肝内胆管细胞癌患者EGFR和Her-2表达水平评估预后的应用价值

李银珍 杜日昌 丁宇 徐彤 廖罗飞

肝内胆管细胞癌是起源于二级胆管及胆管末梢系统的一种恶性肿瘤，在原发性肝癌中占比达到10～15%[1]。有研究指出在肝内胆管细胞癌中，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)阳性表达明显，可能有与鉴别良性、恶性病变、肝癌分期等相关[2]。人表皮生长因子受体-2(human epidermal frowth factor receptor 2, Her-2)近年被作为肿瘤靶向治疗的重要靶点之一，其表达亦可能与预后相关[3]。本次研究尝试对肝内胆管细胞癌患者进行(EGFR)、Her-2检测，并结合其临床信息探讨EGFR、Her-2在肝内胆管细胞癌预后评估中的价值，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

回顾性分析我院2009年1月—2017年12月收治的77例肝内胆管细胞癌患者的临床资料，依据患者预后情况分为预后良好组35例与预后不良组42例(生存时间≥1年为预后良好，生存时间<1年为预后不良)。其中男45例，女32例；>60岁者44例；淋巴结转移50例；肿瘤直径>5cm 37例；肿瘤数目：单发53例，多发24例；TNM分期：Ⅰ或Ⅱ级37例，Ⅲ或Ⅳ级40例。本次研究经我院伦理委员会批准后实施。

二、纳入与排除标准

1. 纳入标准：①均经超声等影像学检查及病理学检查确诊为肝内胆管细胞癌；②35～75岁；③临床资料完善。

2. 排除标准：①预计生存时间<3个月；②伴有胆管结石、血吸虫病等其他疾病；③伴有严重心脑血管疾病者；④入院前伴有其他恶性肿瘤。

三、方法

所有患者均于我院行根治性手术治疗；术前抽取清晨空腹静脉血7mL，离心后检测乙肝病毒基因(HBV-DNA)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、总胆红素(TBil)水平；术后选取切除组织常规石蜡包埋后制成3 μm厚的连续切片，经免疫组化染色后检测EGFR、Her-2蛋白表达情况；单因素分析肝内胆管细胞癌患者预后情况与性别、年龄、肿瘤数目、淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期、HBV DNA、AFP、CEA、TBil、EGFR、Her-2间的关系，同时将有差异的信息纳入logistic模型行多因素分析。

四、所用试剂及仪器

HBV DNA使用7500美国ABI基因扩增分析仪以PCR法检测；AFP使用罗氏601型电化学发光仪检测，试剂盒由上海罗氏诊断产品有限公司生产，当AFP>20 ng/mL时判定为阳性；CEA以电化学发光法检测，试剂盒由罗氏公司生产，当CEA>5 ng/mL时判定为阳性；TBil使用日立全自动生化分析仪以速率法检测，试剂盒由中生北控科技股份有限公司生产，当TBil>20 μmol/L判定为阳性。EGFR、Her-2所用一抗购自罗氏诊断，使用罗氏VENTANA全自动免疫组化仪进行检测。

五、EGFR、Her-2检测及判定

石蜡切片严格按照一抗说明书进行免疫组化染色，结果判定由两位高年资病理医师以盲评法阅片后得出。

EGFR、Her-2免疫组化结果判读标准：0级为细胞无染色，1+为癌细胞的任意部分中微弱的细胞膜部分染色，2+为完整细胞膜弱染色>癌细胞的10%，3+为完整细胞膜强染色>癌细胞的10%。0级和1+判为阴性，2+判为不确定，3+判为阳性。对2+的标本用FISH的方法进行阴阳性的确认。0级为细胞无染色，1+为癌细胞的任意部分中微弱的细胞膜部分染色，2+为完整细胞膜弱染色>癌细胞的10%，3+为完整细胞膜强染色>癌细胞的10%。0级和1+判为阴性，3+判为阳性。

六、统计学方法

结 果

一、单因素生存分析结果

经单因素分析，预后不良组：淋巴结转移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ级、EGFR阳性、Her-2阳性患者显著多于预后良好组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

二、肝内胆管细胞癌患者预后不良的多因素logistic回归分析

将有差异的信息纳入多因素logistic回归分析模型，并行量化赋值，见表2，结果指出淋巴结转移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ级、EGFR阳性、Her-2阳性是肝内胆管细胞癌患者预后不良的危险因素(P<0.05)。见表3。

表1 患者预后情况与基础资料、实验室指标间的关系 [n(%)]

表2 肝内胆管细胞癌患者预后不良的多因素logistic回归分析

讨 论

本研究结果显示，预后不良组淋巴结转移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ级、EGFR阳性、Her-2阳性患者显著多于预后良好组，表明淋巴结转移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ级、EGFR阳性、Her-2阳性可能对患者预后产生不良影响。牛福勇等[4]研究胆管细胞癌患者预后的影响因素时指出淋巴结转移、TNM分期与胆管细胞癌的预后密切相关，与本次研究结果基本相符。本次研究中预后不良组EGFR阳性、Her-2阳性患者显著多于预后良好患者，笔者分析具体原因如下：①EGFR具有酪氨酸激酶活性，具有促进细胞分裂、增殖的作用，而肿瘤生长则是不断繁殖、浸润的过程[5-6]，当患者EGFR为阳性时体内EGFR呈高表达，可能促使肿瘤细胞繁殖，加剧肿瘤细胞的浸润，影响患者预后。

经多因素logistic回归分析证实淋巴结转移、TNM分期Ⅲ或Ⅳ级、EGFR阳性、Her-2阳性是肝内胆管细胞癌患者预后不良的危险因素，可见EGFR、Her-2在肝内胆管细胞癌患者的预后评估具有重要的意义。另外本次研究仍存在不足，如受样本量限制纳入研究对象较少，可能对本次研究结果的推广产生一定影响，因此后期仍期待扩大样本量继续深入研究，为肝内胆管细胞癌的治疗及预后评估提供更充实、可靠的临床依据。