动物尿液中克伦特罗残留酶联免疫筛选疑似阳性样品与LCMS检测结果的比较

江雪强

（深圳市农产品质量安全检验检测中心，广东深圳 518118）

1 材料与方法

1.1 实验材料

某品牌克伦特罗检测试剂盒（附相关检测说明书）

Waters，Xevo TQ-S三重四级杆串联超高效液相色谱质谱联用仪、固相萃取装置、Oasis® MCX 6cc（150mg）、eppendorf高速冷冻离心机5804R、美国Organomation Associates氮吹仪、酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 试剂盒方法。加50μL标准品或样品液到相应的微孔中，然后各加50μL酶结合物工作液和抗体工作液到微孔中，用盖板膜盖好，26℃下避光反应30分钟；将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤4～5次，吸水纸拍干；各加50uL显色剂A 和显色剂B 微孔中，混匀，在26℃下避光反应15分钟；加入50μL终止液。最后450nm波长下酶标仪读取OD值，计算样品浓度。

表1 尿样克伦特罗检测结果

1.2.2 LC-MS法。取5mL尿液至于50mL离心管中，加入克伦特罗D9内标物，用5mol/LNaOH调节PH值至9～10，加提取液（乙酸乙酯：异丙醇=6：4）10mL，收集上清液。重复提取一次，合并上清液。氮吹后过残留物用0.2%甲酸水溶解，经过MCX（活化后）柱子后，氮吹干，残留物用0.2%甲酸水溶解，经滤膜过滤后用LCMS进行检测。

2 检测结果

2.1 两种方法检测结果详见表1

阳性结果判断表示为“+”，阴性结果判断表示为“-”

2.2 检测结果谱图

样品中克伦特罗标样谱图

3 分析与讨论

实验的48份样本均为经ELISA筛选后判定为疑似阳性动物尿液样品，再进行LC-MS方法处理后进行检测的。ELISA为半定量检测与LC-MS定量检测结果存在一定的差异性，但筛选定性判断结果与LC-MS结果符合率为96%，因此在使用ELISA筛选出尿液样品出现疑似阳性结果时，检测结果是可信任的。

ELISA检测试剂盒灵敏度可达0.3ng/mL甚至更高，检测条件要求较低，费用少，前处理操作简单，实验时间短（一般为1.5h），且特异性强，与检测步骤繁杂、检测时间长的LC-MS定量检测结果的符合率高达96%，能够在较短的时间内为监督执法提供判断依据。

样品中克伦特罗内标物谱图

4 结束语

ELISA检测结果与LC-MS检测结果符合度高，成本低，操作简便，效果明显，能够为执法判断提供依据，可作为基层瘦肉精筛查的选择。