年10月至2019年12月,全旗各苏木(镇)和嘎查(村)共发放驱虫药(吡喹酮片)201 972片。其中,2015年辖区内共驱虫犬4 668条,年驱虫3次,累计使用驱虫药(吡喹酮片)15 546片;2016年辖区内共驱虫犬4 954条,年驱虫12次,累计使用驱虫药(吡喹酮片)61 280片;2017年辖区内共驱虫犬5 154条,年驱虫12次,累计使用驱虫药(吡喹酮片)62 284片;2018年辖区内共驱虫犬5 003条,全年驱虫12次,累计使用驱虫药(吡喹酮片)62 024片;2019年辖区内共驱虫犬4 969条,年驱虫12次,累计使用驱虫药(吡喹酮片)62 357片。见表2。
表2 2015—2019年各犬驱虫统计
犬驱虫后粪便检测结果显示其阳性率呈现下降趋势,即平均阳性率由2015年的11.03%下降到2019年的0.79%。其中,巴音镇从7.69%下降到了0;呼和镇从16.92%下降到1.33%;潮格镇从9.23%下降到1.11%,前达门苏木从9.23%下降到1%;获各琦苏木从13.85%下降到1.18%;乌盖苏木从9.234%下降到0,表明驱虫效果显著。详见表3。
表3 2015—2019年犬驱虫后粪抗原检测效果
2015年检测犬粪抗原390份,阳性43份,阳性率11.03%;2016年检测犬粪抗原300份,阳性31份,阳性率10.33%;2017年检测犬粪抗原450份,阳性33份,阳性率7.33%;2018年检测犬粪抗原450份,阳性17份,阳性率3.78%;2019年检测犬粪抗原505份,阳性4份,阳性率0.79%。上述结果表明,阳性率呈下降趋势。
2016年对辖区内部分苏木(镇)实施疫苗免疫,即呼和镇免疫26万只羊,前达门苏木免疫18万只羊,获各琦苏木免疫18万只羊,3个苏木镇共免疫羊62万只;2017年秋季对辖区内所有存栏羊126.1万只全部实施免疫;2018年免疫羊83万只;2019年免疫羊85万只,4年累计免疫羊356.1万只。见表4。
表4 2016—2019年各苏木(镇)羊包虫病免疫情况 万只
2.6.1 采用ELISA法进行检测
试验设阴性和阳性对照各1孔,临界对照3孔,用酶标仪读取450 nm处的吸光(A)值。即阴性对照A值>0.8,阳性对照A值<0.5,试验成立,否则试验失败。结果判定标准:样品A值>临界对照A值的平均值,判为阴性;样品A值≤临界对照A值的平均值,判为阳性。
2.6.2 疫苗免疫后抗体合格率的判定标准
样品A值≤临界对照A值的平均值,判定为免疫合格,即判定标准与阳性判定标准相一致。
2.6.3 疫苗免疫后抗体合格率
由于2015年尚未进行疫苗免疫,从6个苏木(镇)采集羊血510份,常规分离血清,用ELISA检测感染抗体,结果阳性52份,阳性率为10%,由此表明羊自然感染包虫病后血清中可检测出感染抗体;从2016年对辖区内部分苏木(镇)实施疫苗免疫;2017—2019年对辖区内所有存栏羊全部进行疫苗免疫。其中,2016年共检测呼和、获各琦、前达门3个苏木(镇)免疫后羊血清426份,抗体合格率为72.07%;2017年共检测990份,抗体合格率为75.05%;2018年共检测885份,抗体合格率为81.02%,2019年共检测925份,抗体合格率为83.69%。见表5。
由表5可知,除2018年乌盖苏木免疫合格率略有下降外,其他苏木(镇)的免疫合格率均呈上升趋势,即由2016年的72.07%上升到2019年的83.69%。
表5 2016—2019年羊抗体检测情况
常年对羊、牛、骆驼集中到辖区内4个屠宰场进行屠宰,集中屠宰占全旗屠宰动物的90%,牧民自宰食用动物仅占总屠宰量的10%左右,而且自宰动物的病变内脏通过宣传教育后的无害化处理率达到99%以上,杜绝了食用、乱认及饲喂犬的现象。在此期间共检疫牛羊骆驼内脏7 896套,检出病变脏器729套,全部进行实施无害化处理。
2015年检查牛、羊内脏2 621套,检出病变脏器310份;2016年检查牛、羊内脏729套,检出病变脏器68份;2017年检查牛、羊内脏571套,检出病变脏器36份;2018年检查牛、羊内脏541套,检出病变脏器17份;2019年检查牛、羊内脏547份,检出病变脏器12份。见表6。
此外,2015—2019年共检查骆驼肝、肺2 890套,检出病变脏器286份。其中2015年检查541套,检出病变脏器97份;2016年检查633套,出现病变脏器90份;2017年检查512套,检出病变脏器45份;2018年检查597套,检出病变脏器32份;2019年检查577套,检出病变脏器22份。见表6。
表6 牛羊骆驼包虫病感染内脏检查统计
