亚洲人群干扰素调节因子6基因多态性与非综合征型唇腭裂相关性研究的Meta分析

侯亚丽 马利

山东大学附属省立医院口腔颌面外科 济南 250021

非综合征型唇腭裂（non-syndromic cleft lip with or without cleft palate）是最常见的先天性畸形之一，发病率因地理来源和种族的不同而不同，发病率为1/1000～1/500[1]。非综合征型唇腭裂的病因复杂，既涉及遗传影响，又涉及不同的环境相互作用。

近年来的研究[2-3]表明，在多个群体中非综合征型唇腭裂与基因位点有关，其中最有效的基因是编码干扰素调节因子（interferon regulatory factor，IRF）6的基因。IRF6位于1q32.3-q41，在颅面发育过程中起重要作用。2个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点（rs2235371和rs642961）与非综合征型唇腭裂显著相关[4]。在亚洲和南美人群中的唇腭裂病例-亲本三系中，有明显的G等位基因在IRF6 820G→A标记（rs2235371）上过度传递的证据[5-6]。该变异体在IRF6的蛋白质结合结构域（Smad-IRF结合结构域，Smir）的第274位氨基酸上由缬氨酸（valine，Val，V）改变为异亮氨酸（isoleucine，Ile，I），即V274I[7-8]。先前的研究发现，rs642961破坏了AP-2α结合位点，该位点通常作为IRF6的增强剂，并且能够在所调查的不同样本中证明rs642961与裂隙类型之间存在高度显著的关联。A等位基因仅与唇裂有关，而与非综合征型腭裂无关[4,9]。虽然已经有很多学者试图寻找该基因与非综合征型唇腭裂的相关性，但这种单核苷酸多态性的生物学机制尚不清楚。因此，为了探讨rs2235371和rs642961多态性与非综合征型唇腭裂在亚洲人群中的相关性，笔者对相关文献进行了Meta分析。

1 材料和方法

1.1 检索策略

检索了Embase、PubMed、Cochrane、知网和万方数据库。检索式为：（irf6、irf-6、interferon regulatory factor 6或者interferon regulation factor-6）+（polymorphism、gene、allele或者SNP）+（NSCL/P、cleft lip、CL、cleft palate、CP、CPO或者“non-syndromic cleft”）。只包括以英文或中文发表的研究。最后一次搜索于2019年4月20日更新。

1.2 纳入和排除标准

2位评审者通过查阅所有研究的标题和摘要，独立地选择研究。

纳入标准：1）亚洲人群中非综合征型唇腭裂病例对照研究；2）IRF6基因多态性；3）已有足够资料；4）已发表英文和中文研究；5）对照组基因型分布应符合Hardy-Weinberg平衡；6）基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。

排除标准：1）基因型频率无详细资料；2）以家庭为基础的研究。

1.3 数据提取

2位评审者根据纳入和排除标准提取了已确定研究的数据。提取过程中的分歧通过讨论解决。提取的数据包括第一作者、参与者的种族、地区、出版年份、病例和对照的数量以及病例和对照的基因型数量。

1.4 统计分析

计算比值比（odds ratio，OR）及其95%置信区间（confidence interval，CI），以评估IRF6基因多态性与非综合征型唇腭裂风险的关系。采用按基因型的方法评估非综合征型唇腭裂的变异效应。用Z检验估计合并OR的统计学意义。异质性评价采用Cochrane's q检验和I2统计量。当存在异质性（P＜0.10或I2＞50%）时，采用Der Simonia &Laird随机效应模型对OR进行合并，否则采用固定效应模型。敏感性分析也被用来评估单项研究对总体估计的影响。出版偏差评估采用Egger试验和漏斗图。使用Stata12.0（Stata公司，美国）进行分析。P＜0.05被认为有统计学意义，但异质性测试除外，使用P＜0.10的水平。

2 结果

2.1 纳入研究

根据检索式，筛选出了符合研究条件的23项研究。在回顾全文之后，排除了5项研究，其中1项研究是基于家庭的研究，2项研究集中在其他多态性上，2项研究没有足够的基因型数据。因此，本研究共选取18项研究进行Meta分析。在这些研究中，对13项研究[6-18]进行了rs2235371的Meta分析，对7项研究[4,9,14,19-22]进行了rs642961的Meta分析。所有研究均为病例对照设计。表1列出了符合条件的研究的特点。

表2汇总了IRF6 rs2235371与非综合征型唇腭裂风险之间关联性的Meta分析的结果。IRF6 rs2235371与唇腭裂风险在杂合子比较中有显著性差异（GA与GG：OR1=0.77，95% CI=0.73～0.81，P=0.859，I2=0；AA与GG：OR2=0.53，95%CI=0.41～0.70，P=0.012，I2=53.0%；GA+AA与GG：OR3=0.77，95% CI=0.72～0.81，P=0.858，I2=0）。在杂合子比较模型（GA与GG、AA与GG、GA+AA与GG）下，IRF6 rs2235371与唇腭裂风险关联的Meta分析结果也分别显示在图1和表2中。

