桔梗不同炮制方法工艺优选及其镇咳作用比较*

★ 黄艺 钟凌云* 钟国跃 张寿文 祝婧 彭春艳 徐梦甜（江西中医药大学 南昌 330004）

桔梗为桔梗科植物桔梗［Platycodon grandiflorum（Jacq.）A.DC.］的干燥根，具有止咳、祛痰等功效。桔梗的炮制最早见于晋代，葛洪在《肘后备急方》中有记载“烧末”的炮制方法［1］，现如今临床用桔梗多以生品为主，常以复方煎剂或复方颗粒中的一味药物形式用于祛痰、镇咳的治疗［2］。但桔梗还有“姜汁浸，炒”“米泔水浸一宿，焙干用”“蜜拌、甑蒸”等7种加辅料的炮制方法［3-6］。

经研究桔梗在蜜制之后有增加其止咳、祛痰之功效，为了进一步探讨不同炮制品桔梗在镇咳功效上的差异，本文选择了生桔梗、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗等3个炮制品，以小鼠咳嗽次数、咳嗽潜伏期为指标，对其镇咳作用进行比较研究，为桔梗的临床应用奠定基础。

1 仪器和试药

1.1 仪器 戴安U-3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司），PHS-3E 型精密pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司），PHS-3E粉碎机（红景天工贸粉碎机），电热套（北京科伟永兴仪器有限公司MH-1000型科伟牌调温型电热套），加热炉（天津天泰DK-98-11型电子万用炉），抽滤机（巩义市子华仪器有限责任公司SHZ-D（Ⅲ）型循环水氏真空泵），402AI 型超声雾化器（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）。

1.2 试剂与材料 桔梗（采购于内蒙古赤峰，经江西中医药大学张寿文教授鉴定为桔梗科植物桔梗的干燥根），洋槐蜜（江西汪氏蜜蜂园有限公司，2017年3月27日产），枸橼酸喷托维林片（咳必清，上海全宇生物科技内乡制药有限公司，批号130304），浓氨水（沈阳沈一精细化学品有限公司，批号：20090625）。

2 桔梗不同炮制方法工艺优选

2.1 生桔梗饮片炮制工艺优选 取桔梗原药材适量，选择润制时间、饮片厚度、干燥温度和干燥时间作为考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量为考察指标，采用L18（37）表，各因素水平见下表1。

表1 生桔梗饮片炮制工艺优选正交设计表

选用SPSS 20.0软件处理数据，利用综合加权评分法对结果进行综合评价，桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量权重系数分别为0.5、0.25、0.25。实验结果见下表2，通过分析最终得出润制2d，55℃烘干6 h的3 mm饮片为最佳的炮制工艺。这为实验后期桔梗的蜜制研究提供参考基础。

2.2 蜜炙桔梗饮片炮制工艺优选 取桔梗原药材适量，选择每100 kg饮片加蜜量、炒制温度、炒制时间作为考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量为考察指标，采用L9（34）表，各因素水平见表3。

表2 生桔梗饮片炮制工艺优选实验结果

表3 蜜炙桔梗饮片炮制工艺优选正交设计表

选用SPSS 20.0软件处理数据，利用综合加权评分法对结果进行综合评价，桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量权重系数分别为0.5、0.25、0.25。实验结果见下表4，通过分析最终得出每100kg饮片加蜜量25 kg，160℃炒制17 min为最佳的炮制工艺。

表4 蜜炙桔梗饮片炮制工艺优选实验结果

2.3 蜜烘桔梗饮片炮制工艺优选 桔梗原药材适量，选择烘制时间、烘制温度、水蜜比作为考核因素，以桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量为考察指标，采用L9（34）表，各因素水平见下表5。

表5 蜜烘桔梗饮片炮制工艺优选正交设计表

选用SPSS 20.0软件处理数据，利用综合加权评分法对结果进行综合评价，桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量权重系数分别为0.5、0.25、0.25。实验结果见下表6，通过分析最终得出烘制时间2 h，烘制温度90℃，水密比1∶2.5为最佳的炮制工艺。

3 制备及给药

3.1 生桔梗饮片 将桔梗原药材润制1 d后，切制成3 mm厚片，以60℃干燥4 h，放凉备用。

3.2 蜜炙桔梗饮片 将炼蜜与热水按2.5∶1的比例混合，加入适量桔梗生饮片充分搅拌均匀，闷润30 min后，用160℃锅快速翻炒17 min出锅，放凉即可。每100 kg桔梗生饮片用炼蜜25 kg。

