胎盘中信号转导和转录活化因子3与妊娠期肝内胆汁淤积症患者围产结局的关系

裴广丽 谢洁 刘德荣 徐金娥

近年来，有数据显示，ICP患病率达0.20%～2.00%，多发于妊娠中晚期，可致羊水胎粪污染、早产、新生儿窒息等妊娠并发症[1]。该病发病机制复杂，属多因素(如环境、内分泌、遗传变异、免疫功能失常等)共同作用所致[2-4]。据报道显示，信号转导和转录活化因子3(STAT3)参与ICP的发生及发展，但目前鲜有报道分析胎盘中STAT3表达与ICP的关系，且关于胎盘中STAT3表达与ICP孕妇分娩结局的关系尚无文献报道[5]。本研究通过测定健康顺产孕妇和ICP孕妇胎盘中STAT3表达，观察不同分娩结局产妇STAT3表达特征。

资料与方法

一、一般资料

选择我院ICP孕妇126例为观察组，纳入时间为2016年1月至2020年1月，另选择同期入院的102例健康顺产孕妇为对照组，获我院医学伦理委员会批准。入选标准：①ICP孕妇：入院后确诊[6]；临床资料完整；②健康顺产孕妇：年龄≥18岁；既往身体健康，未发现妊娠期高血压、糖尿病等并发症；临床资料完整。排除标准：①未发现输血和免疫治疗史；②不良孕产病史，如死胎、复发性自然流产等；③胎位异常；④妊娠期高血压等妊娠合并症。126例ICP孕妇年龄18～37(28.10±1.54)岁，102例健康顺产孕妇年龄20～37(29.20±1.62)岁，两组基线资料无显著差异性(P>0.05)。

二、 研究方法

(一)免疫组织化学法测定胎盘组织中STAT3表达 娩出胎盘后10 min内，在脐根正对面取2块无羊膜和蜕膜组织的绒毛组织，约1 cm×1 cm×1 cm，期间注意避开钙化以及坏死区域，其中1块绒毛组织利用无菌生理盐水冲洗后浸入10%甲醛中进行固定，经脱水、透明等处理后行石蜡切片制作，后备用以行免疫组织化学检测。另1块绒毛组织置于甲醛中，行蛋白印迹法检测。以SP法测定胎盘组织中STAT3表达(上海康朗生物科技)。由2位经验丰富的病理学专业医师以双盲法行结果判定，若细胞内有棕黄色颗粒出现，则为STAT3阳性信号，根据阳性细胞百分率赋分(≥75%、25%～<75%、5%～<25%、0%～<5%分别赋3、2、1、0分)，并根据细胞质或胞核着色度赋分(棕褐、棕黄、浅黄、未着色分别赋3、2、1、0分)，将两项赋分乘积<2分则为阴性，反之为阳性。

(二)蛋白印迹法测定STAT3蛋白表达 留取蛋白样本，测定细胞总蛋白浓度，上样电泳处理后将蛋白转印至聚偏二氟乙烯印迹膜上，小牛血清封闭，STAT3一抗、β-actin抗体4℃孵育过夜，二抗室温孵育后利用增强化学发光法发光。借助Quantity图像分析系统对目的条带进行分析，详细观察条带灰度值，分析STAT3蛋白表达。

三、统计学方法

结 果

一、两组胎盘中STAT3表达分析

两组胎盘滋养层细胞胞质和胞核处均出现STAT3表达，呈褐色、棕黄、浅黄色染色颗粒，而观察组、对照组胎盘中STAT3分别呈强阳性表达和弱阳性表达(图1)。针对胎盘中STAT3细胞阳性率及平均光密度值，观察组均显著高于对照组(P<0.001，表1)。

表1 比较两组STAT3细胞阳性率与平均光密度值(±s)

图1 两组胎盘中STAT3表达(A：观察组；B：对照组)

二、两组胎盘中STAT3蛋白表达分析

两组孕妇胎盘中均发现STAT3蛋白表达，其中观察组、对照组分别为1.060±0.110、0.370±0.080，两组差异显著(t=53.004，P<0.001)。

三、ICP孕妇不同分娩结局胎盘中STAT3表达观察

126例ICP孕妇中，顺产39例(30.95%)，剖宫产87例(69.05%)。针对胎盘中STAT3细胞阳性率，顺产者和剖宫产者分别为(0.250±0.036)%、(0.760±0.068)%，存在显著差异(t=44.084，P<0.001)；针对平均光密度值，顺产者和剖宫产者分别为0.038±0.011、0.074±0.015，存在显著差异(t=13.443，P<0.001)。

讨 论

STAT3在诸多组织中具有重要作用，属细胞生长过程中的有效调剂者，基于诸多生长因子、细胞因子及其他刺激因素干扰下可被激活，进而发挥对其他细胞因子表达的调节作用，并介导细胞生理过程(如增殖、凋亡等)[7-10]。有报道发现，绒毛外滋养层细胞侵袭、迁移等生物学功能与STAT3转录因子活性有关[11-13]。谭桢等[14]报道推测，诱导STAT3信号通路受抑可发挥抗炎作用，抑制肝内胆汁淤积。

结果显示STAT3在胎盘中有明确表达，其中两组胎盘中STAT3细胞阳性率、平均光密度值存在显著差异；STAT3蛋白表达水平在观察组更高，表明相较于健康顺产孕妇，ICP孕妇母胎界面STAT3表达明显上升，提示STAT3可能参与ICP发生及发展。叶云飞等[15]通过对50例ICP孕妇和30例健康孕妇进行系统研究，也发现ICP孕妇胎盘中STAT3细胞阳性率较健康孕妇高，且随着病情加重，STAT3细胞阳性率呈递增态势，证实ICP发生及发展过程中STAT3发挥着重要作用，证实了本结论。笔者推测，STAT3可诱导大量白细胞介素-6等合成并释放，活化Janus激酶/信号通路，并出现正反馈调节作用，加剧炎症级联反应，最终诱发ICP的发生及发展。有研究表明，胆酸基于诱导肠道低度炎性反应下可促使白细胞介素-6/STAT3通路被激活[16]。笔者推测，造成本结论的原因，还可能跟ICP孕妇胆汁酸水平相关，具体机制尚未明确。

此外，本研究发现，顺产者胎盘中STAT3细胞阳性率及平均光密度值均明显低于剖宫产者，预示胎盘中STAT3可能与ICP孕妇分娩结局有关。ICP的发生及发展可能与白细胞介素-6/STAT3通路有关，而STAT3、白细胞介素-6表达又与ICP病情严重程度有关，故推测胎盘中STAT3可能与ICP孕妇分娩结局密切相关。

综上，ICP孕妇分娩结局可能与胎盘中STAT3表达有关，但考虑本文选取病例数偏少，且未分析围生儿结局与胎盘中STAT3表达的关系，故今后需深入分析。