头孢氨苄片溶出曲线测定方法的比较和确定

张建丽 薛梦薇 柳世萍 贾全(华北制药河北华民药业有限责任公司，河北 石家庄 052165)

0 引言

头孢氨苄片是临床上应用非常普遍的一种抗菌药[1]，且在国务院办公厅发布的需开展仿制药质量与疗效一致性评价的289个基药口服固体制剂范围内[2]。对于普通口服固体制剂，可采用比较仿制制剂与参比制剂体外多条溶出曲线相似性的方法，评价仿制制剂的质量，所以选择适合的溶出曲线测定方法对于研究过程来说十分重要。中国药典中收载的头孢氨苄片溶出度检测方法为篮法100转，并未检测溶出曲线[3]，日本橙皮书中采用桨法50转对头孢氨苄胶囊进行溶出曲线的检测，未涉及头孢氨苄片[4]。本文主要对比篮法100转和桨法50转测定头孢氨苄片参比制剂pH1.2盐酸介质，pH4.0醋酸介质，pH6.8磷酸介质以及水介质中的溶出曲线结果并选出相对更适合头孢氨苄片的溶出曲线测定方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子天平(XS105，梅特勒-托利多)全自动溶出仪(RC12AD，天大天发)，紫外分光光度仪(UV-2700，岛津)

1.2 试剂

头孢氨苄片(Flynn Pharma Ltd)，盐酸(天津风船)，氢氧化钠(天津光复)，磷酸二氢钾(科密欧试剂)，乙酸钠(天津光复)，冰醋酸(天津永大)

2 溶出曲线的测定

2.1 溶出介质配制[5]

pH1.2盐酸介质：取7.65mL的盐酸，用水稀释至1000mL，摇匀，即得。pH4.0醋酸介质：取乙酸钠1.22g和2mol/L的醋酸溶液(取冰醋酸120.0g(114mL)用水稀释至1000mL，摇匀，即得)20.5mL用水溶解并稀释至1000mL，摇匀，即得。pH6.8磷酸介质：取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾27.22g，加水溶解并稀释至1000mL)250mL与112.0mL的0.2mol/L氢氧化钠溶液(取氢氧化钠8.00g，加水溶解并稀释至1000mL)混合，用水稀释至1000mL，摇匀，即得。

2.2 溶出曲线测定

取本品12片，分别以水、盐酸溶液(pH1.2)、醋酸盐缓冲液(pH4.0)、磷酸盐缓冲液(pH6.8)900mL为溶出介质，依法操作(两种方法，篮法，转速100转和桨法，转速50转)，在5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min 时，分别取溶液5mL，滤过，并及时在操作容器中补充溶出介质5mL，精密量取续滤液各适量，分别用溶出介质定量稀释制成每1mL中约含头孢氨苄(按C16H17N3O4S计)25μg的溶液，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法[6]，在262nm的波长处测定吸光度；另精密称取头孢氨苄对照品适量，加溶出介质溶解并定量稀释制成每1mL中约含25μg的溶液，同法测定，计算每片在不同时间的溶出量。 以取样时间点为横坐标，平均溶出量为纵坐标，绘制该介质的溶出曲线图。

2.3 影响溶出数据的因素

除药物制剂自身因素外，实验的仪器装置，溶出介质以及滤膜等均有可能对药物的溶出数据产生影响[7]。

(1)不同设备检测。分别使用天大天大和安捷伦溶出仪，采用篮法100转的方法检测头孢氨苄片样品的溶出数据，对比溶出曲线。

(2)溶液稳定性实验。取头孢氨苄片样品，采用篮法100转溶出曲线测定，分别在5min和45min时取溶液适量，滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释制成每1mL中约含头孢氨苄25μg 的溶液，将该溶液于室温下放置3h，分别于0、1、2、3h测定溶液的吸光度，计算吸光度的RSD%。

