哮喘患者病程严重程度与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、血浆硫化氢的相关性分析

黄茂 蔡莎莎 李小波 张添威

[摘要] 目的 探討哮喘患者病程严重程度与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、血浆硫化氢（H2S）的相关性。 方法 选取我院2017年4月～2019年3月收治的急性发作期哮喘患者70例作为研究组，根据疾病诊断指南进行分度，轻度、中度和重度患者分别18、23、29例，选取同期进行体检的健康人70例作为对照组，所有受试对象均进行诱导痰计数，计算嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比，并抽取血液测定血浆H2S水平，比较对照组和研究组以及研究组不同严重程度患者的诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平，对三个指标进行相关性分析。 结果 研究组患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比显著高于对照组，血浆H2S水平显著低于对照组;随着疾病程度加重，哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比逐渐升高，而血浆H2S水平逐渐降低;哮喘患者血浆H2S与诱导痰嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比之间呈负相关;血浆H2S水平和疾病严重程度呈负相关，诱导痰嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比和疾病严重程度呈正相关。以上差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比升高，血浆H2S水平降低，随着病程的逐渐加重，哮喘患者嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比会逐渐升高，血浆H2S水平将逐渐降低。

[关键词] 哮喘;嗜酸性粒细胞;中性粒细胞;血浆硫化氢

[中图分类号] R562          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）19-0010-04

Analysis on the correlation between severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide in the patients with asthma

HUANG Mao1   CAI Shasha2   LI Xiaobo1   ZHANG Tianwei1

1.Department of Respiratory and Critical Care Medicine， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China; 2.Department of Clinical Laboratory， Taizhou First People's Hospital in Zhejiang Province， Taizhou 318020， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between the severity of asthma disease course and eosinophils， neutrophils and plasma hydrogen sulfide（H2S） in the patients with asthma. Methods 70 patients with acute attack of asthma who were admitted to our hospital from April 2017 to March 2019 were selected as study group. According to the disease diagnosis guide， the patients were divided into mild， moderate， and severe conditions， with 18， 23， and 29 patients， respectively. 70 healthy people who were selected for physical examination at the same time were selected as the control group. All subjects were given induced sputum counts to calculate the ratios of eosinophils and neutrophils， and the blood was collected to measure plasma H2S levels. The ratios of induced sputum eosinophils and neutrophils and plasma H2S levels were compared between the control group and between patients with different disease severity in the study group. Correlation analysis was performed on the three indices. Results The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the study group was significantly higher than that in the control group， and the plasma H2S level was significantly lower than that in the control group; as the degree of disease worsened， the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma was gradually increased， while the level of plasma H2S was gradually decreased;there was a negative correlation between plasma H2S level and the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma; there was a negative correlation between plasma H2S level and disease severity. There was a positive correlation between the ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum and disease severity（P<0.05 for all）. Conclusion The ratio of eosinophils and neutrophils induced by sputum in the patients with asthma is increased， and plasma H2S level is decreased. As the course of disease worsens， the ratio of eosinophils and neutrophils in the patients with asthma will gradually increase， and plasma H2S level will gradually decrease.

[Key words] Asthma; Eosinophils; Neutrophils; Plasma H2S

支气管哮喘，即哮喘，是临床中常见的慢性气道炎症疾病，有多种细胞参与，包括嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、肥大细胞等，其中，嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的增加会导致患者气道微血管通透性增加，进一步刺激上皮细胞释放炎性因子，加重炎症反应，同时会使得炎性细胞的募集进一步增加[1-3]。硫化氢（H2S）是体内含硫氨基酸代谢产生的气体产物，近年来发现，其作为气体信号分子，具有明显的抑制炎症作用，同时研究发现，通过外源性的H2S刺激能够减轻哮喘患者的炎症反应[4-5]。目前，关于血浆H2S和哮喘患者的各项炎症指标的研究较多，但并未有明确研究对哮喘患者病程严重程度与炎性细胞、H2S之间的相关性进行探究，本研究旨在通过分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三项指标，对哮喘患者病程严重程度与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、H2S之间的相关性进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年4月～2019年3月收治的急性发作期哮喘患者70例作为研究组，根据《支气管哮喘防治指南（2016年版）》[6]中的分度标准，将研究组患者按照急性发作期病情不同程度分为轻度、中度和重度，分别18、23、29例。纳入标准：（1）患者符合《支气管哮喘防治指南（2016年版）》关于急性发作期的诊断标准，且根据患者气短情况、精神状态、呼吸频率等症状体征，将患者进行分度;（2）临床资料完整的患者;（3）签署研究知情同意书的患者。排除标准：（1）心、肾、肝、血液等系统存在严重疾病的患者;（2）合并存在呼吸道感染或其他免疫系统疾病的患者;（3）随访困难或失访的患者。同时，选取于我院进行体检的健康人70例作为对照组，签署研究知情同意书。对照组和研究组以及研究组不同分度患者之间的一般临床资料比较，差异无统计学意义，具有可比性。见表1、2。

