3种方法筛查M蛋白的结果分析*

潘建华,张 玲△,李艳红,曾子良

1.广州金域医学检验中心血液室,广东广州 510330;2.广州医科大学金域检验学院,广东广州 510330

多发性骨髓瘤(MM)是恶性浆细胞病中最常见的一种类型，占恶性血液系统肿瘤的10%[1]，增生的浆细胞产生单克隆免疫球蛋白，即M蛋白。M蛋白是诊断浆细胞增殖疾病中的血清肿瘤标志物。一般情况下，M蛋白的检测主要靠血清蛋白电泳(SPE)法或者毛细管区带电泳(CE)法筛查，该方法可以将M蛋白从多克隆的免疫球蛋白背景中区分出来。通过琼脂糖免疫固定或毛细管免疫分型方法可以验证并得知M蛋白的轻链、重链类型。血清游离轻链(sFLC)法则可以补充电泳技术对不分泌性多发性骨髓瘤(NSMM)的漏检[2]。3种方法联合检测可为临床诊断治疗和疗效评估提供指导依据[3]。本研究通过对10 287份标本结果进行回顾性分析，旨在了解广东地区MM的发病情况。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析广东地区2016年1月至2019年12月送往广州金域医学检验中心筛查MM的10 287份标本，其中男5 567例，女4 720例，年龄28～90岁，平均68.9岁。所有标本均采用SPE法、血清免疫固定电泳(IFE)法及sFLC法进行检测分析。

1.2仪器与试剂 SPE、IFE和单克隆免疫球蛋白抗血清[IgG、IgA、IgM、Kappa轻链(轻链-κ)、Lambda轻链(轻链-λ)]采用美国Helena Laboratories全自动快速电泳系统(spife-3000)及配套试剂盒。SPE批号11598975；IFE批号82-19-552559；抗血清批号8-19-551822。sFLC采用美国贝克曼库尔特公司Immage 800全自动特定蛋白分析仪检测系统，试剂采用英国Binding Site公司FreelinteTMsFLC检测试剂盒(κFLC 批号453705-C1，λFLC 批号424542-C1)；FreelinteTMsFLC配套校准品(κFLC批号469277，λFLC 批号465406)；FreelinteTMsFLC配套质控品(κFLC Control 批号453712，κFLC High Control批号453713，λFLC High Control 批号465408，λFLC Control 批号465409)。

1.3方法

1.3.1标本采集 空腹采集静脉血3 mL，避免溶血和脂血,尽快离心并至少分离0.5 mL血清。清晨空腹采集静脉血并分离血清，置于-20 ℃冰箱保存。

SPE法采用新鲜血清(样品可以在2～8 ℃冷藏48 h，或在-20 ℃保存2周)。血清标本不需要稀释，取40 μL未稀释标本加到仪器样品盘中的正确位置，在SPIFE3000电泳仪上按预先设置好的程序电泳条件下进行加样、电泳和烘干凝胶片，取出胶片放进染色槽全自动染色烘干，最后进行成像扫描，血清蛋白水平和组分比例更表现出明显的变化。

1.3.2SPE法 新鲜血清经琼脂糖凝胶电泳可将血清蛋白分为5个条带，从正极到负极依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白区带，同时对条带进行定性(M蛋白)和定量分析(测得条带浓度百分比，根据总蛋白含量×M蛋白条带百分比得到M蛋白水平)。

1.3.3IFE法 电泳时蛋白先分离出来，可溶解抗原与抗体发生反应，可变为不溶解的沉淀，未反应的蛋白在清洗中清除，抗原抗体反应物染色后，可以看到密集沉淀条带。将蛋白条带与免疫固定后的沉淀条带进行比较，得到M蛋白的鉴定与分型。

