小剂量阿司匹林对子痫前期高危孕妇预防作用的分子机制

孙红霞，蔡娱飞，马 哲，袁 捷，张立梅，杨 贺，马奎丽，沈营营

(1.北华大学药学院，吉林 吉林 132013；2.北华大学附属医院，吉林 吉林 132011)

子痫严重威胁孕妇和胎儿的健康，妊娠期高血压疾病(简称妊高症，HDP)是孕妇最常见的并发症之一.2015年统计表明：HDP在我国发病率为9%～10%，其中20%左右的HDP可发展为子痫，占妊娠所致死亡的10%～16%，是导致产妇死亡的主要原因[1].子痫发病后治疗困难，唯一有效的方法就是终止妊娠，因此，早期筛查干预、预防子痫发生一直是产科学致力解决的重点，因此，本研究针对具有PE前期症状的孕妇，通过LDA干预探讨可能的干预机制，为其临床预防PE发生提供依据.同时采用Western blot技术检测两组PE患者胎盘组织中TRX、NF-κB、TXA-2蛋白的表达情况，以探讨LDA对PE预防作用可能的分子机制.

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年10月—2018年12月在北华大学附属医院收治的可能发展为PE的具有高危因素的患者112例，按照随机分组方法将患者分为两组，研究组54例，对照组58例.患者就诊时起始孕周16～22 周，单胎，宫内筛查胎儿结构正常.可能发展成PE的高危因素孕妇最少满足以下1项条件：既往慢性高血压病史；或既往无高血压和肾脏病病史，但本次妊娠20周前血压偏高，收缩压(SBP)>140 mmHg或(和)舒张压(DBP)>90 mmHg，尿蛋白(-)；过往有妊娠PE史.将两组患者一般情况进行比较，差异无统计学意义(P>0.05).见表1.所有入选患者均知情且签署知情同意书，该研究经医院医学伦理委员会审核批准.

表1 两组患者一般情况

1.2 方 法

临床采用随机、开放、对照的研究方法，两组患者均定期、正规产检.

观察组：从孕16～22周开始口服LDA(拜阿司匹林)，75 mg/d，36孕周停药.对照组：不服用LDA，进行孕期指导，合理饮食，进行常规围产期保健，合理安排休息并适当锻炼.一旦发生PE，及时按常规治疗.两组患者定时监测血压(BP)、体质量，同时检测血尿常规、肝肾功能、凝血功能等，监测宫高和腹围增长情况.密切观察孕期情况，并做好胎儿宫内监测，追踪随访两组孕妇分娩情况及新生儿情况.

1.3 观察指标

经过监测和临床观察，收集两组患者PE发生孕周、分娩的孕周、分娩的方式、新生儿出生时体质量及母儿并发症(包括FGR、FD、PA、OGH、心肝肾功能异常、CW、血小板减少及产后出血)等指标，探讨两组患者的临床结局.收集两组患者空腹静脉血3～5 mL 用于检测外周血中SOD活性及MDA、ROS水平，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测对照组和研究组外周血中的ox-LDL、GSH-Px表达水平，实验严格按照试剂盒说明书操作要求进行.Western blot技术检测两组患者胎盘组织中TRX、NF-κB、COX-2蛋白表达水平，同时将结果进行比较.

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 两组患者妊娠PE发病及分娩情况

研究组PE发生率(22.2%)显著低于对照组(62.1%)，差异具有统计学意义(P<0.05)；研究组的分娩孕周及新生儿出生体质量与对照组比较，差异具有统计学意义(P<0.05).见表2.

表2 两组患者PE发生率、发病孕周、分娩孕周和新生儿情况

2.2 两组PE患者妊娠结局

通过对两组分娩方式结果比较发现，在剖宫产、顺产及引产方面，两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；在围生儿结局方面，研究组早产率(14.8%)显著低于对照组(50.0%)，研究组足月产率(51.9%)高于对照组(24.1%)，二者差异具有统计学意义(P<0.05).见表3.

表3 两组患者妊娠结局

2.3 LDA对两组患者氧化还原水平的影响

研究结果显示：对照组SOD、GSH-Px活性下降，与研究组比较差异具有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01)；对照组MDA水平升高，ROS、ox-LDL含量增加，与研究组比较差异具有统计学意义(P<0.05).见表4.

表4 LDA对两组患者血液中SOD、GSH-Px活性、ROS水平、Ox-LDL和MDA含量的影响

2.4 LDA对胎盘组织中TRX、NF-κB和TXA-2蛋白表达的影响

研究结果显示：研究组经LDA干预后，TRX蛋白表达明显提高，与对照组比较，NF-κB和TXA-2蛋白表达明显减少(P<0.01).见图1.

3 讨 论

PE是妊高症最具代表性的疾病，PE发作时全身的小血管持续收缩，导致胎盘出现缺血缺氧等病理改变，并激活氧化应激反应，引起胎盘损伤乃至坏死.机体内正常的氧化还原状态对维持细胞正常生理功能至关重要[2],正常状态下，孕妇体内氧化及抗氧化作用之间保持一种动态的平衡，这种平衡在PE发生时被打乱，产生氧化应激反应，同时PE患者还存在着抗氧化能力下降或不足，抗氧化剂减少或活性下降，抗氧化酶如SOD、GSH-Px、TRX等活性降低.

