银川市兴庆区汉、回族新生儿常见耳聋基因突变特点研究*

顾洁 王宝珍 赵娟萍 陈璠 王杨 任雪琴

引起耳聋的因素有很多，其中遗传因素是最主要的致聋原因，约占60%，包括常染色体隐/显性遗传、X-连锁显/隐性遗传、线粒体母系遗传[1]。截止目前，已发现超过200个基因与耳聋相关[1，2]。流行病学调查发现GJB2、SLC26A4、mtDNA12SrRNA等基因为中国人群常见致聋基因[2]，但不同地区、不同种族人群携带的热点突变存在差异[3，4]，通过大量开展耳聋基因筛查，分析不同地域、民族耳聋基因突变位点特点，对当地政府制定有效的耳聋预防、干预措施具有指导作用。

宁夏回族自治区地处西北半干旱地区，同时也是我国主要的少数民族(回族)聚集区，为初步了解该地区的常见耳聋基因突变位点分布特征，本研究采用微阵列基因芯片技术，对银川市兴庆区近年来出生的汉、回族新生儿开展4个常见遗传性耳聋基因15个热点突变检测，报告如下。

1 资料与方法

1.1研究对象 选择2018年3月21日至2019年4月29日期间出生于银川市妇幼保健院、银川市第一人民医院、宁夏医科大学总医院、银川市第三人民医院等银川市兴庆区十二家助产机构的5 579例新生儿为研究对象，其中汉族4 712例，回族867例，男2 838例，女2 741例。对家属和产妇进行知情告知，并签署知情同意书。

1.2研究方法

1.2.1血液样本以及新生儿信息采集 新生儿出生48～72小时后，采集足跟血制成含有三个直径大于8 mm血斑的干血片，由采血人员填写新生儿信息，包括母亲姓名、联系方式、新生儿出生日期、性别、民族。

干血片自然晾干后独立密封包装，保存于2～8 ℃冰箱中。如母亲患有肝炎、梅毒、艾滋病者，血斑标本单独晾干、并标记疾病名称、单独塑料袋密封包装。运送至宁夏长生医院(血片集中点)，由专人对血片进行验收，对不合格的样本退回重新采集。验收合格血片当日运送至银川市妇幼保健院遗传学实验室进行检测。

1.2.2遗传性耳聋基因检测方法 打血斑以及核酸提取：用打孔器在滤纸干血斑标本上打取1个直径6 mm的干血斑，采用博奥生物干血斑基因组DNA提取试剂盒(产品编号：DP334)进行核酸提取，具体操作参照《干血斑基因组 DNA 提取标准操作规程》。采用赛默飞公司的Nanodrop对提取的DNA进行浓度测定，被检基因组DNA需满足浓度为5～25 μg/ul，OD260/OD280为1.8～2.0。

耳聋基因检测：本研究采用耳聋基因微阵列芯片法(晶芯十五项遗传性耳聋基因检测剂盒，北京博奥晶典生物技术有限公司)对4个常见耳聋基因15个热点突变位点进行检测，即GJB2基因的c.35 del G、c.176 del 16、c.235 del C和c.299～300 del AT 4个位点，GJB3基因的 c.538 C > T 位点，SLC26A4 基因的 c.2168 A > G、c.1174 A > T、c.1226 G > A、c.1229 C > T、c.1975 G > C 、c.2027 T > A、c.1707+5G>A和c.919-2 A>G，mtDNA12SrRNA基因的m.1494 C > T和m.1555 A > G。采用激光共聚焦技术(晶芯LuxScanTM10K/B微阵列芯片扫描仪，北京博奥晶典生物技术有限公司)和检测芯片判别系统(晶芯十五项遗传性耳聋基因检测芯片判别系统)进行检测结果的扫描判读，具体操作参考《晶芯十五项遗传性耳聋相关基因检测试剂盒(微阵列芯片法)标准操作规程》。

1.3统计学方法 采用SPSS19.0软件进行统计分析，组间比较采用Pearson 卡方检验或Fisher确切概率法检验，检验水准α= 0.05。

2 结果

2.14个耳聋基因15个突变位点总体分布 5 579例新生儿中，255例携带遗传性耳聋基因位点突变，携带率为4.57%(255/5 579)，其中GJB2基因杂合突变115例，突变率为2.06%，GJB3基因突变9例，突变率为0.16%；SLC26A4基因位点杂合突变115例，突变率为2.06%，mtDNA12SrRNA基因1555异质突变12例，突变率为0.22%；双基因杂合突变4例，占0.07%(表1)。

2.24个耳聋基因突变在回、汉民族新生儿中的检出率 5 579例新生儿中，汉族携带4个常见耳聋基因位点突变192例，总检出率4.07%(192/4 712)；回族携带4个常见耳聋基因位点突变63例，总检出率7.27%(63/867)，前者低于后者，差异有统计学意义(χ2= 18.69，P=0.001)(表2)。

表2 回、汉族新生儿4个耳聋基因突变检出率分布

2.3汉、回族新生儿4个耳聋基因突变位点分布 由表3可见，GJB2基因的c.176 del 16，c.235 del C、c.299 del AT突变位点，SLC26A4基因c.2168 A >G、c.919-2 A >G突变位点以及mtDNA12SrRNA基因的m.1555 A >G突变位点在汉族、回族人群中的携带率差异有统计学意义(P<0.05)。

表3 耳聋基因突变位点在回、汉民族中的分布(例，%)

