结核感染T细胞斑点试验在疑似结核感染的应用价值分析*

广东省博罗县人民医院呼吸内科 (广东 惠州 516100)

胡春荣 黎小惠

结核感染是由结核分歧杆菌所致，会对肺以及淋巴细胞，以及中枢神经、泌尿系统等造成影响。受到生态环境和社会环境逐渐恶化的影响，世界各国结核病的发病率有了明显上升，并且呈现出一定的年轻化趋势[1]。相关数据调查显示，全球结核感染患者数量已经超过了20亿，并且每年新增结核感染人数多达800～1000万，死亡数为200～300万[2]。我国是结核感染疫情非常严重的国家，临床防治形势不容乐观。针对结核病的防治，应做到早诊断、早发现、早治疗的“三早”原则。根据世界卫生组织(WHO)的数据调查发现，结核病的早期平均诊断率在40%以下，而结核病防治水平较高的国家也仅为50%左右[3]。因此，寻找一种更为简单、便捷、诊断准确率高的早期诊断手段，对结核病的防治有着十分重要的意义。近年来，T细胞斑点试验在早期结核感染的诊断检查中逐渐被应用，尽管受到了临床的一致认可，但是其诊断效果如何，仍旧值得探究[4]。为此，本研究将我院2018年1月～2019年7月收治的60例疑似结核感染患者纳入样本，对T细胞斑点试验的诊断检查效果进行分析。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2018年1月～2019年7月视为病例收集时间段，纳入期间在我院接受诊治的疑似结核感染患者60例进行研究。全部患者中，男性34例(56.67%)，女性26例(43.33%)；年龄15～88岁，平均年龄(53.16±2.58)岁。病程最长2个月，最短4d，平均病程(25.36±5.48)d。根据细菌培养结果，证实为结核感染患者39例(65.00%)，非结核感染患者21例(35.00%)，结核感染患者和非结核感染患者在性别、年龄和病程等资料方面，经统计学分析比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。结核感染的诊断标准[5]：(1)若抗酸杆菌涂片培养结果显示阳性，则为肯定结核性疾病；(2)若抗酸杆菌涂片培养为阴性，但经结合临床表现观察、影像学检查以及病理学检查等支持为结核杆菌感染，同时抗结核治疗效果明显，可判定为疑似结核性疾病。(3)若与肯定性结核疾病和疑似结核性疾病均不符，则Wie非结核感染。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂：二氧化碳培养箱(力康HealForce)、T细胞斑点实验试剂盒(默沙克生物有限公司)、酶联免疫荧光斑点分析仪(博科BIOBASE)、淋巴细胞分离液(天津美德太平洋科技有限公司)、细胞培养液(北京谱析科技有限公司)。

1.2.2 T细胞斑点实验：于清晨空腹状态下，抽取患者静脉血5ml并行抗凝处理，而进行3000r/min离心处理10min，分离出外周血中的单个核细胞，将其分别加入不同的阴性对照物细胞培养液，阳性对照物(植物血凝素)。A抗原早期分泌性靶抗原6，而B抗原滤液培养蛋白10，在已包被抗血清γ-干扰素抗体微量板四个孔中，之后将2×105浓度的单个核细胞一次性加入每个孔中，使用二氧化碳培养箱进行培养，设置培养温度为37℃。使用磷酸缓冲盐溶液进行洗脱处理，完成之后将碱性磷酸酶标记的抗γ扰素抗体加入其中，再次培养2h(室温下)，再次重复磷酸缓冲盐溶液洗脱，发现显色，而后最后用磷酸缓冲盐溶液终止反应，最后计算斑点的数量。阳性判定的标准[6]：孔点数测量2倍以上于阴性对照。

1.2.3 结核菌素实验：于前臂掌侧1/3皮位处，注射0.mlPPD，注射方法为孟都氏法注射，对平均浸润硬结直径进行准确测量，持续观察72h，记录期间患者的反应。

1.3 观察指标：记录T细胞斑点实验和结核菌素实验的诊断情况，同时比较T细胞斑点试验中结核和非结核感染诊断情况，主要比较内容包括诊断准确率、灵敏度和特异度。

1.4 统计学分析：采用SPSS18.0软件处理，计数资料行χ2检验，采用n(%)表示，计量资料行t检验，采用(±s)表示，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 T细胞斑点试验和结核菌素试验诊断情况的比较 在诊断准确率、灵敏度和特异度方面，T细胞斑点试验均高于结核菌素试验，差异有统计学意义(P＜0.05)。如表1所示。

2.2 T细胞斑点试验中结核和非结核感染诊断的比较 在诊断准确率、灵敏度和特异度方面，T细胞斑点试验在结核和非结核诊断相比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。如表2所示。

3 讨 论

结核病是临床作为常见的传染性疾病之一，传染率非常高，会严重影响患者的日常生活和工作，降低患者的生存质量，甚至威胁患者的生命安全。早期及时的诊治，是改善结核病患者疾病状态的重要手段，也是结核病防治的必然要求。目前，临床对于结核感染的诊断试验中，涂片镜检法、结核菌素试验、影像学诊断、分离培养方等较为常见，但均存在着各自的不足和局限。比如，涂片镜检法、影像学诊断等为例，检测的准确度并不是非常高，仍有较大的提升空间。又比如，分离培养虽然为结核感染的“金标准”，具有较高的诊断准确率，但是该诊断法也存在一定的不足，如耗费的时间比较长，一般为6～8周，在一定程度上与结核感染的早期防治相背离[7]。因此，如何提升结核感染的诊断质量，应当从准确、快速、便捷等方面着手。

表1 T细胞斑点试验和结核菌素试验诊断情况的比较

表2 T细胞斑点试验中结核和非结核感染诊断的比较

T细胞斑点试验是一种相较于影像学检测、涂片镜检法、结核菌素试验等诊断手段更为新型的诊断检查方，在欧美国家的结核感染早期诊断检查中，已被广泛应用，已获准为早期筛查结核感染及结核潜伏感染的重要手段，但是在我国的开展还有进一步的改进和提升空间。T细胞斑点试验期月酶联免疫斑点技术，原理是以结核分枝杆菌特异性抗原对单个核细胞进行刺激IFN-γ分泌，检测抗原特异性T淋巴细胞免疫应答，是以单细胞水平检测进行的细胞免疫学技 术[8]。实践证明，T细胞斑点试验操作起来，难度并不大，比较的简单便捷，价格比较低廉，试验周期比较短，通常24h内即可生成报告。本研究结果显示，与结核菌素试验相比较，T细胞斑点试验的准确率、灵敏度和特异度均更高(P＜0.05)，另外在结核感染和非结核感染患者的诊断检查中，T细胞斑点试验的准确性、灵敏度和特异度相比较，均保持在较高水平，差异无统计学意义(P＞0.05)，说明了T细胞斑点试验诊断的准确性，在灵敏度和特异度方面有较高的保障。

综上所述，疑似结核感染患者早期诊断时，采用T细胞斑点试验诊断，准确率、灵敏度和特异度均比较高，值得临床推广和应用。