UV法建立槲寄生多糖口服液含量测定方法

郑云天 刘格格 马嘉悦 张金霜 吴垚 陈冰

目的：提取长白山槲寄生植物中多糖成分，制备槲寄生多糖口服液，并建立UV法对槲寄生口服液多糖的含量测定方法。

方法：采用水提法提取槲寄生多糖成分；通过方法学考察建立UV法测定槲寄生多糖口服液中的多糖含量方法，并对样品进行含量测定。

结果：在0.001 mg/mL～0.007 mg/mL范围内呈良好线性关系，精密度、重现性、重复性及加样回收率实验RSD均小于2%。三批样品含量测定平均值为0.0088 mg/mL，RSD值为1.03%。

结论：所建立方法灵敏度高，稳定性好，可用于槲寄生多糖口服液质量控制方法。槲寄生[Viscum coloratum （Komar.） Nakai]属于桑寄生科槲寄生属植物，具有多种活性成分。其中，槲寄生多糖成分具有调节免疫、抗氧化作用、抗肿瘤功能以及降低血脂和血糖等作用，对人体内自由基清除作用而减小损伤胃肠道黏膜，有治疗胃炎、肠炎的作用。将槲寄生多糖成分提取并制备成口服液，扩大其应用范围。

1. 材料与设备

1.1 材料

槲寄生（采自吉林省永吉县，寄主为杨树）、葡萄糖标准品（2016091067，天津市致远化学试剂有限公司）、蔗糖、亚硫酸氢钠、苯甲酸钠、95%乙醇、三氯乙酸（TCA）、苯酚、浓硫酸。以上辅料为药用级别，试剂为分析纯，均由吉林农业科技学院实验室提供。

1.2 设备

紫外可见分光光度计（UV-5100，上海元析仪器有限公司）；数显恒温电热套（HDM.500C，金坛市科析仪器有限公司）；中药粉碎机（LG-08A，浙江瑞安市百信药机器械厂）；标准筛（浙江上虞市宏兴仪器厂）。

2. 方法与结果

2.1 长白山槲寄生多糖的提取

称取适量长白山槲寄生粉末在70℃下干燥12h，粉碎，过40目筛，称取过筛后的槲寄生粉末10g，料液比按1∶26，在95℃水温下提取3h，得到槲寄生多糖提取液，用4层纱布过滤去除残渣，将提取液浓缩后，加入95%乙醇后置冰箱冷藏室，次日除去乙醇，沉淀物用纯水将溶解，向其中加入50% TCA，调浓度为10%，离心（4000r/ min）去除沉淀物，得槲寄生脱蛋白多糖水提取液。

2.2 长白山槲寄生口服液制备

取槲寄生脱蛋白多糖水提取液200ml，定容至1000ml。取出稀释液100ml，加入蔗糖3mg，亚硫酸氢钠10mg，苯甲酸钠40mg，溶解后灌封，灭菌，得到长白山槲寄生口服液。

2.3 UV法对长白山槲寄生口服液的含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称定无水葡萄糖对照品10mg，配制成浓度为0.1mg/ml的溶液。

2.3.2 苯酚溶液的配置

取苯酚放于烧杯中置于60℃水浴中溶解，用蒸馏水定容摇匀，配制成浓度为6%苯酚溶液，于棕色瓶中保存，备用。

2.3.3 标准曲线的绘制

如图1所示，精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分别加水至2.0 ml，摇匀后精密加入1.0ml 6%苯酚，摇匀后精密加入5.0ml浓硫酸，放冷至室温后，沸水浴显色15min，以蒸馏水按相同方法操作为空白。于波长490nm处测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，多糖质量浓度（mg/mL）为横坐标，计算标准曲线方程，得Y=91.857X+0.0891，R2=0.9996。

2.3.4 精密度试验

取同一浓度对照品溶液，依法重复测定6次，计算RSD值。计算得RSD为0.62%（n=6），表明仪器的精密度良好。

2.3.5 重现性试验

取同一批样品6份，按上述方法配制供试品溶液，依法测定，得RSD为1.86%（n=6），表明此方法重现性良好。

2.3.6 稳定性试验

在上述条件下，取供试品溶液，室温放置，12h内，每2h依法测定一次，得RSD为0.82%（n=6）。表明此方法稳定性良好。

2.3.7 加样回收率试验

取样品，每3份一组，共3組，分别按标示量的80%、100%、120%比例精密加入对照品，并按照上述方法配制供试品溶液，依法测定，得RSD为1.86%。表明此法准确度高。

2.4 样品含量测定

按所建立方法进行三批样品含量测定，平均含量为0.0088 mg/ml，得RSD为1.03%（n=9）。

3. 讨论

本文首先进行了长白山槲寄生多糖成分的提取及纯化，并采用溶解法制备口服液。通过UV法进行方法学考察，建立了长白山槲寄生口服液的含量测定方法。从结果可以看出，方法学考察各项指标RSD均小于2%，三批样品平均含量为0.0088mg/mL，RSD=1.03%（n=9），均符合2015版《中国药典》的相关规定，表明此方法灵敏度高、结果准确，可以作为长白山槲寄生口服液质量检测方法。

作者简介：

郑云天（1999-），男，制药工程专业学生

陈冰（1977-），女，讲师，硕士，研究方向：药学

基金项目：

吉林农业科技学院大学生创新项目（吉农院合字[2019]第 027 号）