四种猪圆环病毒灭活疫苗免疫效果的评价

张德宝，宋龙飞，刘 佳，幺立祥，孙华峰

（1.河北韩美生物科技有限公司 071000；2.河北正合生物制药有限公司 050000；3.河北省农业农村厅农业品牌建设中心 050000）

猪圆环病毒病（Porcine circovirus disease， PCVD）是由圆环病毒II 型引起的一种免疫抑制性疾病， 统称猪圆环病毒相关性疾病，主要包括断奶仔猪多系统衰竭综合症、猪皮炎与肾病综合症、繁殖障碍等一系列疾病，给养猪业造成了严重的经济损失。主要感染3～8 周龄猪，临床表现生长发育不良、皮肤苍白、体质下降、渐进性消瘦、腹泻及呼吸困难，发病率20.5%～60%，死亡率通常达10%，有的猪场高达50%［1，2］。 1991 年首先在加拿大的猪群发现PCV2 感染［3］，该病迅速在全世界各地开始蔓延。 自2000年以来，PCV2 感染在欧洲每年造成的经济损失达6 亿欧元，在美国每年约造成5 亿美元的经济损失［4，5］。 我国猪圆环病毒感染最早报道于2000 年［4］，ELISA 方法流行病学调查， 检测出我国PCV 血清阳性率高达40%～50%， 表明我国猪群PCV2 感染率较高， 且其常常伴随PRRSV、PRV、PPV、CSFV 以及多种细菌等其他病原混合感染。

随着国内外推广和商品化PCV2 疫苗的应用， 疫苗接种已成为防控PCVD 的重要手段。 不同厂家的疫苗由于生产过程和佐剂类型的不同，免疫效果亦不相同。 本研究比较了4 种市售销量较好的PCV2 疫苗进行试验，对比不同组猪群生产性能方面的差异，比较试验猪群不同时期内PCV2 基因拷贝数和病毒血症感染比例、血清抗体水平方面的差异，为养猪生产中正确选择猪圆环病毒疫苗提供参考。

2.1.1 党参总皂苷溶解性试验。室温下，党参总皂苷在表面活性剂中溶解性排序依次为Cremophor EL40、Tween-80、Span-80；在助表面活性剂中溶解性排序依次为PEG400、1,2-丙二醇；在油相中溶解性排序依次为橄榄油、辛酸癸酸甘油三酯，故选择Cremophor EL40、PEG400、橄榄油用于确定党参总皂苷纳米乳组成。

1 材料与方法

1.1 试验动物 14～21 日龄健康杜长大三元杂交仔猪100头，由河北保定某猪场提供。

南海问题是一个涉及多方的议题，因此各方做出决策的认知意象不尽相同，分属不同的立场和视域，这本属正常现象。但越菲等声索国完全无视中国多年来在南海争端上的自我克制，肆意在国际上将中国描述为奉行扩张主义、欺压弱小邻居的恶邻；美日虽非当事国，但出于在亚太地区制衡中国的考虑，也将中国正常的南海维权行为和主权范围岛礁建设行为视为中国意欲控制南海航道，增强自身地缘政治优势，进而形成势力范围的重要一步。不同国家之间围绕某一议题在认知上形成巨大鸿沟并不奇怪，这通常是因为，在国际政治互动中，当他国的行为与己方的预期不相符时，该国通常无视他国的外部环境约束而强调他国天性本恶。[32]

2.1 临床评价 仔猪注射4 种疫苗后的平均日增重与未免疫对照组相比，0～10 周龄内不存在差异 （P＞0.05），10～20 周龄内差异显著（P＜0.05），即仔猪注射疫苗后平均日增重明显高于对照组，且疫苗A 和疫苗D 组试验猪平均日增重显著高于对照组，差异显著（P＜0.05，详见表1）。

㉘DiMaggio，P．J．，Powell，W．W．，The new institutionalism in organizational analysis，Chicago:University of Chicago Press，1991．

1.6 血清学检测 应用商品化试剂盒对1.5 血清样品进行抗体检测。

1.3 试验设计 将试验动物随机分成5 组 （含空白对照组）进行双盲试验，每组20 头仔猪。 A 组、B 组、C 组、D 组分别使用对应疫苗按照产品说明书进行免疫，E 组为不注射疫苗组。 所有试验猪按照常规饲养进行管理， 仔猪于24 日龄时断奶，65 日龄时转入育肥舍。

南昌绿地国际会展中心钢桁架内供回水管线方案优化与实施……………………………………………………… 李国灵（11-86）

1.4 生产性能 称取并记录各组试验猪出生体重、 断奶体重、转栏体重、出栏体重，统计并分析各试验组不同时期平均日增重（死亡猪只的数据排除在生产性能评价之外）。

1.7 数据处理 采用SPSS 19.0 及GraphPad Prism 软件进行统计分析处理。

1.5 感染情况 应用EasyPure Viral DNA/RNA Kit（TRANSGEN）对试验猪血清（疫苗注射后（days post vaccination，dpv）0d、21d、49d、70d、112d 血清样品） 进行DNA 提取， 采用Real-Time PCR 对猪圆环病毒PCV2b 基因拷贝数进行定量分析， 以确定试验猪群PCV 病毒血症感染情况。

2 结果

1.2 主要试剂 猪圆环病毒2 型ELISA 抗体检测试剂盒，购自瑞普（保定）生物药业有限公司生产；猪圆环病毒灭活疫苗，分别购自勃林格、南农高科、青岛易邦和瑞普生物。

2.2 感染情况 如图1 所示，所有仔猪在疫苗注射前均没有检测到PCV2 基因，在疫苗注射后21d 检出率达到高峰，且注射疫苗组仔猪PCV2 基因拷贝数和抗原检出阳性率均显著低于未注射疫苗组， 说明4 种疫苗可有效降低血清中PCV 基因拷贝数和病毒血症阳性比例。

图1 days post vaccination

2.3 血清学测定 如图2 所示，ELISA 抗体趋势大体符合疫苗接种后，机体抗体消长的一般规律。 其中免疫组抗体水平和对照组相比， 在疫苗注射前及注射后21d 没有差异，21d 后免疫组仔猪抗体呈大致上升趋势，与对照组差异显著。且疫苗A、疫苗D抗体水平略高，但与疫苗B、疫苗C 没有显著性差异。

图2 days post vaccination

3 讨论

多年的实践经验证明， 免疫预防是圆环病毒相关疾病防控的有效措施，国外最早于2007 年出现了商品化的疫苗，且临床效果显示，商品化的PCV 疫苗可以有效的控制圆环病毒相关疾病的大规模发生。 本研究选取了市售销量比较好的4 种不同厂家生产的猪圆环病毒灭活疫苗进行免疫效果的临床对比实验，生产性能统计结果显示免疫猪圆环病毒疫苗后， 猪群平均日增重得到明显改善，降低了料肉比，提高了生产效益。

如何评价猪圆环病毒疫苗的免疫效果是近年来研究的热点，本研究综合生产性能指标、抗原检出比例、抗体产生规律，应用Real-Time PCR 和商品化试剂盒、中和试验等对猪圆环病毒抗原、抗体进行测定，结果显示疫苗免疫可有效降低血清中PCV基因拷贝数和病毒血症阳性比例，提高血清抗体水平，与未免疫对照组相比均存在显著性差异，免疫效果提升明显。 其中疫苗A和疫苗D 表现略具优势， 初步表明在市售的不同厂家的疫苗存在质量差异， 本研究为免疫程序的合理制定及筛选优质疫苗提供了一定的数据支持。