由表6可看出,羊的内脏病变检出率由2015年的11.88%下降到2019年的2.37%;骆驼的内脏病变检出率由2015年的17.93%下降到2019年的3.81%;牛未检出病变内脏。
2015—2019年全旗共发放消毒液亚氯酸钠16 000 L、戊二醛8 000 L,由村级防疫员对可能污染的场地进行消毒,最大限度地杀灭环境中的细粒棘球绦虫虫卵,累计消毒面积334 000 m2;按照消毒标准要求,地面浸湿度必须至少达到3 cm;同时扑杀流浪犬890条,全部做无害化处理。
从2015年开始,全旗共培训80 000人次,发放宣传材料30 000余份,同时还做到了驱虫有详细记录、明白卡进嘎查(村)所有牧民户,免疫有记录,驱虫有影像,形成了各级政府重视、广大牧民积极参与的群防群控的局面。
通过采取犬管理驱虫、羊免疫、屠宰检疫与病变脏器无害化处理、健康教育与宣传培训“四位一体”的综合防控措施,犬、羊、骆驼的感染率从2015年的11.03%、11.88%、17.93%分别下降到2019年的0.79%、2.37%和3.81%。率先达到了国家和自治区确定的2020年犬感染率低于1%、羊感染率低于5%的稳定控制标准。
包虫病是国家17种优先防控的动物疫病之一,也是自治区重点防控的动物疫病[9]。按照国家和自治区对包虫病防控的要求,乌拉特草原通过应用推广“四位一体”的综合防控措施,取得了较好的防治成果,由此表明包虫病是可防可控的。
犬是棘球绦虫的终末宿主,在棘球蚴的传播中发挥了源头性的作用。只有加强对犬的管理,通过“犬犬投药、月月驱虫”和对驱虫后的犬粪进行无害化处理,才能消灭传染源,从源头上控制包虫病的发生和流行[10]。
应用包虫病基因工程亚单位疫苗防控包虫病是目前较为适用的方法,乌拉特草原通过对辖区内的羊连续3年进行疫苗免疫,使包虫病的病变脏器检出率明显下降,由此表明该疫苗具有较好的保护作用[11]。研究制定符合乌拉特草原包虫病防治实际状况的综合防控措施,即犬管理驱虫、羊免疫、屠宰检疫与病变脏器无害化处理、健康教育与宣传培训即“四位一体”综合防控措施,并在生产中应用推广。
通过对牧民包虫病防控知识知晓情况调查表明,在2015年之前,由于广大农牧民对包虫病防控知识了解的较少,防控意识不强,病变脏器随意丢弃、喂犬,造成包虫病不断扩散蔓延[12]。本项研究通过全方位的宣传、教育、培训,使得牧民群众对包虫病的知晓率由2015年的15%提高到2019年的97.5%;同时对自食羊病变内脏的无害化处理意识也相应提高。此外,无论是屠宰企业还是牧民自宰,一旦发现病变脏器要全部销毁。要求屠宰企业要建台账,专人负责;牧民自行屠宰发现病变脏器要上报所在苏木兽医站,并且要派专业人员负责监督销毁,同时要留下影像资料。
通过对屠宰环节的监管,使病变脏器全部得到了无害化处理,彻底切断了本病的传播途径。
用于牛、骆驼的包虫病免疫疫苗目前仍尚未研发上市,只能采取“检测/诊断→淘汰/隔离”的方式来进化牛群和骆驼的包虫病[13]。
乌拉特后旗北部3个纯牧区苏木(镇)与蒙古国接壤,边界线长达195 km,该区域狼、狐狸出没频繁。因此,对野生动物狼、狐狸的活动规律及行动轨迹的调查,有待今后进一步研究。
通过本次试验与研究,我们认为对包虫病的防控,首先要抓住循环链的关键环节,才能开展有效防治。因为细粒棘球绦虫生活史需要经历2个宿主,3个阶段,对中间宿主牛羊棘球蚴病,在未确诊个体患病时开展逐只防治,将有一定的盲目性;其次,对犬实施成虫期前驱虫,将病原控制在终末宿主体内,既可减轻对外界环境的污染,又能降低牛羊的感染,收到事半功倍的效果;另外,包虫病的防控需要广大牧民和政府的共同参与,因此要建立长效防控机制。一是加大包虫病防治的财政专项投入和政策支撑[14];二是普及包虫病知识,开展高危行为干预,监管屠宰流程,采取有效防治措施;三是进行犬登记建档并加强对流浪犬的管理,检查犬包虫病的感染情况,及时销毁病犬,定期驱虫;四是禁止自行屠宰牛羊行为,实行定点屠宰,将检出的病变脏器做无害化处理,严禁犬进入屠宰场;五是实施广泛、深入、系统的健康教育、宣传培训,做到家喻户晓,人人明白,要让广大牧民充分了解哪些是不安全的高危行为并自觉转变,以提高自身的保护意识;六是儿童与学生是包虫病的易感人群,在课堂内要进行包虫病防控的系统教育,规范卫生行为,通过学生带动家庭,实现“小手拉大手”。
目前,乌拉特后旗在防控包虫病中仍然存在一些问题,诸如局部地区仍有感染、各级防控机构的基础条件较差、边界线长、野生动物狼与狐狸活动频繁以及经费不足等,仍需进一步系统研究和解决。其次,在检测手段上应尽快研发PCR检测技术,以弥补ELISA检测技术的不足。