海南州牛A型口蹄疫免疫抗体监测结果分析

史慧芳

海南州牛A型口蹄疫免疫抗体监测结果分析

史慧芳

（青海省海南州动物疫病预防控制中心 青海 共和 813000）

近10年来，青海省仅于2013年3月15日在西宁市城北区二十里堡镇一养殖场发生一起种牛A型口蹄疫疫情。经国家口蹄疫参考实验室确诊，引起该起疫情的病毒毒株为Asia拓扑型Sea-97(东南亚-97)毒株。参考实验室认为，该毒株与我国A型历史毒株同源性仅为76%~78%，而与2010~ 2012年泰国、越南等东南亚国家毒株同源性在97%以上，因此认为该毒株来自东南亚，是由境外传入的，而非我国国内存在的A型历史毒株衍化而来[1]。海南州动物疫病预防控制中心根据《青海省2019年无规定动物疫病区监测方案》的通知要求，对五县牛A型口蹄疫免疫抗体进行监测。为进一步了解本州牛A型口蹄疫免疫抗体效果，笔者现对监测结果进行整合分析，为本州牛A型口蹄疫免疫工作提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 样品采集 以春季防疫、秋季防疫为时间段，采集海南州共和县、贵德县、贵南县、兴海县、同德县散养户、规模养殖场牛血各180份，五县共计900份。

1.2 准备工作 采用型号TDD6M离心机分离900份牛血清，分装入1.5ml离心管，以N1－N90为检测顺序进行编号，4℃冷藏检测备用。

1.3 试剂盒 口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，批号20191101103-1，生产单位中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.4 检测方法 采用液相阻断ELISA的实验方法进行检测：（1）稀释血清：在U型反应板上A1~A10孔，75µlPBST加5µl被检血清，稀释至1:512，在第11列稀释阳性对照血清，从1:2(即A11孔50µlPBST加50µl阳性对照血清)稀释至1:256；A12~B12孔稀释阴性对照血清，从1:2稀释至1:4；E12~H12孔为病毒抗原对照孔。（2）加病毒抗原：将病毒抗原用PBST稀释至1:10，以50µl/孔的量加入到被检血清、阴阳性对照血清的每一稀释孔内，4孔病毒抗原对照孔仅加入100µl/稀释至1:10的病毒抗原。封板，振荡，4℃静置过夜或37℃温育90min。（3）将抗原抗体混合液从U型反应板上按次序转移至已包被口蹄疫A型兔抗的ELISA板上，50µl/孔，封板，37℃温育60min。（4）用PBST连续洗板3~5次，拍干，按50µl/孔加口蹄疫A型豚鼠抗体工作液(红色)，封板，37℃温育30min。（5）同上洗板3~5次，拍干，按50µl/孔加兔抗豚鼠IgG-HRP工作液(蓝色)，封板，37℃温育30min。（6）同上洗板3~5次，拍干。将TMB底物A溶液和B溶液以1:1比例混匀，加入混匀后的底物溶液50µl/孔，置37℃显色15min。（7）显色反应结束后，加终止液50µl/孔，终止反应，在酶标仪上读取D450nm值，计算结果。

2 结果

检测共和县牛血清180份，阳性135份，阳性率为75%；贵德县牛血清180份，阳性67份，阳性率为37.22%；贵南县牛血清180份，阳性105份，阳性率为58.33%；兴海县牛血清180份，阳性159份，阳性率为88.33%；同德县牛血清180份，阳性116份，阳性率为64.44%。由附图可清楚地观察到五县监测结果的差异。

附图 海南州牛A型口蹄疫检测结果

3 讨论与小结

3.1 不同县免疫效果的差异分析 检测结果显示，海南州五县中，兴海县牛A型口蹄疫阳性数最多，阳性率最高，贵德县阳性数最少，阳性率最低。表明兴海县牛A型口蹄疫免疫抗体效果最高，贵德县效果最低，共和县效果良好，贵南县和同德县效果一般，需要加强免疫。笔者主要就监测的兴海县和贵德县免疫效果差异较大的原因如下作一分析：（1）海南州除贵德县以外，其他四县为牧区，贵德县为农区，农区散养户的牛基数小，多数情况为每户1~3头牛，存在“护犊”心理，且农户对防疫工作抵触心理较强，认为施针免疫的过程中，牛会受到惊吓，导致精神委顿，食欲不佳，出现不吃料或吃料少的情况。所以贵德县防疫员实施防疫过程较其他四县困难。此外，贵德县基层兽医站设施简陋，设备紧缺，存在基本防疫物资缺货，防疫设备老旧，使用不灵活或无法使用的情况。例如：大部分乡镇兽医站使用的高速离心机为十多年前购置的老式离心机，运转生锈或者无法运转，部分乡镇兽医站需借用卫生院的离心设备分离血清，给基层工作的顺利进行带来了一定困难。（2）海南州兴海县为牧区，牛的养殖基数大，牦牛专业合作社数量多，规模大，且农牧民对于防疫工作配合度高，支持力度大，所以防疫工作效果好，此外兴海县村级防疫员的工资津贴得到了一定的落实，大大增加了村级防疫员的工作积极性，对于防疫工作也大力支持，高度配合。这在一定程度上也是决定兴海县免疫工作成效优良的一个重要因素。

3.2 建议 （1）贵德县基层兽医站需加强宣传力度。对于农户存在抵触心理的情况，根本原因还是宣传不到位，宣传力度小，农户意识不到免疫的重要性。要通过分发宣传册，走街访户，“乡村大喇叭”，微信公众号等方式，将防疫工作的重要性和益处宣传到每家每户，在一定程度上让农户减轻对免疫工作的抵触心理，从而支持并配合兽医工作人员的防疫工作；（2）加强免疫工作。贵德县的牛A型口蹄疫免疫抗体水平低，所以需要进行补免，在下一年度春季防疫和秋季防疫中需加大免疫力度，增强免疫密度，提升整体免疫水平；（3）上级兽医管理部门需增强扶持力度。乡镇兽医站条件简陋，设备老旧，物资匮乏，村级防疫员积极性不高，需要上级兽医管理部门大力支持，下拨相应的经费，分配防疫物资，落实村级防疫员的工资津贴等，以便于基层兽医站顺利开展各项工作；（4）上级管理部门应加强各县沟通交流。以提升海南州整体免疫效果为目标，上级管理部门应大力开展经验交流会等活动，让各县各乡镇兽医站参与其中，相互交流工作经验，借鉴工作成效优良地区的经验，认识到各县工作方式的差异和自身改进的方向，加强沟通交流，共同学习进步。

3.3 小结 通过监测数据的分析，可以认识到自身免疫工作的优点和劣势，免疫效果良好的地区应继续保持，在维持当下免疫水平的基础上争取更上一层楼。免疫效果落后的地区应借鉴优势地区的方式、方法，结合自身地域特点，加强免疫工作，提升免疫水平，争取向其他优良地区看齐。牛A型口蹄疫是疫病监测任务的重点，提升海南州整体免疫水平，做好免疫工作，是畜牧兽医工作者义不容辞的责任，也是保障牛羊等牲畜健康生长的重要一环。

[1] 青海省动物疫病预防控制中心组编. 青海省主要动物疫病流行病学调查(2006-2015年)[M]. 北京: 中国农业出版社, 2018, 53.

（2020–04–08）

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1007-1733(2020)06-0036-02