胆道闭锁患儿血清MMP-7和uPAR水平与肝纤维化和预后的关系研究*

宫颖新,王 萍,白玉坤,张桂枝,焦晗亮,刘伟栋,李 杨,祁艳卫

(河北省儿童医院普外二科，河北石家庄 050031)

胆道闭锁(BA)是发生于婴幼儿时期的肝内外胆道闭锁，患儿表现为肝功能损害、肝内外胆管纤维化闭塞，最终会发展为肝硬化及肝衰竭[1-3]。肝门空肠吻合术(Kasai术)是治疗BA的首选方式，能够解除胆道梗阻，但却无法逆转肝纤维化进程，患儿仍旧会发展为肝硬化及肝衰竭，甚至死亡[4-5]。目前，BA的发病机制仍未阐明，根据鉴于肝纤维化过程中细胞外基质水解及沉积异常的特征，近年来越来越多的学者开始关注多种调节细胞外基质的分子在BA发病中的作用。

基质金属蛋白酶-7(MMP-7)及尿激酶纤溶酶原激活物受体(uPAR)是两种参与细胞外基质水解及沉积调节的分子，在肝硬化的过程中起关键作用，也有研究报道显示BA的肝脏细胞中MMP-7及uPAR的表达增多[6-7]，但血清MMP-7及uPAR变化与BA病情及预后的关系尚未明确。为此，本研究以BA患儿为对象，具体分析了血清MMP-7和uPAR水平与肝纤维化和预后的关系，旨在阐明MMP-7、uPAR在BA发生及病情发展中所起的作用，进而为将来探究BA的发病机制提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2016月3月至2019年3月在本院接受Kasai手术治疗的70例BA患儿作为BA组，纳入标准：(1)经临床及病理切片诊断为BA；(2)临床资料及样本完整；(3)随访资料完整；(4)获得患儿家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：(1)合并其他肝胆实质性疾病；(2)合并其他先天性疾病；(3)术后2个月内接受肝移植。另选取同期在本院体检的50例健康儿童作为对照组。两组性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TB)水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

1.2方法

1.2.1血清MMP-7和uPAR水平检测 对照组儿童体检时采集空腹肘静脉血1～2 mL，BA组患儿手术前及手术后2个月时采集空腹肘静脉血1～2 mL，静置30 min后3 000 r/min离心10 min，分离血清后采用酶联免疫吸附试剂盒(上海西唐公司)检测MMP-7和uPAR水平，操作均按试剂盒说明书进行。

表1 两组一般资料比较

1.2.2肝纤维化程度评价 手术中收集BA组患儿的肝脏组织标本，4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、组织切片后进行苏木精-伊红(HE)染色，由病理科医生进行读片并参照Ishak分级标准判断肝纤维化程度。部分汇管区纤维化和形成短的纤维间隔为Ⅰ级；汇管区纤维化、纤维间隔形成为Ⅱ级；大量汇管区纤维化、出现汇管与汇管之间的桥接纤维化为Ⅲ级；大量汇管区纤维化、明显的汇管与汇管之间桥接纤维化为Ⅳ级；明显的汇管与汇管之间桥接纤维化、汇管与中央桥接纤维化为Ⅴ级；出现假小叶为Ⅵ级。Ⅰ～Ⅳ级为轻度纤维化、Ⅴ～Ⅵ级为重度纤维化，结果轻度纤维化组42例和重度肝纤维化组28例。

1.2.3预后情况评价 BA组患儿手术后2个月时进行复查，通过BA判断预后情况，BA≥34.2 μmol/L判断为黄疸，<34.2 μmol/L判断为非黄疸。结果非黄疸组40例和黄疸组30例。

2 结 果

2.1两组血清MMP-7、uPAR水平比较 BA组患儿手术前血清MMP-7、uPAR水平高于对照组(t=23.846、P<0.05；t=41.144、P<0.05)，BA组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平仍高于对照组(t=23.446、P<0.05；t=37.433、P<0.05)；与手术前比较，手术后2个月时BA组患儿血清MMP-7、uPAR水平均明显升高(t=4.336、P<0.05；t=4.921、P<0.05)。见表2。

表2 BA组与对照组血清MMP-7、uPAR水平比较

2.2轻度肝纤维化组与重度肝纤维化组患儿MMP-7、uPAR水平比较 手术前重度肝纤维化组患儿血清MMP-7、uPAR水平明显高于轻度肝纤维化患儿(t=6.639、P<0.05；t=11.221、P<0.05)，手术后2个月重度肝纤维化组患儿血清MMP-7、uPAR水平仍明显高于轻度肝纤维化组患儿(t=10.657、P<0.05，t=13.815、P<0.05)；轻度肝纤维化组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平与手术前比较，差异无统计学意义(t=1.048、P=0.298；t=1.775、P=0.080)，重度肝纤维化组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平与手术前比较明显升高(t=4.979、P<0.05；t=5.626、P<0.05)。见表3。