1.2 方法

1.2.1 诱导痰细胞计数  以0.9%氯化钠7 mL+10%氯化钠3 mL配置高渗盐水，使受试对象雾化吸入，咳出诱导痰，每组标本均涂片8张，自然干燥后使用甲醇固定，每张涂片经1 mL Giemsa稀释染液染色，后冲洗，自然干燥后在高倍镜下进行计数，每张涂片至少计数4个视野中400个有核细胞，并计算其中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比。

1.2.2 血浆H2S水平检测  在入组后抽取受试对象晨起空腹静脉血4.0 mL，使用肝素抗凝，以4000 r/min离心10 min，存于-20℃冰箱保存，后进行统一的检测。采用不同浓度的硫氢化钠绘制标准曲线，将反应液SAPBⅡ与标准血液样本以1：1的比例充分混匀，使用紫外可见分光光度法测定血浆H2S水平。

1.3 观察指标

（1）比较研究组和对照组之间诱导痰中嗜酸性粒細胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平。（2）比较研究组中不同程度急性发作期患者之间诱导痰中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平。（3）血浆H2S与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比之间的相关性分析，使用Pearson积矩相关分析。（4）对影响患者疾病严重程度的因素进行相关性分析，使用Pearson积矩相关分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS25.0软件对数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，两组计量资料比较采用独立样本t检验，多组计量资料比较采用单因素方差分析。使用Pearson积矩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组和对照组之间诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平比较

研究组患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比显著高于对照组，血浆H2S水平显著低于对照组（P<0.05）。见表3。

2.2 研究组中不同程度急性发作期患者之间诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平比较

随着疾病程度加重，哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比逐渐升高，而血浆H2S水平逐渐降低（P<0.05）。见表4。

2.3 影响患者疾病严重程度因素的相关性分析

血浆H2S水平和疾病严重程度呈负相关，诱导痰嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比和疾病严重程度呈正相关（P<0.01）。见表5。

2.4 血浆H2S与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比之间的相关性分析

哮喘患者血浆H2S与诱导痰嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比之间呈负相关（P<0.05）。见表6。

3 讨论

哮喘是一种多种细胞组分参与的气道慢性疾病，其发病机制尚不清楚，临床中多通过肺功能检查等常规手段监测疾病进展情况，但此类指标对气道炎性反应水平反映较差，无法及时对病情作出评估[7-8]。H2S是一类内源性的气体信号分子，在肺组织内表达较多，能够舒张气管和血管平滑肌，参与多种病理生理表现[9-10]。目前，关于血浆H2S和哮喘患者的各项炎症指标相关性的研究较多，但并未有明确研究对哮喘患者病程严重程度与炎性细胞、H2S之间的相关性进行探究，本研究旨在通过分析不同病程的哮喘患者以及正常人的三项指标，对哮喘患者病程严重程度与嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、H2S之间的相关性进行分析。

研究结果显示，研究组患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比显著高于对照组，血浆H2S水平显著低于对照组（P<0.05），且随着疾病程度加重，哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比逐渐升高，而血浆H2S水平逐渐降低（P<0.05）。诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比及血浆H2S水平的变化趋势和既往研究一致[11-12]。研究指出，H2S在炎症反应中的作用是较为复杂的，作为炎症抑制因子，H2S能够抑制中性白细胞的聚集，减轻由于炎症介质导致的肺水肿和肺毛细血管通透性增高，具有明显的抑制炎症反应的作用，同时通过较少丙二醛的生成，H2S具有一定的抗氧化作用，减轻机体氧化应激反应的发生[13-14]。本次研究中对H2S水平和诱导痰嗜酸性粒细胞和中性粒细胞占比进行了相关性分析，结果显示，哮喘患者血浆H2S与诱导痰嗜酸性粒细胞、中性粒细胞占比之间呈负相关（r=-0.614、-0.873，P<0.05），与既往的研究结果一致[15-18]，同时也说明H2S在哮喘的发生发展中存在明显的抗炎作用。同时结果显示，血浆H2S水平和疾病严重程度呈负相关，诱导痰嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比和疾病严重程度呈正相关（P<0.05）。随着哮喘的逐渐加重，中性粒细胞的募集明显增加，这可能是由于H2S水平降低等多种因素导致的，进而使得各类促炎因子分泌不断增加，加重气道的炎症反应，同时哮喘发作加重时，气道内的胱硫醚-γ-裂解酶活性会明显下降，进而导致H2S水平降低，发生上述反应[19-20]。因此，哮喘患者病程严重程度不仅受到H2S水平的影响，同时随着病程的加重，H2S水平也会随之发生改变，而嗜酸性粒细胞和中性粒细胞作为哮喘发作的标志性炎性细胞，会随着病情的加重，占比逐渐升高，这可能和气道重塑以及高反应性相关，同时H2S也对细胞活性有着重要的影响。

综上所述，和正常人相比，哮喘患者诱导痰嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比升高，血浆H2S水平将降低，同时随着疾病病程的逐渐加重，哮喘患者的嗜酸性粒细胞占比、中性粒细胞占比会逐渐升高，血浆H2S水平将逐渐降低，且三个指标间存在相关性。

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（收稿日期：2020-05-27）