YAP/TAZ在结肠癌中的临床研究

黄 欢，揭志刚，胡 饶

（1.南昌大学医学院研究生部，江西 南昌 330006；2.南昌大学第一附属医院，江西 南昌 330006；3.联勤保障部队908医院，江西 南昌 330006）

结肠癌是一种常见的恶性肿瘤，近10余年来结肠癌发病率和死亡率持续升高，已位居全世界恶性肿瘤第三位[1]。随着医疗技术的发展，结肠癌的诊疗虽然取得了一定进步，但是临床表明，癌细胞的增殖、侵袭转移仍是影响患者生存率的重要因素。

目前国内外研究证实YAP蛋白在胃癌及肝癌组织中呈高表达，TAZ蛋白在乳腺癌、肺癌及胃癌组织中呈高表达[2]，证明YAP/TAZ蛋白对胃癌、肺癌、乳腺癌以及肝癌的发生、发展呈促进作用。本次针对结肠癌的研究不但检测了YAP/TAZ蛋白的表达，以证明其对结肠癌发生、发展呈促进作用，还检测了癌症干细胞中的CD44/CD24蛋白以及基质金属蛋白酶家族中的MMP9/MMP2蛋白的表达，初步探讨其作用机制，为结肠癌的临床治疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年1月～2019年12月联勤保障部队908医院收治的30例行结肠癌根治术患者的病理组织标本，包括癌组织及癌旁组织（距离癌组织边缘＞2 CM，HE 染色法未见癌细胞），免疫组织化学技术检测病理标本中的YAP/TAZ，CD44/CD24、MMP9/MMP2蛋白的表达情况，收集结肠癌组织和癌旁组织中各蛋白的表达数据，并做统计学分析。

1.2 研究步骤

1.2.1 石蜡包埋

基本步骤包括：脱水、透明、浸蜡、包埋。

1.2.2 切片

病理组织经石蜡包埋后，视其大小，切除边缘多余的部分，再开始切片。切片的厚度一般在4～6 μm，具体根据实验要求而定。将载玻片进行编号，置入60℃恒温箱内烤15～30分钟，在30～40℃环境下放置过夜。

1.2.3 免疫组化染色

包括脱蜡、抗原修复、阻断内源性过氧化物酶、正常血清封闭、孵育一抗、孵育二抗、DAB 显色、复染细胞核、脱水透明封片等步骤。

在光学显微镜下进行观察，并拍照。

1.3 统计学方法

使用软件SPSS 20.0进行数据分析，使用卡方检验，对比得出P值＜0.05具有统计学意义。

2 结 果（见表1）

表1 各蛋白表达水平（%）

3 讨 论

Hippo通路最早发现于黑腹果蝇，起初认为只在器官的形成发育、细胞更新等正常的生理过程中发挥作用，但根据国内外越来越多的研究证据表明，YAP和TAZ蛋白在哺乳动物中属于同源蛋白，两者结构有很大的相似性，同为Hippo信号通路下游效应分子，除了在上述的正常生理过程中发挥作用以外，在恶性肿瘤的发生、发展的过程中同样扮演着重要的角色。研究发现Hippo通路作为调控细胞更新的关键枢纽，其核心是一个激酶级联反应，在正常生理过程中，Hippo通路处于激活状态时，会磷酸化YAP/TAZ蛋白，从而保持细胞的自我更新与凋亡之间的平衡，当Hippo通路失活时，去磷酸化的YAP/TAZ蛋白会打破这个平衡，促进细胞的过度增殖及抗凋亡，从而导致恶性肿瘤的发生[4],目前已知的，YAP/TAZ蛋白在乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌等恶性肿瘤中呈过表达[5], 促进及加强了癌细胞的增殖、侵袭、转移等能力[5]。

近些年来，癌症干细胞学说是国内外研究的热点。癌症干细胞（CSC）与正常干细胞有着相同的特点，可以实现自我更新、进行不对称细胞分化，从而可以诱导癌细胞抗凋亡、加速分化增殖等，目前已证实癌症干细胞能出现在许多类型的癌症[6]，其中也包括结肠癌，其最常见的标志物是CD44、CD24[7]。

基质金属蛋白酶家族是一个大家族，因其需要通过钙、锌等金属离子的辅助才能发挥作用而得名，MMPs家族成员的结构相似，都具有很强的细胞外基质、基底膜破坏功能[8]，可以帮助癌症细胞突破对正常细胞进行侵袭的组织学屏障，促进恶性肿瘤的发生、发展[9]。MMP9/MMP2作为家族中的重要两位成员，根据目前国内外相关研究表明MMP9/MMP2蛋白的表达对多数恶性肿瘤的发生、发展呈促进作用[10]。

综上所述，Hippo 信号通路下YAP/TAZ蛋白在结肠癌的发生、发展过程中起着明显的促进作用，其作用机制可能是通过调控癌症干细胞中的CD44/CD24蛋白及基质金属蛋白酶家族中的MMP9/MMP2 蛋白的表达来实现的。