液质联用法测定水产品中磺胺类代谢物含量的不确定度评定

彭家杰，李鸿超，罗健民

(1 东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523002；2 东莞市水产学会，广东 东莞 523002)

磺胺类(Sulfonamides)药物为人工合成的抗菌药，用于临床已近50年，它具有抗菌谱较广、性质稳定、使用简便、生产时不耗用粮食等优点[1-3]，被广泛用于水产品等养殖生产中[4]。但是磺胺类药能引起多种不良反应，累及很多脏器系统，如血液和骨髓、皮肤、肾、肝、神经系统等。因此快速且准确地测定磺胺类药物在生物体内的含量，对于考察动物性食品中残留引起生态环境污染和人类健康危害的潜在威胁以及药物残留监测食品安全等方面具有重要意义[5]。

测量结果的准确性和可靠性是实验室检测最基本的标准之一，但是由于测量误差的存在，其测量结果只能得到一个在误差范围内的近似估计值，所以任何测量方法都必须引入不确定度，不确定度的评定是在国内外都是互相认可和通用的准则，在实验室的质量管理中起到了重要作用。本实验依据CNAS-GL06 《化学分析中不确定度的评估指南》[6]和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[7]规定的基本方法和程序，对液质法测定水产品中磺胺类残留量的不确定度进行分析评定，找出主要分量，从而提高检测质量。

1 概 述

1.1 目 标

通过对液质内标法测定水产品中SAs代谢物残留量的测量不确定度进行评定，找出其影响因素，提高测量的置信度和准确性。

1.2 测量仪器设备

Waters Xevo TQ-S micro液相色谱串联质谱仪，配备点喷雾离子源(ESI)，美国Waters公司；涡旋振荡器，德国IKA-MS3公司；平行蒸发仪，瑞士BuChi公司；Milli-Q型超纯水仪，美国Millipore公司；LXJ-IIB型离心机，上海安亭科学仪器厂；超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司；TE612-L分析天平，赛多利斯；BT125D型电子天平，赛多利斯。

1.3 样品前处理方法

参考农业部1077号公告-1-2008《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》进行。

2 结果与讨论

2.1 数学模型

根据测量方法建立样品中磺胺类类代谢物残留量的数学模型如下：

(1)

2.2 测量不确定度的来源及合成

试样中磺胺类药物残留量测量不确定度来源主要有以下几个方面：标准溶液(外标)的配制引入的不确定度；内标标准物质(内标)的配置引入的不确定度；测量重复性引入的不确定度；加标回收率引入的不确定度曲线校准引入不确定度；待测液体积定容引入的不确定度；样品称量引入的不确定度；液质联用仪校准引入的不确定度。

结合上面各种影响因素，其合成不确定度的计算公式为：

(2)

2.3 各项目不确定度分量计算

2.3.1 测量重复性引入的标准不确定度u1rel

本评定方法以SD为例，测量样品重复性引起的不确定度分量，属A类标准不确定度，以算术平均值的标准偏差表示。对未知浓度样品进行6次重复测量，平均值的标准偏差Sa(μg/kg)及u1rel见表1。

表1 测定结果及其相对标准不确定度(n=6)Table 1 Determination results and relative standard uncertainty (n=6)

2.3.2 曲线校准引入的标准不确定度u2rel

制备6个浓度梯度混合标准溶液c，每个浓度测量1次，以cis为横坐标，以Ais为纵坐标，用cisng/mL最小二乘法拟合，获得直线方程A=a+bc以及线性相关系数r，列于表2。

表2 SD标准曲线测定结果及不确定度计算Table 2 Fitting standard solution mass concentration-peak area by least square method

2.3.3 定容体积引入的标准不确定度u3rel

2.3.4 称量样品引入的标准不确定度u4rel

称量样品用百分之一天平，其计量检定证书给出的扩展不确定度U=0.05 g，k=2。样品称样量2 g(精确到0.01 g)，称量样品所用天平引入的相对标准不确定度为：

2.3.5 标准溶液(外标)配制引入的标准不确定度u5rel

2.3.5.1 标准物质(外标)纯度的标准不确定度u51rel

标准物质(外标)纯度的相对标准不确定度见表3。

表3 标准物质纯度的相对标准不确定度Table 3 Relative standard uncertainties of purity of reference materials

2.3.5.2 标准物质定容引入的不确定度u52rel

2.3.5.3 标准物质稀释引入的标准不确定度u53rel

用1000 μL移液枪和10 mL容量瓶将标准储备液逐级稀释，使用2次1000 μL移液枪及2次10 mL容量瓶，稀释过程中引入的不确定度如下：

由此可得，标准溶液(外标)的配制引入的标准不确定度如下：

2.3.6 标准物质(内标)的加入量引入的不确定度u6rel

2.3.6.1 标准物质纯度的标准不确定度u61rel

标准物质(内标)纯度的相对标准不确定度见表4。

表4 固体废物样品分析Table 4 Sample analysis of solid waste

表4 标准物质(内标)纯度的相对标准不确定度Table 4 Relative standard uncertainties of purity of internal standard reference materials

2.3.6.2 标准物质(内标)称量引入的不确定度u62rel

标准物质(内标)称量用十万分之一天平，其检定证书提供的扩展不确定度U=0.017 mg，k=2。称量标准品时天平引入的不确定度为：

2.3.6.3 标准物质(内标)定容引入的不确定度u63rel

2.3.6.4 内标稀释过程引入的标准不确定度u64rel

内标稀释过程采用100 μL移液枪、1000 μL移液枪和10 mL容量瓶将内标储备液稀释，稀释过程使用1次100 μL移液枪、1次1000 μL移液枪和2次10 mL容量瓶，稀释过程中引入的不确定度：

2.3.6.5 内标加入引入的标准不确定度u65rel

由此可得，由内标标准物质的加入量引入的不确定度如下：

2.3.7 提取回收率引入的标准不确定度u7rel

表5 样品加标回收的不确定度Table 5 Uncertainties of sample recovery

2.3.8 液质联用仪校准引入的标准不确定度u8rel

2.4 评定测量量之间的相互关系

测量量之间相互独立，没有任何相关性。

2.5 合成不确定度及检测结果表述

由上述所得数据代入公式(2)，合成不确定度结果如表6所示。

表6 合成标准不确定度Table 6 Composite the standard uncertainties

2.6 计算扩展不确定度

取包含因子k=2(95%置信概率)，其扩展不确定度表示，结果见表7。

表7 不确定度评定结果Table 7 Evaluation results of uncertainties

3 结 论

通过以上不确定度评定分析得知，利用液相色谱串联质谱仪测定水产品中磺胺类代谢物含量的实验中，影响测量结果的不确定度主要来源于液相色谱串联质谱仪的校准、标准曲线拟合校准和提取回收率，其他因素影响不大。实验过程中可通过优化标准系列工作溶液配置、控制提取回收率来保证检测结果的准确度。