丹皮炭饮片质量标准研究*

苏 静，胡云飞，刘苏情

(1 国家中药材产品质量监督检验中心，安徽 亳州 236800；2 亳州学院，安徽 亳州 236800；3 亳州市产品质量监督检验所，安徽 亳州 236800)

丹皮炭为毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炮制加工品[1]。选择栽培3～5年的牡丹，于秋季或春初采挖，洗净泥土，除去细根和泥沙，剥取根皮，晒干或刮去粗皮，除去木心，晒干。前者习称连丹皮，后者习称刮丹皮。取净牡丹皮片(连丹皮、刮丹皮均可)，置热锅内，用中火炒至外部焦黑色，内部黄褐色，喷淋清水少许，灭尽火星，取出，及时摊晾，凉透。牡丹皮在《中国药典》2015年版内收载，而其炮制品丹皮炭在《中国药典》2015年版未收载[2]。目前对于丹皮炭质量标准研究报道多不全面，且专属性不强[3-5]。本文拟通过性状观察法、显微观察法、TLC法、UPLC法对丹皮炭的鉴别、浸出物及含量测定等进行分析，进而制定方法可行、结果可靠的丹皮炭饮片质量标准。

1 材料和试剂

1.1 仪 器

XP205电子天平，瑞士mettler-toledo公司；S180H型超声波清洗机，德国Elma公司；FD115型热风循环烘箱，德国Binder公司；SX2-4-10G型箱式电阻炉，上海跃进医疗器械有限公司；DM750显微镜，德国Leica公司；Linomat 5半自动点样仪，瑞士CAMAG公司；TLC Visualizer薄层色谱数码成像系统，瑞士CAMAG公司。

1.2 试 药

表1 丹皮炭样品来源

分别从成都荷花池、安徽亳州、阜阳、铜陵等地收集共10批丹皮炭中药饮片，均经安徽中医药大学周建理教授鉴定为毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炒制加工品，见表1。丹皮酚对照品(批号110708-201908，中国食品药品检定研究院，纯度99.8%)，丙酮(色谱纯)，水(超纯水)，所用其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 性 状

本品为圆形或半圆形的薄片，表面黑褐色，内部褐色。质坚脆。气芳香，味苦、涩。如图1所示。

图1 丹皮炭饮片性状图

2.2 显微鉴别

本品粉末深黑色。淀粉粒数量众多，单粒类圆形或多角形，直径3～16 μm，脐点点状、裂缝状或飞鸟状；复粒由2～6分粒组成。可见草酸钙簇晶，直径9～45 μm。有时含晶细胞连接，簇晶排列成行，或一个细胞含数个簇晶。结果见图2。

图2 丹皮炭横切面显微图

2.3 TLC鉴别-丹皮酚法

取丹皮酚对照品(批号110708-200506，中国食品药品检定研究院，纯度99.8%)，加丙酮制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液S。展开槽：5 cm×20 cm×10 cm，薄层板：硅胶G板(TLC Silica gel 60)(规格：20 cm×10 cm来源：Merck批号：HX68412026)展开剂：环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)点样量10 μL，展距：8.6 cm，检视方式：取出，晾干，喷以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

图3 丹皮炭薄层图

2.4 浸出物测定

按照醇溶性浸出物测定法(中国药典2015年版通则2201)项下的热浸法测定。结果：10批样品的浸出物为10.4%～14.7%。

表2 丹皮炭浸出物结果

2.5 含量测定

2.5.1 色谱条件

色谱柱：UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm，美国Waters公司)；流动相为0.1%醋酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0～10 min，5%～30% B；10～12 min，30%～50% B；12.1～15.0 min，30% B；15.0～15.8 min，5% B)，流速0.4 mL/min，检测波长254 nm，进样量2 μL，柱温30 ℃。

2.5.2 对照品溶液的制备

精密称取丹皮酚约2.5 mg，置同一10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.5.3 供试品溶液的制备

精密称取取1.0 g粉末(过四号筛)，精密加甲醇50 mL，温度60 ℃下超声处理(功率400 W，频率33 kHz)30 min，放冷，补重，过滤，续滤液即得。

2.5.4 线性方程绘制

精密量取混合对照品溶液1、2、3、4、5 mL置50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。各取2 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。丹皮酚回归方程为Y=41.015X-14.234，r=0.997。结果：丹皮酚在浓度5～25 μg/mL范围围内线性关系良好。

2.5.5 精密度实验

取标样(浓度约为20 μg/mL)2 μL重复进样，计算峰面积RSD为0.6%，结果表明精密度良好。

2.5.6 稳定性情况试验

取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、18 h进样，考察其峰面积RSD为1.1%，表明供试品溶液在18 h内稳定。

2.5.7 重复性实验

取供试品溶液，制备6份供试品溶液，分别测定含量结果，其RSD为1.7%，表明该方法重复性良好。

2.5.8 加标回收率考察

精密称取已知含量样品6份，每份0.5 g。分别加入丹皮酚对照品适量，制备检测。丹皮酚平均回收率为96.1%，RSD为1.71%。

2.5.9 含量测定结果

表3 丹皮炭含量测定结果

图4 HPLC图谱

3 结 论

中药疗效取决于其化学成分(群)的特征，中药质量依赖于其质量标准的科学性[6-9]。通过对10批丹皮炭的质量评价研究，初步拟定，浸出物不得少于9.0%。对10批样品均作了粉末显微特征研究，本品粉末深黑色。淀粉粒数量众多，单粒类圆形或多角形，直径3～16 μm，脐点点状、裂缝状或飞鸟状；复粒由2～6分粒组成。可见草酸钙簇晶，直径9～45 μm。有时含晶细胞连接，簇晶排列成行，或一个细胞含数个簇晶。从而标准中把粉末的显微特征作为主要鉴别点。

TLC条件选择在环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)，点样量10 μL，喷以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热的条件下，样品分离度高，斑点清晰。

HPLC实验探讨，提取条件考察了溶剂、温度等影响因素，确定了提取条件以及色谱分离条件，初步拟定丹皮酚不得少于0.06%。但由于不同样品随着炮制程度及样品来源的不同。加之丹皮炭炮制后相较于牡丹皮药性已发生显著变化，更加偏于止血，因而是否作为质控标准值得进一步探索，但为丹皮炭的质量评价提供了依据[10-11]。

本次研究丹皮炭饮片质量评价包括性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、浸出物及丹皮酚的含量测定等内容，建立方法简单、可行，重复性好，可使用于控制丹皮炭饮片质量。