表1 纳入研究的相关信息Tab 1 Characteristics of included studies

图1 IRF6 rs2235371森林图Fig 1 Forest plots for rs2235371of IRF6

表2 rs2235371位点IRF6基因型频率及基因型效应分析Tab 2 Genotype frequencies and genotype effects for IRF6 at SNP rs2235371

图2和表3分别显示了在杂合子比较模型下IRF6 rs642961与唇腭裂风险（GA与GG、AA与GG、GA+AA与GG）之间关联的Meta分析结果。

图2 IRF6 rs642961森林图Fig 2 Forest plots for rs642961of IRF6

表3 rs642961位点IRF6基因型频率及基因型效应分析Tab 3 Genotype frequencies and genotype effects for IRF6 at SNP rs642961

表3汇总了非综合征型唇腭裂组与对照组间的基因型频率以及所有研究的OR。IRF6 rs642961与唇腭裂风险在杂合子比较中有显著性差异（GA与GG：OR1=1.34，95% CI=1.09～1.65，P=0.002，I2=70.5%；AA与GG：OR2=3.56，95%CI=2.14～5.92，P=0.057，I2=51.0%；GA+AA与GG：OR3=1.45，95% CI=1.19～1.77，P=0.001，I2=74.6%）。

2.2 统计分析

用敏感性分析检验总体OR的稳定性。省略每一项合格的研究并不会显著改变结果，这表明没有任何一项研究可以影响合并的OR（图3、4）。

图3 IRF6 rs2235371的敏感性分析Fig 3 Sensitivity analysis for rs2235371of IRF6

2.3 发表偏倚

漏斗图和Egger试验均未检测到发表偏倚。漏斗图的形状近似对称。Egger检验结果无统计学意义（均P＞0.05）。图5、6显示了基因型比较下的漏斗图（GA与GG、AA与GG、GA+AA与GG）。

图4 IRF6 rs642961的敏感性分析Fig 4 Sensitivity analysis for rs642961of IRF6

3 讨论

虽然一些独立的研究通过等位基因效应和基因型效应探讨了IRF6基因（单核苷酸多态性位点rs2235371和rs642961）对非综合征型唇腭裂的影响，但在亚洲人群中，IRF6多态性与非综合征型唇腭裂之间的关系尚未阐明。因此，在本Meta分析中，笔者研究了IRF6多态性与非综合征型唇腭裂的关系，包括18项病例对照研究，并选择了2个单核苷酸多态性位点（rs2235371和rs642961）。结果表明，亚洲人rs2235371、rs642961与非综合征型唇腭裂风险在GA与GG、AA与GG、GA+AA与GG之间存在明显的关联。IRF6 G/A单倍型（rs2235371/rs642961）增加了巴西人口患口面裂的风险[23]。除了这些研究外，还有2项研究[5-6]分析了亚洲和南美人群，结果表明非综合征型唇腭裂与IRF6中rs2235371（V274I）多态性之间存在显著关联。在Zucchero等[5]的研究中，在南美人群中未发现单纯性腭裂与V等位基因的关联性；但在南美和亚洲人群中，非综合征型唇腭裂与V等位基因的关联以及单纯性唇裂与V等位基因的关联具有高度显著性意义[5-6]，提示IRF6基因多态性与非综合征型唇腭裂具有明显的相关性。

在中国人群中，研究[24-25]表明IRF6变异体rs2235371和rs642961是非综合征型唇腭裂的病因，但rs2235371可能比rs642961有更重要的作用。Larrabee等[26]研究指出，IRF6的共同变异是IRF6与非综合征型唇腭裂之间关联的原因，rs2235371在洪都拉斯人群中与非综合征型唇腭裂相关。此外，有研究[27]表明，在伊朗人群中IRF6 rs2235371是非综合征型唇腭裂的危险因素。因此，这些研究表明，不同的IRF6多态性在唇腭裂的发生中起着不同的作用。结果表明，rs642961是亚洲人群非综合征型唇腭裂的危险因素，这一研究结果与以前的研究结果不一致。

图5 IRF6 rs2235371的漏斗图Fig 5 Funnel plots for rs2235371of IRF6

图6 IRF6 rs642961的漏斗图Fig 6 Funnel plots for rs642961of IRF6

通过本Meta分析，笔者调查了亚洲人群中IRF6多态性与非综合征型唇腭裂的关系，但本Meta分析仍存在一些局限性。首先，样本量小，可能会降低统计效能，并得出有偏差的结果。对于rs642961，由于纳入的研究少于10项研究，没有评估出版偏倚。其次，2位作者分别检索了符合条件的研究，但一些可能的研究被称为“灰色文献”和其他语言文献未被纳入研究。第三，非综合征型唇腭裂是一种复杂的畸形，环境因素也与非综合征型唇腭裂有关。然而，笔者的初步研究只探讨了基因多态性与非综合征型唇腭裂的关系，而没有进行基因与环境的交互作用研究。

4 结论

总之，笔者的分析表明，IRF6 rs642961多态性可能会增加非综合征型唇腭裂在亚洲人群中的风险，而rs2235371可能没有显著的关联。为了获得更确切的结果，需要进行更多相关的病例对照研究，以获得更精确的结果。