中和种子膏干预不育男性精子DNA损伤的临床研究*

范 曾 卢宗林 赵旭东

近年来，男性不育症发病率日益增加，临床医家都在积极探索有效治疗方法。笔者对过去3年在我中心就诊并符合条件的90例男性不育症患者采用中和种子膏口服治疗，取得了较好的治疗效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2016年10月—2019年9月在我中心就诊的男性不育症患者90例。年龄24～43岁，平均27.4岁；婚龄1～21年，平均3.7年。其中合并慢性前列腺炎者27例；合并慢性附睾炎者8例，皆为单侧；合并精索静脉曲张者15例，单侧11例，双侧4例。

1.2 诊断标准

1.2.1 西医诊断标准参考《世界卫生组织男性不育标准化检查与诊疗手册》和《男科学》男性不育诊断标准：已婚男女同居1年以上，性生活正常，未避孕而不育，同时排除女方不孕因素；禁欲3～7 d，经2次以上检测，精子DFI>25%，伴精子浓度<15×106/ml或精子前向运动率<32%。

1.2.2 中医辨证标准参考《中医病证诊断疗效标准》(国家中医药管理局，1994年)和《中药新药临床研究指导原则(试行)》(郑筱萸，2002年)拟定脾肾两虚证标准。主症：腰膝酸软、性欲减退、食少纳呆、体倦乏力。次症:头晕、耳鸣、遗精、早泄、食后腹胀、腹痛隐隐、痞闷呕恶、排便无力；舌淡苔白,脉沉弱。具备主症2项或2项以上加次症2项或2项以上，其中主症2项脾肾各有1项或1项以上，次症2项脾肾各有l项或1项以上，即可诊断。

1.3 排除标准①严重少精、弱精、畸形精子症及死精子症患者；②患严重勃起功能障碍、逆行射精或不射精症者； ③内分泌检测有性腺功能异常者；④有药物未控制的细菌性前列腺炎及近期发热等影响生育因素者；⑤服用抗癫痫、抗肿瘤等影响生精功能及精子活力的药物者；⑥外生殖器先天畸形、精道梗阻、睾丸萎缩者； ⑦过敏体质或对试验药物有过敏者；⑧同时应用其他药物治疗者；⑨未按规定用药、资料不全致影响疗效或安全性判断者。

1.4 治疗方法采用中和种子膏口服治疗。组方如下：菟丝子100 g, 白茯苓150 g, 山萸肉100 g, 熟地黄200 g, 炒山药200 g, 枸杞子200 g, 车前子150 g, 覆盆子150 g, 炙远志100 g, 麦冬200 g, 五味子100 g, 当归200 g, 柏子仁100 g, 人参150 g, 川牛膝100 g, 沙苑子150 g, 炒杜仲150 g, 蜂蜜250 g。由洛阳市第一中医院中药房提供原药材，制剂室加工制作膏方，一次1袋(15 ml，约25 g)，每天3次,100 ml温开水冲服。每3个月为一个疗程。

1.5 观察指标根据《WHO人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)进行精液常规分析。采用SSA-II精子自动检测分析系统(北京穗加软件有限公司)进行精液参数分析，研究数据包括精子浓度和精子前向运动率；采用染色质扩散实验检测精子DFI。

1.6 统计学方法采用SPSS 17.0统计学软件处理数据，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 精子浓度和精子前向运动率治疗后患者精子浓度有所增加，但和治疗前相比未见明显差异；精子前向运动率则明显增加，见表1。

表1 患者治疗前后精子浓度和精子前向运动率比较

2.2 精子DFI治疗后患者精子DFI较治疗前明显降低，见表2。

表2 患者治疗前后精子DFI比较

3 讨论

男性不育症是指夫妇同居1年以上，性生活正常，未采取任何避孕措施，排除女方不孕因素，因男方因素造成不孕者。数据统计，目前全球范围内不孕不育发病率为8%～12%，其中约20%由男性因素引起，30%与夫妻双方有关，因此由男性因素引起的不育症比例高达50%。中国育龄夫妇不孕不育发病率约为10%，其中男性因素超过40%，且有逐年上升趋势[1]。男性不育症病因复杂，既往对其研究主要集中于遗传因素、睾丸因素、精索静脉曲张和生殖道感染等方面[2]，临床上对男性不育症的筛查亦局限于精液常规检测。事实上，精液常规虽可大体反映男性精子质量，但由于精液本身易受局部温度、禁欲时间、个人身心状况、取精环境等诸多外界因素干扰，以及受检验人员的主观操作性影响，导致其不能对精子质量和男性生育能力做出准确评价。

