实验室内血液分析仪间白细胞分类结果比对方法的建立与应用

王 晟， 段小勇， 刘兴态

（1. 三峡大学第三临床医学院国药葛洲坝中心医院检验科，湖北 宜昌 443002；2. 三峡大学第三临床医学院国药葛洲坝中心医院急诊医学科，湖北 宜昌 443002）

血液分析是目前医疗机构最常见的检验项目，血液分析仪在临床检验工作中使用非常广泛，如何保证实验室内不同品牌、不同型号的全自动血液分析仪检测结果的准确性和一致性，已成为检验工作的重点[1]。白细胞分类计数是血液分析结果中很重要的一部分，其结果的可靠性是临床疾病诊断和治疗的重要依据[2]，仪器间白细胞分类计数结果的比对验证也是实验室工作中必不可少的一部分。中国合格评定国家认可委员会编写的文件《医学实验室质量和能力认可准则在临床血液学检验领域的应用说明》中也明确要求应定期进行仪器间白细胞分类计数正常标本的结果比对[3]。本研究参考《全国临床检验操作规程》第四版和有关卫生行业标准，建立了一套切实可行的不同仪器间白细胞分类计数结果比对方法。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

XN-1000血液分析仪（简称XN-1000）、XN-550血液分析仪（简称XN-550）、XS-900i血液分析仪（简称XS-900i）（均为日本希森美康公司）及BC-5390血液分析仪（简称BC-5390）（深圳迈瑞公司），所有仪器均使用原厂配套试剂及校准品，质控品均为美国伯乐公司全血质控品。手工分类采用珠海贝索生物技术有限公司刘氏染液，人工镜检采用日本奥林巴斯光学工业株式会社显微镜。

1.2 方法

1.2.1 样本 （1）可比性试验样本。依照卫生行业标准WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》，收集国药葛洲坝中心医院当日住院及门诊患者乙二胺四乙酸二钾抗凝的新鲜全血样本30份。（2）白细胞分类结果比对样本。以30份新鲜全血样本白细胞计数和分类均无异常报警的样本为白细胞分类结果比对样本，并按照卫生行业标准WS/T 246-2005《白细胞分类计数参考方法》[4]要求制备血涂片，每份样本均在采集4 h内制作3张血涂片并染色。

1.2.2 白细胞分类检测 （1）仪器检测。确认仪器当日质控在控后，将比对样本分别采用4台血液分析仪按自动进样模式检测1次，所有标本在采集后4 h内进行检测。（2）人工分类。请3位长期（＞5年）从事血液形态检测，且多次（＞5次）参加我国国家卫生健康委临床检验中心室间质量评价血细胞形态学检查成绩优异的检验师选取血涂片分散均匀、血片体尾交接处细胞展开良好的部位，按照白细胞分类参考方法[4]对样本的血涂片进行镜检，每份样本计数1张血涂片中200个白细胞，记录并计算各种细胞分类百分数。

1.2.3 仪器间白细胞分类结果比对 （1）确定比对靶值。如人工分类计数同一份样本中性粒细胞百分数、淋巴细胞百分数、单核细胞百分数、嗜酸性粒细胞百分数、嗜碱性粒细胞百分数同时符合卫生行业标准WS/T 246-2005《白细胞分类计数参考方法》要求的由标准误（Sep）导出的可信区间均值的95%可信区间范围，则取人工分类结果的均值为该样本仪器间白细胞分类结果的比对靶值。选取满足要求的样本10份，如满足要求样本不足10份，则重新收集当日样本再次进行手工分类，确认其符合要求后进行补充。（2）比对方法及判断标准。10份样本中有8份及以上仪器白细胞分类结果同时在比对靶值的95%可信区间内，则认为该仪器的白细胞分类结果比对试验通过验证。（3）计算白细胞分类计数结果的95%可信区间。 根据公式

计算白细胞分类计数结果的95%可信区间，式中p=均值（3人分类计数百分数结果），q=100-p，n=600（3位检验人员观察的白细胞总数）；当自由度为599时，95%可信区间的t分布因子（St）=1.96[5]，95%的可信区间为p±1.96×Sep。

1.3 统计学方法

采用Excel软件进行统计分析，计算均值，采用IF系列函数进行判断。

2 结果

2.1 白细胞人工分类结果

白细胞人工分类结果及比对情况见表1（以8号样本为例）。

2.2 仪器分类结果

各仪器白细胞分类结果比对试验均通过验证。其中XN-1000和XS-900i 10份样本全部符合要求；XN-550和BC-5390 10份样本中各有9份符合要求，不符合的均为嗜碱性粒细胞百分数。各仪器具体白细胞分类结果及比对情况见表2（以8号样本为例）。

表1 8号样本3位检验师白细胞人工分类结果、均值及比对判断结果

表2 8号样本仪器间白细胞分类结果

3 讨论

白细胞分类计数是疾病的临床诊断、治疗及预后判断的重要依据，但不同仪器、不同技术分类结果有一定差异，所以实验室内各仪器间白细胞分类计数结果的准确性和一致性有着非常重要的意义。虽然目前很多仪器结合了荧光技术、电阻抗技术等，可提示可能出现的细胞形态及数量上的异常情况[6]。但当遇到可疑情况时，尤其在病理条件下，仍需要人工显微镜复查。考虑到血液分析仪间实验室内的结果可比性试验已经广泛开展，且进行该试验的样本基本也能满足比对试验的要求，本研究仅对实验室内血液分析仪间的结果可比性试验样本中白细胞计数和分类均无异常报警的样本进行比对验证，并将2项比对试验同时进行。

关于白细胞分类结果比对验证的方法，我们查阅了大量相关标准、规程、教材等，未发现明确的规范或指南。鉴于血液分析检测中5种白细胞分类计数结果是相互关联又密不可分的一个整体，组合在一起才是完整的白细胞分类，才能全面、准确地反映患者的相关状况，为临床提供所需的诊疗信息，将各仪器检测的5种白细胞分类计数结果分开进行比对显然不合适，因此将比对方法设置为每份样本白细胞分类结果必须均在比对靶值的95%可信区间内才算通过验证。考虑到仪器间因品牌及方法学的差异，分类结果必然会有一定的偏差，为确保各仪器分类结果的准确性和一致性，本研究将比对靶值设置为依照相关标准推荐的白细胞分类参考方法计数结果；比对试验通过验证的标准参考国家卫生健康委临床检验中心举办的室间质量评价活动的评判标准，即样本比对合格率为80%及以上。在实际工作中，国药葛洲坝中心医院自2018年启用此比对方法至今，连续2次（每年1次）各仪器均顺利通过比对验证。在这2次比对试验中有3次出现不符合项，均为嗜碱性粒细胞百分数，原因是白细胞中嗜碱性粒细胞百分数数量极少，仪器检测和人工分类计数均存在一定的偶然性，导致部分样本的随机误差超出95%可信区间。

本研究建立的实验室内多台血液分析仪白细胞分类结果的准确性和一致性比对方法经实践证明切实可行，可为实验室内多台血液分析仪白细胞分类结果的准确性和一致性提供参考。