3 讨论

耳聋的原因复杂，其中遗传是最主要的原因[5,6]。不同基因突变导致不同的耳聋临床表型，如：GJB2基因突变通常导致先天性耳聋，SLC26A4基因突变通常导致迟发性耳聋，部分患者表现为先天性聋；不同类型基因突变导致的耳聋有不同的治疗、干预措施[5]。

研究表明我国常见耳聋基因突变总体携带率在2%～6%之间，本研究结果显示银川市兴庆区新生儿常见耳聋基因突变携带率为4.57%，与全国总体水平相符，但略低于陕西的5.17%[6]、高于新疆的3.56%[7]。我国遗传性聋主要是由GJB2、SLC26A4、mtDNA12SrRNA、GJB3四个基因的突变导致，GJB2基因是第一位致聋基因，SLC26A4基因是我国第二位致聋基因[6]。本研究中5 579例新生儿中，GJB2、SLC26A4基因突变携带率分别为2.06%、2.06%，SLC26A4基因突变总体携带率高于全国水平(0.55%～2.04%)[8]。SLC26A4基因突变与大前庭水管综合征有关，患者可能因感冒、头外伤等导致颅内压力增高后致听力损失[9，10], 因此，携带SLC26A4基因突变的新生儿要注意日常防护，避免 “一巴掌”致聋。mtDNA12SrRNA基因突变属于母系遗传，常见的两种突变类型是m.1555A>G和m.1494C>T，且存在同质性和异质性突变，其母系子代均为该基因突变的携带者，携带者出生时通常听力表现正常，在使用氨基糖苷类药物后导致不可逆转的听力损失[11]。mtDNA12SrRNA基因携带率通常在0～0.29%[6]，本研究，发现12例新生儿携带m.1555A>G位点突变，携带率0.22%，与上述文献报道一致。

宁夏回族自治区深处内陆，位于中国西北部的黄河中上游地区，是我国回族长居人口最多的地区。研究表明耳聋基因的分布存在一定的地域性和民族差异性，在不同的地域和民族聚居人群中，耳聋基因的突变谱存在很大的不同[3]。本研究结果显示，在银川市汉、回族新生儿中均能检测到GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA12SrRNA基因突变，且在回族中总体检出率显著高于汉族。而宁夏以及新疆分别对2 702、3 122例新生儿进行四个常见耳聋基因9个突变位点筛查，发现回族新生儿耳聋基因携带率低于汉族新生儿[12，13]，与本研究结果不一致，可能与筛查人数以及筛查位点不同有关。其次，宁夏是古丝绸之路的重要通道，不同人种迁徙以及婚配造成了较广泛的基因交流，且宁夏封闭的地理环境和两个民族小聚居的特点也可能是其耳聋基因突变谱不同的原因之一。

从本研究结果看，汉、回族新生儿中GJB2与SLC26A4基因突变携带率最高，其次是GJB3和线粒体DNA12SrRNA基因，与文献报道一致[6]； 但在回族新生儿中，SLC26A4基因突变携带率(3.70%)略高于GJB2基因(3.23%)，且mtDNA12SrRNA基因突变携带率显著低于汉族，与文献报道不一致[12]；Du等[14]发现在西北五省的回族耳聋人群中，SLC26A4基因突变携带率高于GJB2基因, 可能与回族人群人种来源以及婚配方式有关，具体原因需要进一步分析。

文中结果显示，GJB2基因在回族和汉族新生儿中均以c.235delC突变为主，其次是c.176del16与c.299_300delAT突变位点，与文献报道一致[14～16]； c.176del16是犹太人最常见的突变形式[17]；而c.299_300delAT是东亚地区耳聋人群较常见的突变[7]。本研究显示GJB2基因的常见突变位点c.176del16和c.299_300delAT在回族新生儿中的携带率显著高于汉族，可能是因为犹太人与阿拉伯人同源，我国宁夏地区回民是由阿拉伯国家迁移而来，由此导致突变位点c.176del16和c.299_300delAT 在回族人群中高发[18]。本研究中，SLC26A4基因在回族和汉族新生儿中均以c.919-2 A >G突变位点为主，与文献报道一致[19]。本研究876例回族新生儿中未发现SLC26A4基因c.2168A>G位点突变，c.2168A>G位点突变是韩国人和日本人中最主要的突变形式，中国、韩国、日本同属蒙古人种[20]，因此c.2168A>G突变位点常见。研究报道mtDNA12SrRNA基因中m.1555 A >G突变的携带率可能因种族不同而呈现差异，也与地域和环境相关[14]。本研究中，汉族新生儿mtDNA12SrRNAm.1555 A >G位点突变携带率显著高于回族，与文献报道不一致[17]，因此，宁夏银川地区，汉族与回族常见耳聋基因突变特点存在明显差异，其原因可能与筛查样本数量以及筛查位点覆盖面有关，也可能与回族人群的人种来源、人口迁徙、婚配、饮食文化、气候等因素有关，需要进一步研究分析。

综上所述，银川市兴庆区回族新生儿中四个常见耳聋基因突变率高于汉族，GJB2和SLC26A4是银川地区新生儿突变率最高的耳聋基因，且SLC26A4基因突变携带率高于全国水平，汉、回族新生儿中分别以GJB2基因c.235delC以及SLC26A4基因c.919-2A>G突变为主，且回族新生儿的携带率明显高于汉族，四个常见耳聋基因其他突变位点也呈现出一定的地域与民族特点。