研究[3]发现：硫氧还蛋白(TRX)系统与PE发生密切相关.TRX系统是机体重要的抗氧化系统，硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1，TRX-1)是调节氧化还原的关键蛋白，在胎盘细胞滋养层、蜕膜和基质细胞中均有TRX-1表达，TRX清除体内过氧化物的作用十分强大，能够迅速清除机体产生的活性氧(reactive oxygen species，ROS)，保护细胞免受肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及H2O2等的损伤，促进细胞增殖和抑制细胞凋亡.TRX-1是诸多底物蛋白中二硫键(S-S)的氧化还原酶，其能结合底物蛋白，并通过巯基/二硫键的氧化还原转换进而调节底物蛋白的生物学活性[4].许多刺激因素如紫外线照射、炎性因子、病毒感染等均能导致氧化应激反应，诱导TRX-1表达，TRX-1一方面通过与ROS反应清除掉ROS，另一方面TRX-1在炎症调控、细胞增殖反应、细胞存活及凋亡进程中均起关键作用[5].TRX活性下降会引起脂质过氧化物的过多产生，并加剧全身炎症反应[6].研究[7]显示：体内局部的缺血再灌注损伤可诱导TRX的表达增加，转基因大鼠中TRX的过表达可明显减少局部的脑组织损伤.这些现象表明：生理状态下，TRX能保护细胞，对抗氧化应激反应引起的损伤，并做出相应调节，以适应外界环境.

核转录因子κB(NF-κB)是一种对氧化还原十分敏感的多亚基转录因子，NF-κB可被生物或化学的还原剂激活[8]，并迅速激活相关基因的表达，这些基因常参与炎症反应、免疫反应及急性炎症反应.只有在NF-κB的p50/p65二聚体p65亚单位中出现还原性半胱氨酸时，NF-κB的DNA活性才能表现出来[9].NF-κB是一个由p50和p65亚基组成的异二聚体，在细胞质中抑制蛋白IκB与该异二聚体相结合，使NF-κB失去活性.研究[10]发现：TRX在氧化状态时不能激活NF-κB，只有还原状态的TRX在还原系统(Trx +NADPH +TrxR)中能够降解IκB，并激活NF-κB.在人体中，还发现了过表达的TRX可激活NF-κB，无氧化还原活性的且结构域呈阴性的人体TRX无法激活NF-κB，活化后的NF-κB可以激活下游的靶分子(如COX-2)，进一步启动炎症反应，引起氧化还原水平改变，导致TXA2增多.TXA2具有强烈的驱使血小板活化聚集、收缩平滑肌、形成动脉粥样硬化、形成新血管、启动过敏反应及免疫调节等作用[11].研究[12]发现：高表达血栓素A2合成酶(TXS)的滋养层细胞能产生催化作用，导致更多的TXA2产物产生，这可能是PE胎盘血管收缩导致发生氧化应激反应的重要原因.

TRX和TRX受体(TR)存在于胎盘的滋养细胞、蜕膜细胞和绒毛的基质细胞中，细胞质和线粒体中也存在，TRX有保护胎盘免受氧化应激损伤的功能.本研究结果表明：在没有经过LDA处理的对照组PE，ROS含量升高，MDA水平升高，SOD、GSH-Px活性下降，ox-LDL含量升高，与经过LDA预保护的研究组比较有显著性差异(P<0.05).两组胎盘组织中蛋白水平比较显示：TRX在对照组胎盘组织中的表达明显减少，和经过LDA预保护的研究组比较差异显著(P<0.001)，说明TRX系统不但能直接清除ROS，而且还能将亚硝基硫醇分解，释放出分解产物一氧化氮(NO)和谷胱甘肽(GSH)，TRX的减少可导致过氧化产物的产生增多，过氧化产物进一步氧化产生毒性很强的氧化亚硝酸[9].一方面，TRX生成不足使细胞的抗氧化活性下降，使得过氧化物产生增多；另一方面，PE患者TRX在胎盘的表达减少也会促进细胞凋亡，加剧PE发生[13].有研究[14]发现子痫前期和(或)胎儿生长受限(FGR)的孕妇中，TRX蛋白和mRNATRX表达比正常孕妇低，在维持妊娠过程中TRX系统发挥重要作用，TRX基因敲除可导致自发性流产.本研究结果显示：PE孕妇胎盘TRX的含量及TR活性比同孕周正常孕妇低，而脂质过氧化物含量升高.由上述结果可以推测，TRX系统在子痫前期的发病中具有重要作用.

综上所述，PE的发生导致孕妇机体氧化还原水平平衡被打乱，抗氧化能力(SOD、GSH-Px活性)下降，氧化产物增多(ROS升高)，脂质过氧化产物出现堆积(ox-LDL、MDA水平升高)，TRX对氧化产物清除能力下降，由此激活下游的炎症信号分子NF-κB，引起TXA-2表达增多，导致炎症反应，加剧PE症状.LDA可能通过提高TRX活性恢复氧化还原平衡，提高机体抗氧化反应能力，阻滞NF-κB信号分子，以减轻或消除高危孕妇PE的发生.