3.3 蜜烘桔梗饮片 将炼蜜与热水按2.5∶1的比例混合，加入适量桔梗生饮片充分搅拌均匀，闷润30 min放入预热至90℃烘箱内，烘制2 h取出，放凉即可。每100 kg桔梗生饮片用炼蜜25 kg。

3.4 蜜的水溶液 蜜称量，加入4倍水，混合均匀配制成0.25 g·mL-1，冷藏备用。

表6 蜜烘桔梗饮片炮制工艺优选实验结果

3.5 咳必清水溶液 取咳必清药片12.5 g，碾磨压碎至粉末状，置入50 mL定容瓶中，加水至刻度，配制成0.25 g·mL-1，冷藏备用。

3.6 给药药物 分别取定量生桔梗饮片、蜜炙桔梗饮片、蜜烘桔梗饮片，粉碎过3号筛，加入8倍量水，连续回流反复提取3次，每次2 h，合并滤液混合后浓缩至一定浓度，冷藏备用。

4 不同桔梗炮制品镇咳作用研究

按照桔梗不同炮制方法工艺优选项下优选出的工艺，对桔梗原药材进行炮制，制成适量生桔梗饮片、蜜炙桔梗饮片、蜜烘桔梗饮片。首先对桔梗饮片镇咳的最佳给药剂量进行优选，以该剂量为实验组灌胃单位，进行不同方法炮制桔梗的镇咳作用比较研究。

4.1 镇咳实验（浓氨水喷雾法） 于小鼠末次给药后1 h。使用超声雾化器，持续通入氨气15 s，立即关闭雾化器并记录小鼠2 min内咳嗽次数和咳嗽潜伏期时间。

4.2 不同给药剂量镇咳作用研究 将健康昆明种小鼠40只，SPF级，雌雄各半，体质量18～22 g。随机分为4组，每组雌雄各5只，分为：A生理盐水给药组、B桔梗饮片水提液给药高剂量组（1.6 mL/20 g）、C桔梗饮片水提液给药中剂量组（1.2 mL/20 g）、D桔梗饮片水提液给药低剂量组（0.8 mL/20 g），自由饮食饮水，连续给药3 d，于末次给药后1 h进行镇咳实验。实验结果如表7，根据咳嗽次数与潜伏时间进行对比优选出每20 g小鼠给药1.2 mL为最佳的给药剂量。

表7 不同剂量给药组镇咳作用比较（n=10）

4.3 不同方法炮制桔梗的镇咳作用研究 健康昆明种小鼠60只，SPF分级，雌雄各半，体质量18～22 g。随机分为6组，每组雌雄各5只。分为：A生理盐水给药组，B蜜的水溶液给药组，C生桔梗饮片水提液给药组，D蜜烘桔梗水提液给药组，E蜜炙桔梗水提液给药组，F阳性药（咳必清）给药组。自由饮食饮水。每20 g小鼠给药1.2 mL，连续给药5 d。于末次给药后1 h进行镇咳实验，实验结果如表8。

与空白组比较，阳性药物组、蜜水组、桔梗生饮片、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗组咳嗽次数均有显著性差异（P＜0.01）。与蜜烘桔梗组比较，空白组、蜜水组、桔梗生饮片、蜜炙桔梗饮片组有显著性差异。与空白组比较，阳性药物组、生桔梗、蜜烘桔梗、蜜炙桔梗饮片组均有延缓小鼠咳嗽潜伏期的功效。与蜜烘桔梗水提液组比较，空白组、蜜水组，小鼠咳嗽潜伏时间有显著性差异。

表8 不同炮制方法镇咳作用比较（n=10）

5 讨论与展望

我国中药发展历史源远流长，其炮制方法的产生与发展也由来已久，呈现出复杂多样性［7］。合理有效的中药炮制方法，直接影响药物的活性成分，合理对中药进行炮制，能够有效提升药物对疾病的治疗效果。

本实验首先对桔梗饮片不同炮制品的制备工艺进行了详细研究，采用正交试验法设计实验方案，考察干燥温度、干燥时间、饮片厚度、炒制温度等多个因素，分别对生桔梗饮片、蜜炙桔梗饮片、蜜烘桔梗饮片进行工艺优选；再对桔梗饮片镇咳的最佳给药剂量进行优选；最后使用优选后的工艺分别制备3种不同桔梗饮片炮制品，以优选出的最佳给药剂量为实验组灌胃单位进行药效学研究。结果最后表明桔梗具有明显镇咳作用，蜜烘桔梗效果最佳。

本实验首先对炮制工艺、给药剂量进行优化，再进行药效学实验，使实验结果更具说服力。最后建议临床用桔梗治疗咳嗽症状使用蜜烘桔梗，但究竟和哪些中药配伍使用能达到更好的镇咳祛痰功效，还有待进一步研究。