随着对男性不育症的深入探索，近年来，精子DFI作为一项新的评价精子功能的指标，已成为该病的研究热点。人类精子DNA主要指位于精子头部的核DNA，在发育成熟过程中，精子组蛋白向鱼精蛋白转化，使精子核浓缩并重新塑形，对于保护精子基因免受外界不利因素的影响、保持DNA完整性具有重要意义。研究显示，精子发育过程中，包括一系列生殖与内分泌疾病，如精索静脉曲张、睾丸肿瘤、生殖道炎症、下丘脑-垂体代谢紊乱性疾病等，都可导致精子DNA损伤；许多放疗、化疗、放射性物质对精子核DNA具有破坏性，影响精子DNA完整性；过量吸食烟酒，可诱导精液中活性氧类物质(ROS)增多，损伤精子DNA；人类辅助生殖技术、精液处理及冷冻技术的应用同样可造成精子的物理损伤，增加DNA损伤概率[3,4]。而精子发生过程中，DNA受到损伤将导致受精障碍、胚胎发育异常，降低临床受精率和妊娠率[5]。有鉴于此，精子DFI已成为临床评价精子功能的一个独立指标。关于男性精子DNA损伤的治疗，现代医学多明确病因，做针对性治疗。同时多采用口服抗氧化制剂，减少活性氧类物质(ROS)对精子的损害，常用药物如肉毒碱、辅酶Q10、维生素C、维生素E等[6]。

中医药在治疗不育男性精子DNA损伤方面前景广阔。前期研究表明，治疗不育症的多种中药具有良好的抗氧化作用。如梁培育等[7]研究表明黄芪注射液能显著提高弱精子症患者的精子活力，而且精子悬液中的MDA含量显著下降；杨欣等[8]通过实验证实菟丝子水提取物可提高精子悬液中SOD活力，降低MDA含量，进而干预ROS对精子膜的脂质过氧化反应，对精子膜结构和功能具有良好的保护作用。王祖龙对男性精子DNA损伤，从中医角度进行了辨证分型，即肾虚湿热证、肾阳不足证、脾肾两虚证、肾虚血瘀证、肝肾阴虚证，进而分别治以清热利湿补肾法、温补肾阳法、健脾补肾法、益肾通络法、滋补肝肾法，为临床治疗该病，提供了新的借鉴。临床已经证实，一些中药复合剂型对治疗精子DNA损伤具有较好的疗效[9-11]。

中和种子膏源于明·岳甫嘉《妙一斋医学正印种子编》所载中和种子丸[12]，原方主要用于治疗脾肾两虚型男性不育症，临床疗效显著。考虑该病治疗周期长，本项目采用膏方剂型，以方便携带和服用。方中以菟丝子、沙苑子、覆盆子、炒山药、炒杜仲温补肾气，熟地黄、山萸肉、枸杞子、麦冬、五味子滋养肾精，车前子泻肾浊，人参、白茯苓健脾益气，当归、川牛膝养血祛瘀，炙远志、柏子仁安神定志。纵观全方，打破了单纯补肾法治疗男性不育症的思维，从心、脾、肾三脏入手，重在健脾补肾。全方温而不燥，滋而不腻，采用膏方剂型，以蜂蜜为敷料，口感容易被接受，方便携带和服用。本研究表明，男性不育症患者经中和种子膏治疗后，其精子前向运动率显著提高，精子DFI明显降低。说明该方具有提高不育男性精子活力、保护精子DNA完整性的作用。然受一些条件限制，如患者病例数较少，以及缺少流式细胞仪等更为精确的检测设备，对于精子前向运动率与精子DFI之间的相关性，以及中和种子膏提高男性精液质量，减轻精子DNA损伤的作用机制有待进一步探索。