表3 轻度肝纤维化组与重度肝纤维化组患儿MMP-7、uPAR水平比较

2.3黄疸组与非黄疸组患儿MMP-7、uPAR水平比较 与非黄疸组患儿比较，黄疸组患儿手术前血清MMP-7、uPAR水平均明显升高(t=4.614、P<0.05；t=9.918、P<0.05)，黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平明显升高(t=9.363、P<0.05；t=12.124、P<0.05)；与组内手术前比较，非黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平无明显变化(t=0.460、P=0.674；t=1.797、P=0.076)，黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平明显升高(t=5.262、P<0.05；t=5.223、P<0.05)。见表4。

表4 黄疸组与非黄疸组患儿MMP-7、uPAR水平比较

3 讨 论

BA的发病机制未明，肝内外胆道均发生闭塞，虽然通过Kasai术能够引流胆汁、暂时延缓肝纤维化进程，但术后肝脏纤维化仍持续发展，最终发展为肝硬化、肝衰竭并需要接受肝移植治疗[8-9]。手术时肝纤维化的程度对疾病的预后具有评估价值，越来越多的研究也开始关注BA病情发展过程中肝纤维化的调控机制[10-11]。MMP-7和uPAR是两种参与细胞外基质降解和合成调控的分子，在肝硬化患者血清中两种分子的水平均明显增高[12-13]。本研究对BA患儿术前血清上述两种分子的分析显示，BA组血清中MMP-7、uPAR的水平均明显高于对照组，提示MMP-7及uPAR的增高可能与BA的发生有关。

MMP-7是MMPs家族的成员之一，在胆管上皮细胞和肝细胞中均有表达，在肝纤维化的进程中，MMP-7能够促进正常肝基底膜及细胞外基质降解、刺激肝星状细胞激活并使细胞外基质在肝脏中发生异常沉积，最终出现肝纤维化[14-16]；uPAR在肝纤维化进程中能够激活转化生长因子-β(TGF-β1)，进而通过TGF-β1的生物学功能来刺激成纤维细胞增殖、细胞外基质异常沉积，最终也引起肝纤维化的发生[17]。本研究在明确BA患儿术前MMP-7、uPAR增多后，进一步分析了MMP-7、uPAR与肝纤维化程度的关系，经手术样本HE染色对肝纤维化程度进行评价，重度肝纤维化组患儿手术前血清MMP-7、uPAR水平均明显高于轻度肝纤维化组患儿，说明MMP-7、uPAR的增多与肝纤维化的程度有关，结合既往关于两种分子生物学功能的报道进行分析：增多的MMP-7、uPAR可能促进了BA患儿的肝纤维化。

BA患儿接受Kasai术后胆汁引流得到改善，但肝纤维化的进程仍持续发展，本研究在手术后2个月时对血清MMP-7、uPAR水平进行了分析，与手术前比较，BA组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平均明显升高，手术后MMP-7、uPAR的持续升高与肝纤维化持续发展的趋势相吻合。已有研究报道称手术时肝纤维化的程度对手术后肝纤维化的发展变化具有一定的预测价值[18-20]，本研究通过手术样本HE染色评价肝纤维化程度后分析了术后MMP-7、uPAR的变化及差异，与手术前比较，轻度肝纤维化组患儿手术后2个月时血清MMP-7、uPAR水平无明显变化，而重度肝纤维化组患儿手术后2个月时血清MMP-7、uPAR水平明显升高，说明在肝纤维化程度较轻时，手术能够暂时延缓术后肝纤维化的进程，而在肝纤维化较重时，手术虽然能使胆汁引流得到改善、但肝纤维化仍会持续发展。

除此之外，本研究还观察了MMP-7、uPAR与BA预后的关系，预后评价的方式为术后2个月内是否发生黄疸。与非黄疸组患儿比较，黄疸组患儿手术前血清MMP-7、uPAR水平较高；与手术前比较，非黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平无明显变化，而黄疸组患儿手术后2个月血清MMP-7、uPAR水平明显升高，说明手术前MMP-7、uPAR水平升高与BA的预后转归有关，MMP-7、uPAR的升高可能通过加重肝纤维化、影响胆红素代谢并造成术后黄疸的发生。

综上所述，BA患儿血清 MMP-7和uPAR水平的升高与肝纤维化的加重及术后黄疸的发生相关，未来MMP-7和uPAR可能作为评价BA患儿肝纤维化程度、预测预后的指标，也可能成为探究BA肝纤维化机制的靶点，但本研究没有对BA患儿的预后进行长期随访，今后将延长随访时间并研究MMP-7、uPAR与预后的关系。BA患儿血清MMP-7和uPAR水平异常升高，且与肝纤维化程度有关，检测血清MMP-7和uPAR有助于预估BA患儿术后发生黄疸的风险。