1.3.3sFLC法 利用散射免疫比浊法通过抗体与游离轻链上暴露的抗原决定簇发生特异性抗原抗体反应进行定量检测。

1.4统计学处理 数据采用SPSS19.0软件进行描述统计分析，计数资料以频数或百分率表示。

2 结 果

2.1MM阳性各分型分布情况 10 287份标本中共检出1 996份M蛋白的标本，检出阳性率为19.4%,其中IgG型1 056份，占总检数的10.3%,IgA型500份，占4.9%,IgM型96份，占0.9%,IgD型101份，占1.0%,轻链型242份，占2.4%。1 996份阳性标本中，IgG型占所有阳性标本的52.9%，其中以IgG-κ型所占比例最高，有651份，占IgG型的61.6%；IgA型占阳性标本的25.1%，以IgA-λ型所占比例最高，有273份，占IgA型的54.6%；IgM型占阳性标本中的4.8%，IgM-κ型所占比例最高，有74份，占IgM型的77.1%；IgD型占阳性标本中的5.1%，IgD-λ型所占比例最高，有97份，占IgD型的96.0%；IgE型仅有1份，故不计入统计；轻链型占阳性标本中的12.1%，轻链-λ所占比例最高，有182份，占轻链型的75.2%。

2.2MM阳性年龄分布情况 将1 996份阳性标本分为<45岁，45～<60岁，60～<75岁，75～<90岁，≥90岁5个年龄段，89份标本来自<45岁人群，579份标本来自45～<60岁人群，982份标本来自60～<75岁人群，331份标本来自75～<90岁人群，14份标本来自≥90岁人群。60～<75岁人群在IgG、IgA、IgM、轻链型中均占比最高，IgD型中45～<60岁人群占比最高，其次是60～<75岁人群。见表1。

表1 年龄分布情况

2.3MM阳性性别分布情况 MM阳性中，男性阳性数(1 138例)是女性阳性数(858例)的1.33倍。所有分型中，男性占比均高于女性，在IgG、IgA、IgM、IgD型中男性占比分别为54.3%、58.2%、77.1%、60.4%、57.0%，女性占比分别为45.7%、41.8%、22.9%、39.6%、43.0%。IgE型仅有1份，故不计入统计。

3 讨 论

本研究中，M蛋白类型构成比从高到低依次为IgG>IgA>轻链>IgD>IgM>IgE，轻链-κ>轻链-λ；MM在60～<75岁人群中发病率最高，其次是45～<60岁人群；男性发病率高于女性。值得注意的是，本研究中轻链型所占比例较高,且IgD型高于国外报道的2%[4]，提示广东地区M蛋白轻链型和IgD型较西方国家人群高。有研究报道，M蛋白轻链分布中轻链-κ型较轻链-λ型明显更多，但是本研究中轻链-λ型明显多于轻链-κ型[4]，分析原因可能与IgD-λ型M蛋白较多和游离轻链型M蛋白有关。

MM是一种老年病，其中位诊断年龄为69岁，低于40岁的患者较为少见[5]。本研究中，患者发病年龄集中于45～<75岁，75～<90岁次之，40岁以下和≥90岁者少见。广东地区MM阳性检出年龄段分布略高于周爱花等[6]报道的发病年龄，是否由于标本来源及区域性差异有待增加样本量做进一步统计分析。

MM发病率男性略多于女性，且受种族和遗传因素的影响，其发病也受环境因素影响，如暴露于农业及石化工业的化学品[7]，本研究结果显示，广东地区MM男性发病率为女性的1.33倍，男女发病率比例与周爱花等[6]和刘玉梅等[8]报道的相当，表明广东地区男女发病比例与西北兰州地区相似。但是，广东地区MM各分型男女阳性率明显高于周爱花等[6]报道的数据，造成差异的原因可能与临床检测技术及方法的联合应用有很大关系，是否由于地域或经济条件及环境因素有待进一步研究。本研究中，IgD和IgM型MM阳性率男性明显高于女性，其他文献对这两种类型少有统计，尤其是IgM型MM，阳性率为4.8%，提示此型较少见。IgM分型除具有MM的一般临床表现外，因其相对分子质量较大，易形成五聚体而使血液黏滞性增高，易发生高黏滞性综合征，其预后极差。因此，通过联合检测，提高MM检出率，降低MM的漏诊、误诊率，及早发现、及早预防，对MM的预后治疗具有重要意义。