抗妇炎胶囊中苦参的质量控制研究

姜 莲 王影超 廖 敏 许亚玲

贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004

抗妇炎胶囊收载于国家中成药标准汇编，中成药地方标准上升国家标准部分，由苦参、杠板归、黄柏、连翘、益母草等8味药材组成，具有活血化瘀、清热燥湿之功效。用于湿热下注型盆腔炎、阴道炎、慢性宫颈炎，症见赤白带下、阴痒、出血、痛经等症[1-2]。现行标准仅有苦参碱的TLC鉴别及苦参碱的HPLC含量测定，不能全面控制抗妇炎胶囊的质量，本实验增修了苦参、氧化苦参碱的TLC鉴别、氧化苦参碱的HPLC含量测定，以期较全面地对苦参进行质量控制。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津 LC2010 液相色谱仪；KQ-500DB型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司);硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板(批号：20140408)及自制硅胶G薄层板。

1.2 材料 抗妇炎胶囊由贵州远程制药有限责任公司提供(生产批号：20171031、20171121、20180251、20180121)；苦参对照药材(121019-201006)、苦参碱对照品(110821-200711)、氧化苦参碱对照品(110821-200711)均来源于中国药品生物制品检定所；乙腈、无水乙醇均为色谱纯，甲醇、磷酸、二氯甲烷、三氯甲烷、氨水、乙醇均为分析纯，水(UPW-50N型超净水器制备超纯水)。

2 方法与结果

2.1 苦参TLC鉴别 取本品内容物2 g，加浓氨试液0.3 mL，再加二氯甲烷25 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取苦参碱对照品及氧化苦参碱对照品，分别加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例称取除苦参外其他药材适量，制成缺苦参的阴性对照样品，同法制备缺苦参的阴性对照溶液。照薄层色谱法[3]试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各2～3 μL、对照品溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5∶0.6∶0.3)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，预饱和15 min，展开，取出，晾干,喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且缺苦参的阴性对照无干扰。如图1所示。

2.2 苦参碱、氧化苦参碱含量测定[4-6]

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Angilent NH2(250 mm×4.6 mm 5μm)；流动相：乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(82∶9∶9)；检测波长为220 nm；柱温30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量10 μL。理论板数按氧化苦参碱峰计算，应不低于2000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL各含70 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1 mL使湿润，放置5 min，精密加入三氯甲烷25 mL，称定重量，密塞，超声处理(500W 40 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.4 阴性供试品溶液的制备 取缺苦参阴性样品，按照2.2.3制备成阴性供试品溶液，即得。

2.2.5 专属性考察 取苦参碱、氧化苦参碱对照品溶液、抗妇炎胶囊供试品溶液及阴性供试品溶液各10 μL，按照“2.2.1”色谱条件注入液相色谱仪，供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，且阴性无干扰，如图2所示。

2.2.6 线性关系考察 精密取混合对照品(苦参碱70 μg/mL、氧化苦参碱70 μg/mL)1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归计算，绘制工作曲线(图1～2)，得出苦参碱线性回归方程为：Y=508698X+1568.8,r=0.9999；氧化苦参碱线性回归方程为：Y=508730X+1568.8,r=0.9999。苦参碱在0.07030～1.75750 μg、氧化苦参碱在0.06926～1.73155 μg的范围内线性关系良好。

2.2.7 精密度试验 精密量取同一混合对照品10 μL，连续进样6次，记录色谱图峰面积，苦参碱对照品的峰面积RSD为0.2%，氧化苦参碱对照品的峰面积RSD为0.6%，结果说明仪器精密度良好。

2.2.8 重复性试验 取同一批抗妇炎胶囊，按“2.2.3”供试品溶液制备方法制备6份，按“2.2.1”色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，结果测定苦参碱平均含量为3.9464 mg/g,RSD为1.8%；氧化苦参碱平均含量3.6970 mg/g,RSD为2.2%，表明方法重复性良好。

2.2.9 稳定性试验 取同一批抗妇炎胶囊，按“2.2.1”色谱条件，于0 h、2 h、8 h、12 h、18 h、24 h，测定苦参碱、氧化苦参碱的峰面积，苦参碱RSD为0.6%、氧化苦参碱RSD为0.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.10 回收率试验 取已测定含量的抗妇炎胶囊(苦参碱平均含量3.8847 mg/g；氧化苦参碱平均含量3.5853 mg/g)0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1 mL使湿润，放置5 min，精密加入含苦参碱对照品(0.03897 mg/mL)、氧化苦参碱对照品(0.03599 mg/mL)的三氯甲烷混合溶液25 mL，按“2.2.1”色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，计算回收率，结果见表1、表2。

表2 氧化苦参碱回收率试验数据 (n=6)

表1 苦参碱回收率试验数据 (n=6)

2.2.11 样品测定 取3批抗妇炎胶囊样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”色谱条件测定苦参碱、氧化苦参碱的含量，结果见表3。

表3 样品测定结果

3 讨论

康妇炎胶囊的现行标准中苦参的质量控制仅有苦参碱的TLC鉴别及HPLC鉴别，专属性较差，且薄层鉴别中提取方法及展开系统均含有对人体的毒害作用的三氯甲烷试剂，经考察并验证，本文薄层鉴别采用毒性较小的二氯甲烷替代三氯甲烷进行实验，方法可行；含量测定在考察提取溶剂时，二氯甲烷的提取效率明显低于三氯甲烷，故暂不考虑替代。故本次研究，薄层方法中增加苦参对照药材及氧化苦参碱对照品，含量测定方法增加了氧化苦参碱指标成分，为进一步控制苦参质量提出依据。

现行标准苦参含量测定色谱柱以“十八烷基硅烷键合硅胶”为填充剂，该方法很难得到较好的峰形，且重现性较差。实验选用专属性较强的“氨基硅烷键合硅胶”为填充剂的色谱柱进行考察，以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(82∶9∶9)为流动相，结果表明采用氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱专属性强、分离效果较好、重现性好。