(3)滤膜吸附实验。天大天大溶出仪使用天大天大系统保护过滤头和滤膜，针对其过滤方式进行滤膜吸附实验。配制相当于主药溶出度10%的溶液和相当于主药溶出度100%的溶液，这两种溶液均分为两份，一份过滤，一份不过滤。照紫外-可见光光度法在262nm波长处测定溶液的吸光度。

3 结果与讨论

3.1 pH1.2盐酸介质溶出曲线的测定

在pH1.2盐酸介质中分别采用篮法100转和桨法50转对头孢氨苄片的溶出曲线进行检测，得出各个时间点对应的平均溶出量并绘制对应的溶出曲线见图1。

图1 pH1.2盐酸介质中篮法100转和桨法50转的溶出曲线

图1中的两条溶出曲线基本重合，可知在pH1.2盐酸介质中采用两种方法检测结果差异不大。

3.2 pH4.0醋酸介质溶出曲线的测定

在pH4.0醋酸介质中分别采用篮法100转和桨法50转对头孢氨苄片的溶出曲线进行检测，得出各个时间点对应的平均溶出量，绘制对应的溶出曲线见图2。

图2 pH4.0醋酸介质中篮法100转和桨法50转的溶出曲线

从图2可以看出前期溶出篮法100转略高于桨法50转，且篮法100转检测的数据绘制的曲线更平滑。终溶出量两者相当，且达到溶出平台的时间两种方法基本一样。

3.3 pH6.8磷酸介质溶出曲线的测定

在pH6.8磷酸介质中分别采用篮法100转和桨法50转对头孢氨苄片的溶出曲线进行检测，得出各个时间点对应的平均溶出量，绘制对应的溶出曲线见图3。

图3 pH6.8磷酸介质中篮法100转和桨法50转的溶出曲线

图3表明前期溶出篮法100转略高于桨法50转，终溶出量两者相当，且达到溶出平台的时间两种方法基本一样。

3.4 水介质溶出曲线的测定

在水介质中分别采用篮法100转和桨法50转对头孢氨苄片的溶出曲线进行检测，得出各个时间点对应的平均溶出量，绘制对应的溶出曲线见图4。

图4 水介质中篮法100转和桨法50转的溶出曲线

图4可以直观地看出前期溶出篮法100转略高于桨法50转，但最终溶出水平相当。

3.5 实验现象

实验开始时，采用桨法50转的溶出杯中发现有样品粘在杯壁而非直接掉至杯底。各样品掉落位置不同，样品周围介质流速有一定区别，前期RSD值可能偏大。且投料时并非机器自动投料，有一定微小的时间差，可能会在后期研究过程中测定其他样品时出现RSD较高的情况出现。而篮法100转相对可以减少非片剂本身因素造成的溶出数据差异。

3.6 各时间点RSD对比

采用篮法100转和桨法50转检测头孢氨苄片溶出曲线数据，各时间点RSD值见表1。

表1 篮法100转和桨法50转检测各时间点RSD对比

从表1中数据可知，采用桨法50转检测溶出曲线数据，前期RSD值高于篮法100转。结合实验现象，篮法100转相比于桨法50转有一定的优势。

3.7 其他因素

采用不同设备检测头孢氨苄片的溶出数据四种介质中各时间点RSD均不超过5%。在1～3小时内，四种介质的5min和45min时间点溶出数据RSD均不大于2%，溶液稳定。在天大天大系统保护滤头和滤膜的过滤方式下，四种介质回收率不低于98%，滤膜吸附不影响本品种的溶出测定。综上，滤膜，设备，所选的溶出介质这三个外在因素不影响头孢氨苄片的溶出。

4 结语

头孢氨苄片是一种高溶解性的药物，对比桨法50转和篮法100转两种溶出方法检测溶出曲线的结果，均能够反应头孢氨苄片制剂高溶解性的特点，区分力两种方法接近。但是结合溶出杯中的实验现象和各时间点RSD，篮法100转优于桨法50转，该方法与《中国药典》和《美国药典》中头孢氨苄片溶出度方法一致。综合来看，头孢氨苄片体外溶出试验方法选择篮法100转更为合适。