液相色谱法测定芝麻酱中乙二胺四乙酸二钠的方法验证

常景珲

摘要：本研究参照GB 5009.278-2016建立的液相色谱法测定食品中的乙二胺四乙酸二钠的方法，标准曲线相关系数为0.99993，线性良好，检出限与定量限分别为0.003g/kg、0.0065g/kg，加标回收率为91.0%～105.6%，相对标准偏差RSD为0.65%，可以满足食品中中乙二胺四乙酸二钠检测的需求。

关键词：液相色谱法;芝麻酱;乙二胺四乙酸二钠

引言

乙二胺四乙酸二钠是一种食品添加剂，其通过与食品中金属离子螯合成稳定的络合物，从而达到保持食品性状稳定，延长食品保存时间的目的，在食品加工中主要用做防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、凝固剂等。然而，由于乙二胺四乙酸可与钙、镁等人体所必需的微量金属形成螯合物，长期过量摄入会在一定程度上导致人体中微量元素流失，对人体健康造成损害，因此，世界各国对用作食品添加剂的乙二胺四乙酸二钠均有严格的限量规定。我国食品安全标准GB 2760-2014 规定了乙二胺四乙酸二钠在不同产品中最大使用量范围为0.03～0.25g/kg。本研究结合本中心实验室现有设备条件，参照GB 5009.278-2016建立和验证液相色谱法测定食品中的乙二胺四乙酸二钠，以拓展中心液相色谱检验领域。

一、材料与方法

（一）材料与设备

芝麻酱样品购自某超市。

乙二胺四乙酸二钠标准品由坛墨质检提供。

甲醇、甲酸均为色谱纯;盐酸、磷酸、四丁基溴酸铵、乙酸钠、三氯化铁均为分析纯;实验用水为一级水。

液相色谱仪，配紫外检测器;电子天平;涡旋振荡器;超声波清洗机;pH计;混合阴离子（PXA）固相萃取柱;0.45μm微孔滤膜。

（二）实验方法

1.试样前处理过程

称取试样5g（精确到0.001g），置于50mL比色管中，加入25mL水，涡旋混匀，超声20min，5000r/min离心5min，取上清液置于50mL比色管中。剩余残渣重复提取一次，离心后合并上清液，加水定容至50mL。

分别取上述提取液5mL于离心管中，加入0.5mL三氯化铁溶液，涡旋混匀1min，超声20min，5000r/min离心5min，待净化。

依次用5mL甲醇、5mL水活化PXA（混合阴离子固相萃取柱），将待净化液全部上样过柱，依次用5mL水、5mL甲醇淋洗，吹干，用5mL5%甲酸甲醇水溶液洗脱，吹干，收集洗脱液并定容至5mL，过膜供液相色谱仪测定。

2.标准系列溶液配制

参照GB 5009.278-2016《食品安全国家标准 食品中乙二胺四乙酸盐的测定》中标准溶液配制步骤。

3.高效液相色谱条件

色谱柱：Plus-C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5.0μm;检测器：二极管阵列检测器;流动相：甲醇/四丁基溴化铵-乙酸钠混合溶液（pH4.0）=15：85;流速：0.8mL/min;柱温：35℃;波长：254nm;进样量：10μL。

二、结果与分析

（一）线性关系及检出限

将配制的乙二胺四乙酸二钠标准工作系列按照上述液相色谱条件测试，绘制标准曲线，回归方程为Area=13.63402*Amt-4.6902801，相关系数为0.99993。以3倍信噪比对应的乙二胺四乙酸二钠含量为检出限，上机浓度为1μg/mL时，信噪比为10.2，当信噪比为3时，所得浓度为0.3μg/mL，计算得出乙二胺四乙酸二钠检出限为0.003g/kg;以10倍信噪比对应的脱氢乙酸含量为定量限，上机浓度为3μg/mL时，信噪比为46.3，当信噪比为10时，所得浓度为0.65μg/mL，计算得出乙二胺四乙酸二钠定量限为0.0065g/kg。

（二）加标回收率与精密度

在芝麻酱试样中，添加低（30 mg/kg）、中（60 mg/kg）、高（150 mg/kg）三个浓度水平的乙二胺四乙酸二钠标准溶液，按照上述前处理过程操作、液相色谱条件测试，考察其加标回收率。选取某一含有乙二胺四乙酸二钠的芝麻酱样品进行6次平行测定，计算RSD，考察其精密度。经测试，该方法的加标回收率为91.0%～105.6%，RSD为0.65%，满足GB/T 27404-2008的要求。

（三）实验室内部比对试驗

为确认本实验方法的准确性，将用本法测得乙二胺四乙酸二钠含量为30.5mg/kg的某芝麻酱，在期间精密度条件下由另一位检验员再次测定，测得其中乙二胺四乙酸二钠含量为31.1μg/kg，两次测定绝对差值/算术平均值为0.2%，符合GB 5009.278-2016的规定。

三、结论

本方法参照国标方法建立的液相色谱法测定芝麻酱中乙二胺四乙酸二钠的检测方法，准确度高、精密度、灵敏度高、重现性好，且操作较为简单，干扰少，所用试剂毒害性低，可为基层食品安全监管提供检测方法和技术支撑， 对强化食品添加剂监管，保障食品安全具有实际意义。

参考文献：

[1] 李硕， 李莉， 曹进. 高效液相色谱法检测面粉中的乙二胺四乙酸二钠[J]. 食品安全质量检测学报， 2017， 8（2）：51-51.

[2] 李卓， 王涛， 艾芸，等. 高效液相色谱法测定八宝粥罐头中乙二胺四乙酸二钠的不确定度分析[J]. 食品安全质量检测学报， 2018， 9（01）：131-135.