冰片对泥鳅的麻醉效果及血液生化指标的影响

郝晨光，舒斌，董扬帆，鲁耀鹏，郑佩华，宫春光

（1.河北农业大学海洋学院，河北 秦皇岛 066000；2.华中农业大学水产学院，湖北 武汉 430000；3.海南大学海洋学院，海南 海口 570100；4.华南师范大学生命科学学院，广东 广州 510000；）

泥鳅肉质鲜美，既可食用，又可入药，被称为“水中人参”，是一种营养价值很高的水产动物。多种因素导致野生泥鳅的产量减少，市场需求却较大，使人工养殖泥鳅呈现出了巨大的商机，必将成为水产养殖行业的新趋势。

水产养殖中长途运输、标记、催产等都不同程度地伤害鱼类。使用麻醉剂可大幅度降低操作应激，提高鱼类的成活率。冰片又称龙脑、龙脑香，为透明或半透明的中药。目前市售的冰片多数为龙脑香的树脂和挥发油中取得的结晶或化学合成产品[1]。冰片能通诸窍，散郁火，去翳明目，消肿止痛。冰片的医学作用药理已有一定研究[2-4]，但是，冰片作为麻醉剂对水产养殖动物的影响研究较少。本实验采用实验生态学方法研究了冰片对泥鳅的麻醉效果及对血液免疫指标的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

200 尾试验用泥鳅由河北农业大学海洋学院实验室提供，体质量为（10±1）g，体长（4.0±0.5）cm。泥鳅运到实验室后，每50 尾为一组放入2L 水桶中暂养24h，不投喂。试验用曝气3d 以上的自来水，水温19～23℃，溶解氧5～6mg/L，pH6.7.0～7.4。

冰片麻醉剂的配制：冰片∶PEG-300 聚乙二醇∶黄芨多糖为1∶1∶100，用蒸馏水溶解，分别配制成7g/L、8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L 和17g/L 的浓度备用。

试验用其他药品包括：肝素钠、Na2HP04、KH2P04、钼酸铵、过氧化氢、盐酸、无水乙醇、氢氧化钠。试验用器材包括：吸耳球、电子天平、胶头滴管、蒸馏水瓶、电炉（石棉网）、721 分光光度计、恒温水箱、血红蛋白比色计、计数器等。

1.2 方法

1.2.1 冰片对泥鳅麻醉效果实验

预试验设5 个冰片浓度：1g/L、5g/L、10g/L 和15g/L。预实验期间，用摄影机全程记录泥鳅的状态与反应，以确定设置的浓度梯度的合理性。通过查阅文献[4]，结合泥鳅的反应特征，将麻醉过程分为六期（表1），复苏过程分为四期（表2）。

预实验表明，冰片对泥鳅的麻醉效果和对理化指标影响的正式试验浓度应在5～20g/L 之间（表3）。

正式试验的浓度梯度为：8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L 和17g/L，每个浓度3 个平行组和1 个对照组，每组3 尾泥鳅。

表1 冰片对泥鳅麻醉程度分期及其行为特征Tab.1 Anesthesia stages and behavior characteristics of borneol anesthetized loach

表2 被冰片麻醉的泥鳅复苏过程分期及其行为特征Tab.2 Recovery stages and behavior characteristics of borneol anesthetized loach

表3 预实验结果Tab.3 The preliminary experimental results

1.2.2 冰片对泥鳅血液中血红蛋白含量和过氧化氢酶活力影响试验

参考其他麻醉剂的研究方法[5-7]进行试验，用SPSS 软件进行数据分析。

血红蛋白含量测定：尾静脉采血，用Sahlis 比色法测定泥鳅血红蛋白含量。

过氧化氢酶活力测定：同麻醉效果的实验。每盆放入4 尾体质健康、规格相当的泥鳅。每组泥鳅达到深度麻醉10min 后开始尾静脉采血。每组血量应达到25mL，注入管中后放入4℃的冰箱中静置冷藏4h，1000r/min 离心10min 至完全分层，取上清液为实验所需血清。然后准备其他试剂：磷酸盐缓冲液为67mmol/L，pH=7.4，基质液为65μmol/L 的过氧化氢。称取钼酸铵20.2g，溶于500mL 蒸馏水中。将基质液置于37℃的水中，水浴加热5min，然后按表4步骤操作。

表4 操作步骤Tab.4 The operation steps

过氧化氢酶活力（U/L）=[（A对-A测）/A标]×（65×1×1000/0.2×1000）

式中A对为对照管吸光度值，A标为标准管吸光度值，A测为测定管吸光度值，65 为标准管H2O2体积，1000 换算成1L 血清，0.2 为血清用量，1000 为μmol 换算成mmol，最终单位换算为U·mL-1。

