RhD阴性献血者鉴定结果分析

祝晓琴，邓永福

眉山市中心血站， 四川眉山 620010

Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统，Rh血型系统常见的抗原有D、C、c、E、e 5种，使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E和抗e 5种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，故一般只作D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。中国汉族人群中Rh阳性比例约为99.7%，Rh阴性比例0.2%～0.4%[1]。根据红细胞表面D抗原的数量和质量不同及抗原性不同，将D抗原分为5种：(1)正常D，常见的D抗原。(2)弱D，D抗原数量减少，质量无变化。(3)部分D(表位不完全型D)，D抗原数量基本正常，但是缺失正常D抗原上部分抗原表位(质量减少)。(4)Del表型(表位不完全型弱D)，D抗原数量减少，缺失部分D抗原决定簇(质量减少)。(5)增强D，D抗原数量大量增多，抗原性极大增加。弱D、部分D、Del表型由于抗原数量或质量减少，不能用常规血清学方法检出,需要通过间接抗人球蛋白试验(IAT)、吸收放散或基因检测方法证实其红细胞膜上D抗原的存在。如果献血者是弱D、部分D或Del表型，其血液输给Rh阴性受血者，可能刺激受血者产生抗D抗体，导致受血者再次输入弱D、部分D或Del表型血液时发生溶血性输血反应。为了解本中心血站确认为RhD阴性的献血者中，弱D、部分D、Del表型的比例，研究者作了进一步的鉴定和分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2003-2009年本中心血站确认为RhD阴性，愿意接受进一步鉴定的献血者50例作为研究对象。

1.2主要试剂 RhD(IgM)血型定型试剂(上海血液生物医药有限责任公司)、RhD (IgG)血型定型试剂(北京金豪制药股份有限公司)、抗D(IgM+IgG)血型定型试剂(英国Millipore公司)、抗人球蛋白试剂(IgG)检测试剂(上海血液生物医药有限责任公司)。

1.3方法

1.3.1检测方法 RhD血型常规检测采用平板法，将检测为RhD阴性的标本进行确认，确认采用试管法，用2种不同厂家生产的抗D试剂进行IAT，判读并记录实验结果，所有操作严格按照试剂使用说明书进行。

1.3.2进一步鉴定方法 在中国医学科学院北京协和医学院输血研究所进行鉴定。(1)血清学试验：使用抗D(IgM+IgG)试剂进行盐水法筛选RhD阴性标本；筛选为阴性的标本采用IAT进行弱D或部分D鉴定；IAT试验采用人源性血清(中国医学科学院输血研究所、上海血液生物医药有限责任公司)和混合单克隆抗D[Rh1，批号:430000(DIAGAST)]；再使用人源抗D血清对剩余标本进行吸收放散试验以检测Del表型。初筛阴性标本采用血清学常规试管法做RhD表型鉴定，抗E(20090105)、抗e(00700001)、抗C(20070113)和抗c(00800002)(上海血液生物医药有限责任公司)。(2)基因组DNA制备：采用TIANGEN基因组DNA提取试剂盒,从乙二胺四乙酸抗凝的外周全血中制备基因组DNA,严格按照试剂说明书进行操作。(3)RhD的序列特异引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)法基因分型：对IAT确定为弱D或部分D的阳性标本进行RhD 10个外显子的检测,采用10对针对RhD基因外显子及侧翼序列的PCR-SSP引物,特异扩增RhD的10个外显子(测序PCR)，方法参照文献[2]。

2 结 果

50例RhD阴性献血者标本经IAT、吸收放散试验和RhD基因分型检测，检测结果显示，50例RhD阴性献血者中检出弱D、Del表型共17例，占34%。其中弱D 4例，占8%；Del表型13例，占26%。RhD阴性33例，占66%，其中Exon1-10全缺失29例，Exon3-9全缺失4例。见表1。

表1 50例RhD阴性献血者鉴定结果

3 讨 论

《全国临床检验操作规程》中Rh血型鉴定，当献血者初筛检测为阴性时需进一步进行Rh阴性确认试验，以排除弱D，但是如果检测的是患者标本，则可不必再确认。弱D型鉴定采用的是试管法IAT，Del需通过更加敏感的吸收放散技术才能检测到。中国人RhD阴性群体中10%～30%的个体是Del表型，这类表型的个体在受到D抗原免疫刺激时，几乎不产生应答[3]。在临床输血中弱D型个体输注RhD阳性红细胞后可产生抗D抗体，所以受血者(患者)为弱D型，作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者(献血者)为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者[1]。

对血站已确认为RhD阴性的人群中，检出弱D、部分D、Del表型早已有报道，只是检出比例各方报道不同[3]。本研究50例确认试验为RhD阴性的血液中检出弱D、部分D比例、Del表型比例低于海南地区[4]，高于湖北[5]、云南[6]、安徽地区[7]。

弱D、部分D、Del表型的检测在临床输血中具有比较重要的意义，弱D、部分D、Del表型只是红细胞表面D抗原数量或质量减少，但是红细胞表面仍然存在D抗原，仍具有一定的免疫原性。当Rh阴性受血者输注弱D、部分D、Del表型血液后，可能会刺激受血者产生抗D抗体；受血者再次输注RhD阳性红细胞、弱D、部分D、Del表型血液时，可能会发生溶血性输血反应，或者导致女性受血者怀孕时流产、新生儿溶血病等，给患者带来输血安全隐患[8]。

《血站技术操作规程》(2019版)规定，RhD阴性的结果应经过确认试验，但并没有指出确认试验应采用的方法[9]。由于血站检出技术和方法等原因，经过RhD阴性确认实验，仍然有一定比例的弱D、部分D、Del表型血液无法检出。对于一般的中心血站，使用抗C分型和吸收放散试验鉴定可操作性比较强，但还需要相关数据研究和技术规范的支持。本鉴定结果分析提示，由于试剂、操作、方法等原因，血站提供给临床的RhD阴性血液中仍有弱D、部分D和Del。