两种方法在胸腔积液、腹水、脑脊液细胞计数中的比较分析

呼延武，胡小芳，李 莲，田彩霞，王美钧

1.湖北省十堰市人民医院/湖北医药学院附属人民医院检验科，湖北十堰 442000；2.国药东风总医院/湖北医药学院附属国药东风总医院心内科，湖北十堰 442000

体液和血液是临床诊断疾病极为重要的标本。胸腔积液、腹水检验在漏出液和渗出液，癌性和非癌性积液，病毒感染、化脓性感染和结核性积液的鉴别诊断及寻找致病原等方面具有重要意义。而脑脊液检验为中枢神经系统疾病的诊断和治疗提供了依据[1]。体液细胞计数是临床诊断疾病的重要参考指标，同时细胞计数的变化也是疾病疗效观察的指标。细胞计数的“金标准”是改良Neubauer计数板计数法，这种方法操作烦琐，重复性差，受到的影响因素较多。随着现代科技的发展，高端血液分析仪如Sysmex XN-9000被应用于细胞计数检测。这类仪器提高了体液检验的检测效率，而且仪器计数比人工计数重复性和准确性更好，可以减少人为因素的影响[2]。本研究收集来自十堰市人民医院的306份体液标本，用Sysmex XN-9000全自动血液分析仪体液模式(仪器法)和改良Neubauer计数板人工显微镜计数(显微镜计数法)对胸腔积液、腹水、脑脊液细胞计数中的有核细胞数和红细胞数进行检测，并进行统计学分析，探讨仪器法在胸腔积液、腹水、脑脊液细胞计数检测中的应用。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集体液标本306份，其中胸腔积液标本92份，腹水标本118份，脑脊液标本96份，均来自2019年2-6月湖北省十堰市人民医院住院患者。分别将胸腔积液、腹水和脑脊液按有核细胞计数结果分为4档：(0～100)×106/L、(>100～500)×106/L、(>500～1 000)×106/L和>1 000×106/L；按红细胞计数结果分为3档：(0～1 000)×106/L、(>1 000～10 000)×106/L和>10 000×106/L。

1.2仪器与试剂 日本Sysmex XN-9000全自动血液分析仪及与其配套的试剂、校准品和质控品。Olympus双目镜显微镜购自日本Olympus公司。改良Neubauer计数板购自深圳市海滨仪器有限公司。

1.3方法 标本均使用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管采集，并在标本采集后4 h内采用仪器法和显微镜计数法完成检验。仪器法：分析前对仪器进行校准，然后做室内质量控制，质控在控情况下检测标本，新鲜体液标本按照《Sysmex XN-9000全自动血液分析仪中文操作手册》的方法进行操作。标本必须2 h内检测完成，每份标本检测2次，取平均值作为最终结果进行分析。显微镜计数法：由2名中级以上职称的检验师使用改良Neubauer计数板在显微镜下进行红细胞和有核细胞计数。以2名检验师镜检结果的均值作为最终结果，细胞计数标准参照《全国临床检验操作规程(第4版)》。

2 结 果

2.1仪器法和显微镜计数法有核细胞检测结果比较 胸腔积液、腹水、脑脊液有核细胞水平在(>500～1 000)×106/L时，仪器法和显微镜计数法结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)；而有核细胞水平在(0～100)×106/L、(>100～500)×106/L和>1 000×106/L时差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 仪器法和显微镜计数法有核细胞检测结果比较(×106/L)

2.2仪器法和显微镜计数法红细胞检测结果比较 胸腔积液、腹水和脑脊液红细胞计数在>10 000×106/L时，仪器法和显微镜计数法结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)；而红细胞计数在(0～1 000)×106/L和(>1 000～10 000)×106时，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 仪器法和显微镜计数法红细胞检测结果比较[M(P25,P75)，×106/L]

3 讨 论

显微镜手工计数是胸腔积液、腹水、脑脊液细胞计数的传统方法，在不同检测人员之间，其操作影响因素较多，重复性差，误差较大，很难做到标准化。目前，显微镜手工计数及分类仍然是体液常规检验的“金标准”，但全自动血液分析仪的体液模式检测可提高检测结果的准确性和缩短标本检测周转时间[3]，因此，随着临床实验室质量要求的不断提高，实现体液标本检测的自动化也受到越来越多的关注[4]。Sysmex XN-9000应用核酸荧光染色技术和鞘流电子阻抗原理，采用独立的体液模式对体液细胞进行分析，因此具有计数、分类及肿瘤细胞的定量提示筛查功能[5]。

本试验结果显示，两种方法的检测结果比较有一定的差异，当有核细胞和红细胞计数低的时候，仪器法和显微镜计数法有明显差别，尤其是当红细胞计数<1 000×106/L时，仪器法检测结果极不准确，很多时候会将其计数成0，但通过显微镜计数法发现还是存在少量红细胞。有时仪器法检测结果显示红细胞计数为1 000×106/L，但显微镜计数法结果显示，红细胞计数小于1 000×106/L，有些甚至只有一两百。可能是因为红细胞的单位数量级太大而导致偏差太大。

仪器对红细胞的最低检测限为1 000×106/L，在实际工作中发现当标本中红细胞计数≥1 000×106/L时，仪器法在红细胞计数检测中才比较准确[6]。对于比较清亮透明的体液，仪器法检测有核细胞的结果相对可靠，但红细胞计数还是显微镜计数法结果更可靠。对于血性体液标本，仪器法检测结果与显微镜计数法检测结果无明显差别，但是仪器法计数更快，重复性更好，可以在一定程度上减少检测人员之间操作带来的误差。对于一些炎症性标本，尤其是有核细胞计数很高的体液标本，仪器法计数会更加准确。而且随着仪器不断更新，有核细胞的分类也更加准确，检验人员可以通过仪器的分类功能看到有核细胞的分类图，从而报告给临床。但是并不是所有的分类结果都可以直接发出报告，仪器散点图提示可能有肿瘤细胞时应采用显微镜手工镜检的方式对细胞的分类进行复核，因为仪器只会区分出正常的中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞，对于间皮细胞、溶解细胞及肿瘤细胞是分不清楚的。此外，胸腔积液、腹水和脑脊液标本中可能含有结晶、上皮细胞，甚至蛋白黏液丝和异常细胞等，这些都会干扰血球仪的计数[7]，并且容易引起半堵孔或完全堵孔，影响仪器的分析性能。因此，检验人员应对这部分标本进行过滤处理，并且在检测完后及时清洗仪器。

Sysmex XN-9000全自动血液分析仪作为一种新型体液检测仪器，在胸腔积液、腹水和脑脊液细胞计数方面比全自动尿液分析仪更加准确，而且它比尿液分析仪多了分类功能，其结果可信度高，又具有简便、快速的优点，可以作为胸腔积液、腹水和脑脊液等体液标本细胞计数的筛查手段，可减轻检验人员的工作压力，但对于异常的结果和分类图形等，还需采用仪器结合人工镜检的方法对标本进行全面评价和结果修正。这与其他研究者报道的在其他型号全血全自动分析仪器检测体液标本的结论基本一致[8-9]。因此笔者建议仪器法与显微镜计数法联合应用，提高检测结果的准确性，为临床提供客观、可靠和快速的实验诊断依据。