2 结果与分析

2.1 冰片对泥鳅的麻醉效果

由表5 可知，随着冰片浓度的增加，泥鳅进入麻醉状态所需的时间缩短，麻醉表现越明显，复苏时间越长。当冰片浓度达到15g/L 及以上时，泥鳅出现剧烈应激反应，跃出水面，开始出现死亡。冰片浓度继续加大，鱼类的应激反应更剧烈，持续一会就越过前几级麻醉，直接进入深度麻醉。当冰片浓度达到17g/L 时，泥鳅全部死亡，无法复苏。

表5 冰片对泥鳅的麻醉效果Tab.5 Anesthetic effect of borneol on loach

2.2 冰片对泥鳅血液中血红蛋白含量和过氧化氢酶活力的影响

由表6 可知：随着冰片浓度的升高，泥鳅血液中血红蛋白含量差异不显著，但是血液中过氧化氢酶活力逐渐降低。冰片浓度在12～17g/L 时，过氧化氢酶活性显著低于0～11g/L 各组；冰片浓度为14～17g/L时，过氧化氢酶活性显著低于12g/L 和13g/L 两组。

表6 冰片对泥鳅血液中血红蛋白含量和过氧化氢酶活力的影响Tab.6 Effects of borneol concentrations on hemoglobin content and catalase activity in the blood of loach

3 讨论

3.1 冰片对泥鳅的呼吸频率和摆尾次数的影响

随着冰片浓度不断提供和麻醉程度的不断加深，泥鳅呼吸频率逐渐减缓，摆尾次数逐渐减少，这与其他鱼类表现相同[8]。麻醉剂溶于水后，通过体表和鳃丝进入泥鳅的血液循环系统，最终在泥鳅的大脑聚集。在一定时间内，麻醉时间越长，血液中麻醉剂的含量越高，最终达到一个平衡的峰值状态。此时，泥鳅表现为稳定的深度麻醉。

3.2 冰片对泥鳅血液血红蛋白含量的影响

麻醉前后和不同冰片浓度下，泥鳅血液中血红蛋白含量无显著差异。这显示出了冰片与大多数麻醉剂和麻醉方法不同。如电麻醉方法就深刻影响鱼类血液的诸多指标。影响血红蛋白含量的因素有许多，包括鱼体的造血减弱、贫血、内分泌紊乱、机体遭受机械性损伤而缺血、中毒、营养不良等[9，10]。本试验用的泥鳅健康，无任何机械损伤；试验前空腹，最大限度地排除其他干扰。据研究，人吸收冰片后，通过排便和出汗呼吸等方式排出体外，在体内不易蓄积。冰片与以上列举的影响血液血红蛋白的因素没有明显关系，这可能是实验中泥鳅体内血红蛋白含量没有显著变化的原因。

3.3 冰片对泥鳅血液过氧化氢酶活力的影响

在冰片上述浓度下，泥鳅体内的过氧化氢酶活性降低。研究表明，冰片对神经系统具有双向调节作用，既能镇定安神，又能提神醒脑[11，12]。本试验冰片浓度可能正好处于调节的临界点，即镇定作用时，泥鳅各项生命活动趋于平缓，过氧化氢酶的活性也在降低，这可能与冰片的镇定安神功效有关，限制了机体内的某些代谢速率，影响了过氧化氢酶的合成。后来在较高的冰片浓度下，泥鳅出现了死亡状况，这可能与过氧化氢酶含量降低，在泥鳅体内蓄积有关。

3.4 小结

据研究，麻醉剂的理想浓度作用于动物时，3 min之内动物即进入麻醉状态，5 min 之内完全复苏[8]。麻醉时间过短或过长都不能达到理想效果。冰片麻醉对泥鳅的血红蛋白含量影响不大，但能影响泥鳅血液过氧化氢酶的活性，且在冰片浓度为14g/L 时，过氧化氢酶活力显著降低。麻醉效果表明，冰片麻醉泥鳅的最佳浓度为14～15g/L。天然冰片在机体内不易蓄积，对人体没有明显的毒副作用[13-15]，是一种天然安全高效的麻醉剂。但是，目前市场上充斥着大量的化学合成冰片，其药理效果与天然冰片相差无几，对人体有明显的毒副作用，在使用化学合成的冰片时，应注意控制浓度。而天然冰片目前市场上较少，价格略高，天然冰片作为麻醉剂适于较为珍贵或数量较少的鱼类，以降低成本。